动物细胞融合与单克隆抗体 (4).ppt
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1、关于动物细胞融合与单克隆抗体 (4)现在学习的是第1页,共29页2.2 2.2 动物细胞工程动物细胞工程现在学习的是第2页,共29页一、动物细胞融合(细胞杂交)1、概念:指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果:形成单核的杂交细胞3、原理:细胞膜的流动性4、诱导方法物理法:离心、振动、电激化学法:聚乙二醇(PEG)生物法:灭活的病毒现在学习的是第3页,共29页 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合,不灭质分子重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合,不灭活的话会感染细胞,而不能诱导细胞融合。活的话会感
2、染细胞,而不能诱导细胞融合。现在学习的是第4页,共29页动物细胞融合过程动物细胞融合过程现在学习的是第5页,共29页5、过程:动物细胞A动物细胞B诱导,融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂(膜融合、质融合)(核融合)注意:动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起,让它们随机融合后,再从中筛选杂交细胞现在学习的是第6页,共29页6、意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交(种间、属间、科间、动植物之间)成为可能。7、应用:成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体现在学习的是第7页,共29页动物细胞与植物细胞的差别:无细胞壁全能性受限制,不
3、能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同:不需去除细胞壁不能发育成新的动物个体现在学习的是第8页,共29页植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞融合的方法细胞融合的方法诱导方法诱导方法用途用途获得获得杂种植株杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞的全能性去除细胞壁去除细胞壁后诱导原后诱导原生质体融合生质体融合使细胞分散后诱导细胞使细胞分散后诱导细胞融合融合物理(离心、振荡、物理(离心、振荡、电刺激)电刺激)化学(聚乙二醇
4、)化学(聚乙二醇)物理、化学方法(同物理、化学方法(同左)左)灭活的病毒灭活的病毒主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体现在学习的是第9页,共29页1 1、抗体、抗体 1 1 . .概念:概念: 抗体是机体受抗原抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋的具有免疫功能的球蛋白白 。 2 2. . 来源:来源: B B淋巴细胞。淋巴细胞。现在学习的是第10页,共29页 B B淋巴细胞与抗体的关系:淋巴细胞与抗体的关系:B B淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体淋巴细胞受抗原刺激后,可以产生抗体。动物体内的动物体内的B
5、B淋巴细胞可以产生百万种以淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性上的抗体,每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。免疫作用。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。自主阅读自主阅读P52:传统的抗体的生产方法及传统的抗体的生产方法及缺陷是什么?怎样解决这个问题?缺陷是什么?怎样解决这个问题?现在学习的是第11页,共29页1 、单克隆、单克隆 由一个细胞经过无性繁殖由一个细胞经过无性繁殖(多次有丝分裂多次有丝分裂)形成形成的一个细胞群,叫一个克隆,即单克隆。的一个细胞群,叫一个克隆,即单克隆。2、单克隆抗体的概念2 、单克隆抗体、单克隆抗体 由一
6、个效应由一个效应B淋巴细胞经过无性繁殖形成的一淋巴细胞经过无性繁殖形成的一个细胞群产生的化学性质单一,特异性强的抗个细胞群产生的化学性质单一,特异性强的抗体,即单克隆抗体。体,即单克隆抗体。要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的要想获得大量的单一抗体,必须克隆单一的B淋巴细淋巴细胞,形成细胞群。胞,形成细胞群。3、原理:杂交瘤细胞具有两个亲本的特性,即能迅速大量增殖,又能足够数量的单一抗体。现在学习的是第12页,共29页单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、细胞融合、筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选,继续培养,
7、继续培养足够数量的、能产生特足够数量的、能产生特定抗体的细胞群定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体(选择性培养基)(选择性培养基)诱导其融合的诱导其融合的方法有哪些?方法有哪些?现在学习的是第13页,共29页4、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞( B-瘤细胞)克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体现在学习的是第14页,共29页6.单克隆抗体的应用:单克隆抗体的应用:特异性强、灵敏度高、产量大特异性强、灵敏度高、产量大 作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质,并与特作为诊断试剂:准确识别各
8、种抗原物质,并与特异性结合异性结合 优点:优点:准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物:制成运载药物:制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病:主要用于癌症治疗治疗疾病:主要用于癌症治疗5、单克隆抗体的特点:单克隆抗体的特点:现在学习的是第15页,共29页思考问题:思考问题:1 1、本过程利用了哪些原理?、本过程利用了哪些原理?免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理原理这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有传物质,不仅具有B B细胞分泌抗体的能力,而且细胞分泌抗体的能力,而且还有无
9、限增殖的本领,因而可以获得大量单克还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体隆抗体2 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合?细胞融合?现在学习的是第16页,共29页课堂小结课堂小结动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程两个过程两个过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒灭活病毒一个新细胞一个新细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势现在学习的是第17页,共29页1、动物细胞融合的目的中最重要的是、动物细胞融合的目的中最重
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