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1、-大花蕙兰繁殖技术-第 76 页大花蕙兰繁殖技术组织培养繁殖2009-4-10 03:36:22文章来源:大花蕙兰本文介绍了大花蕙兰组织培养繁殖技术,包括组培操作、培养和增殖、培养基配制等三个方面的内容。一、组培操作在春季24月大花蕙兰新芽萌发期,选长8厘米左右的新芽从基部与老假鳞茎相连接处切断。尽量采用露在外面,不被栽培材料埋起的芽。采芽前数日减少叶面喷水,可减少菌类污染。采下的芽先用肥皂和流动自来水冲洗1015分钟,然后在无菌条件下切去芽的上半段,并剥除最外面的12枚叶片,在95的酒精中蘸一下(12秒),立即浸泡在10的次氯酸钠水溶液中。10分钟,稍加摇动。取出后立即用无菌水冲洗,再剥去2
2、3片叶,放入5次氯酸钠水溶液中,5分钟后用无菌水冲洗,剥至留下最后一枚叶片。以生长点为中心,切取0.30.4立方厘米的组织块,浸泡在1次氯酸钠1分钟后取出,用无菌水冲洗数次,用解剖刀切成数块,分别放入已准备好的培养基上。每瓶最好只接种一块外植体,以免相互感染。切取生长点的大小依培养目的不同而异。在大花蕙兰茎尖培养中,再分裂增殖的部位不仅在生长点部分,生长点与叶原基的中间也有较强的分生能力。切取茎尖时带有两个左右的叶原基,即较大的组织块效果较好。二、培养和增殖接种好的培养瓶放在室温2025,有明亮的散射光或日光灯下1520厘米,光照强度在2000勒克斯左右,不可阳光直射,每天光照时间12小时左右
3、。46周后可在外植体周围形成许多球状物,即类原球茎。若把类原球茎分割或用棒压碎,再接种到培养基上,便会形成更多的类原球茎。每3040天分割一次,大花蕙兰每切一个芽可繁殖1万苗左右。把类原球茎接种到长苗培养基上,可以长芽生根,形成完整的幼苗。三、培养基配制MS培养基为基本培养基,附加NAA每升0.010.05毫克,促进分殖和叶片生长,不生根。当把NAA的浓度提高至0.10.2毫克/升时,即可形成类原球茎。也可以生根。另外,在培养基中不加NAA,添加一定数量的椰乳,对促进类原球茎增殖、幼芽的分化和生长健壮十分有益。据记载,改良的Morel培养基用于大花蕙兰类的茎尖培养,有较好的效果。配方如下:硝酸
4、钾(KN03) 1000毫克硝酸铵(NH4NO3) 650毫克氯化钙(CaCl22H2O) 440毫克硫酸镁(MgSO47H2O) 370毫克磷酸二氢钾(KH2PO4) 170毫克乙二胺四醋酸二钠(Na2-EDTA)37.3毫克硫酸锰(MnSO44H2O) 27.8毫克硼酸(H3BO3) 6.2毫克氯化锌(ZnCl2) 3.93毫克碘化钾(KI) 0.83毫克钼酸钠(Na2MoO42H2O)0.25毫克硫酸铜CuSO45H2O) 0.025毫克氯化钴(CoCl25H2O) 0.025毫克萘乙酸(NAA) 1毫克维生素B1 1毫克维生素B6 0.05毫克椰子水 200毫升葡萄糖 10克蔗糖 10
5、克蒸馏水 加至1000毫升注:本配方氢离子浓度为6309纳摩/升(pH5.2)改良的VW培养基适合于大花蕙兰类和卡特兰的茎尖培养,其组成成分如下:硝酸钾(KNO3) 525毫克硝酸铵(NH4NO3) 500毫克磷酸二氢钾(KH2PO4) 250毫克硫酸镁(MgSO47H2O) 250毫克酒石酸铁Fe(C4H4O6)32H2O28毫克硫酸锰(MnSO44H2O) 7.5毫克硼酸(H3BO3) 2毫克萘乙酸(NAA) 0.2毫克苯腺嘌呤 0.5毫克烟酸 1毫克椰子水 250毫升蔗糖 20克蒸馏水 加至1000毫升注:本配方氢离子浓度为6309纳摩/升(pH5.2)。京都培养基(狩野1968)花宝(
6、Hyponex NO.1)1号 3克蔗糖 35克琼脂 15克蒸馏水 1000毫升pH 5在兰科植物中,大花蕙兰属于容易进行茎尖培养的种类。若想得到脱毒种苗则较困难。必须切取的茎尖非常小,约在300微米以下。外植体越小越难成活。作为一般种苗繁殖用的培养,大花蕙兰通常分成三步。初代培养。使用MS或京都培养基,添加蛋白胨2克/升。目的是使采切的茎尖在培养基上能够成活,并在一定时间后产生少量的类原球茎。增殖培养。为使类原球茎(PLB)大量增殖,使用京都培养基,添加100200毫升/升椰汁。固体和液体培养交替。育苗培养。以培育出健壮的试管苗为目的。通常使用京都培养基或KC培养基,在培养基中添加10020
7、0克/升香蕉。以大花蕙兰开花植株茎尖和试管苗茎段或叶切段为外植体,诱导原球茎,并获得再生植株,筛选出原球茎诱导培养基:KC+5mg/L BA+0.5(或1.0)mg/L NAA+0.5%1%蔗糖;原球茎增殖培养基:KC+5 mg/L BA+0.1(或0.5)mg/LNAA+0.2%蛋白胨;分化及育苗培养基:KC+0.1 mg/L NAA+10%香蕉匀汁+0.1%活性炭。大花蕙兰组培苗落地前炼苗35天,可提高成活率6.7%13.4%,不同栽培基质影响大花蕙兰组培苗的落地成活率,水苔是较为理想的移栽基质,其移栽后3个月成活率达86.7%。瓶苗移栽后浇水时切忌过干或过湿,等新根长出每周宜进行一次根外
8、追肥大花蕙兰组织培养和快速繁殖技术 中国花卉协会 2007年09月03日来源:中国花卉协会收集【字体:大 中 小】 大花蕙兰()采用传统的分株繁殖,繁殖速度慢、周期长,尤其对国外新引进的优良品种,难以迅速占领市场、满足需求.大花蕙兰类组培快繁国内公开报道的仅限于虎头兰和水晶多芭等个别品种,因其各种、品种间培养有很大差异,对于新品种西维亚、玛利莲梦露、蒙米拉丝、女皇的培养国内尚无报道,对大花蕙兰的系统研究也远远跟不上市场的发展速度,我们于1998年以新引进的优良大花蕙兰品种为材料,利用组织培养和快速繁殖技术,开展了大规模工厂化育苗的系统研究,提高了诱导成苗率和繁殖速度,大大降低了成本,使本项技术
9、在市场中更具竞争能力和推广价值,并繁育出大量种苗,批量供应市场,为大花蕙兰工厂化育苗提供了科学依据与参考. 把母株放在温室内盆栽培养,于2月底4月初陆续从母株上取8左右的新芽,从基部切离,用自来水冲洗,再用洗洁净溶液浸泡5,自来水冲洗10,剥去最外几层叶片,并剪去芽的上半段.然后在超净工作台上采用3步灭菌处理法处理:先在70%的酒精中处理6,立即投入10%次氯酸钠溶液中10,稍加摇动,取出后用无菌水冲洗,剥去外层23片叶;再放入5%的次氯酸钠溶液5,取出后无菌水冲洗,剥至最后一枚叶片;再放入1%的次氯酸钠溶液1,取出后无菌水冲洗数次.以上次氯酸钠溶液中均加入-60以利杀菌剂更有效地发挥作用.在
10、无菌条件下剥出约5长的茎尖,以生长点为中心,用解剖刀把茎尖切成4个小方块,分别接入已准备好的培养基上.5.25.6,蔗糖2%,琼脂条0.6%0.85%,温度2225,光照强度2000,每日光照12. 外植体接在附加一定激素配比的培养基上,20左右外植体周围出现许多白色颗粒状愈伤组织,继续培养逐渐转为绿色,25可形成大量原球茎,以后每隔20进行一次继代培养,若继代不及时易形成不定芽,需在继代时切去,影响原球茎增殖,造成浪费.继代前观察统计试验结果.大花蕙兰对的敏感程度高于对6 的敏感程度,相同浓度的下,用量稍微增减即会产生明显差异,低浓度的对原球茎增殖有明显促进作用,高于0.1 则会抑制其生长.
11、最佳激素配比为0.05 /,0.5/ 。 随机分切法虽操作快捷,但有大量切割过于碎小的培养块死亡;纵切法操作需细致、费时,但原球茎增殖数多,大小一致;碾压和井字型切割(底部不分开)原球茎增殖时间可缩短、可加快继代,但单个继代原球茎增殖倍数减少. 通过前期初步筛选后,选择以附加0.05 ,0.5 的最佳激素配比,把原球茎切块分别接种,1 2,为基本培养基的培养基上,测试不同培养基种类对原球茎增殖的影响.结果表明:,1/ 2,均可应用于原球茎增殖,但以效果最佳.,1 /2,也能分化和增殖原球茎,但增殖缓慢、色淡.附加香蕉泥对原球茎增殖有明显促进作用,使增殖倍数提高到4.22,且生长健壮,色泽深绿。
12、 用固体培养基培养最差,增殖速度慢,且易导致原球茎块死亡,继代不及时易分化出芽,但适合芽和根的分化培养;液体培养增殖较快,但生长不够健壮,色黄绿,质地较疏松;半固体培养基(减少琼脂用量)最佳,原球茎增殖量大,色深绿,健壮.,每隔45对半固体培养基的培养瓶震荡,摇动一次,生长增殖效果更好。 生长健壮的原球茎不切割接种在固体分化培养基上,1015可诱导出丛生芽,继续培养30左右可发育成小苗,当培养瓶内丛生芽长出5左右时,将苗与新增殖的原球茎分开,原球茎继续增殖培养,苗转入生根壮苗培养基中,每瓶810个小苗,当苗长出56片叶,根长到3左右时,即可开盖于温室内炼苗.通过添加不同水平的比较,以0.2 /
13、为最佳。炼苗2后即可将苗取出,用清水洗净根部的琼脂,植于温室苗床内,栽培基质为松针+苔藓+粗砂,苗床底部垫以碎石、碎砖块,用稀薄的营养液喷雾,每隔1周喷1次800倍的多菌灵溶液,温度保持在1025,在大棚里亦可生长良好,1个月后统计移栽成活率可达98%以上.1年后上盆,栽培基质用泥炭土+蕨根+树皮,每周浇1次液肥. 分析讨论 (1)大花蕙兰属热带气生兰,靠根系附着在林中树木及岩石上生长,多数种类有内生菌共生.因此,外植体灭菌采用3步处理.据笔者经验,大花蕙兰外植体灭菌比其它植物有一定难度.我们曾采用抗生素处理,效果不佳.对于供试品种是否由于存在内生菌而引起外植体灭菌处理困难,以及内生菌在植物体
14、内的分布传播情况有待进一步研究. (2)培养基添加香蕉泥对大花蕙兰增殖和分化有明显的促进作用,这与香蕉泥中的有机质和天然激素有关,同时能使培养物在适宜的酸性条件下生长. (3)培养过程中,不同品种增殖、成苗及幼苗分生情况有一定差异.其中梦露明显比其它品种增殖快且易分生子苗,索菲亚增殖最慢,很少分生子苗,这可能与品种固有特性有关. (4)原球茎切块细小、稀疏的培养瓶内,群体生长较慢,而切块较大且密集的瓶内,生长十分健壮,表现类似于群体生长效应.因此切割时不可过细,直径要在2以上,每瓶可接种30多个培养块,可使瓶内营养得以充分利用. (5)接种时,采用大罐头瓶把培养块1次夹入或铲入,稍加晃动半固体
15、培养基即可使培养块分散开来,既节约时间、成本,又降低了污染率. (6)用改良(无机盐减半)培养大花蕙兰,无机盐用量比其它报道用培养基大大减少,增殖分化效果均佳.采用降低琼脂用量制成半固体培养基可简化接种步骤,而且培养块浸在培养基内,降低了培养块黄枯和切口褐化的机会.定期摇动培养瓶,能使培养瓶内营养得以充分利用.无机盐和琼脂在培养成本中占有很高的比例,采用以上技术可大大节约成本,利于大规模生产应用. (7)生产过程中,我们用自来水代替蒸馏水,用绵白糖代替蔗糖,用廉价的琼脂条代替琼脂粉,降低了成本,效果没有丝毫降低.由于大花蕙兰原球茎增殖不必用小容器和相对较高的罐头瓶,可用透光性好的大容器代替.
16、(8)采用1次定植,不经移栽,可以减少对幼苗根系的损伤和节约人力.只要保证温室内相对湿度,对成活率无显著影响,但组培苗前期生长缓慢.根据赵杨景对3种内生菌与大花蕙兰共生对矿质营养吸收影响的研究,内生菌对吸收矿质营养、促进幼苗生长有明显的作用.我们拟对大花蕙兰内生菌的分离与再接种,以及如何缩短幼苗期、提早开花等进行进一步研究.大花蕙兰组织培养生产流程及降低成本的研究王秋洁 【摘要】: 本论文通过建立大花蕙兰品种修女的组织培养体系,研究大花蕙兰组织培养生产中各个环节的主要影响因子;结合贵妃、梦幻、碧玉和玉婵等4个品种,采取不同的降低成本措施,探索适合大花蕙兰不同生长阶段的低成本培养的可能性;推导单
17、株组培苗成本的计算公式,根据市场消耗品价格计算出大花蕙兰单株组培苗生产成本的降低幅度,为大花蕙兰组织培养生产体系的建立和成本的降低提供理论依据。 实验结果表明,以品种修女的茎尖为外植体,表面灭菌方式采取酒精浸泡30s后升汞灭菌12min为宜。最佳原球茎诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L。最佳原球茎增殖培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA1.0mg/L。最佳原球茎分化培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA1.0mg/L。最佳生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/L。泥炭、水苔、泥炭:珍珠岩1:1或水苔:珍珠岩1:1的成活率均可达100。一步成苗等简化
18、组织培养生产流程的方法具有可行性。 生产中可以用自来水、白砂糖代替高成本的蒸馏水、蔗糖;减少琼脂用量、降低糖浓度可以促进原球茎的增殖;自然光照对原球茎的分化、生根有抑制作用,最适光照时间因品种而异。经过试验培养基最多可以降低89.94的成本,单株组培苗的成本可以下降37.37。栽培基质对蝴蝶兰苗木生长的影响王月英 陈义增 曾爱平 【摘要】:不同栽培基质对蝴蝶兰组培苗移栽及成苗生长影响试验表明:基质A(苔藓)、B(椰糠:泥炭:珍珠岩=1:1:1)、C(蛇木条:珍珠岩=8:2)均适宜作蝴蝶兰组培苗的移栽基质,其移栽后6个月时成活率均达90%以上;且移栽前炼苗3-5天有利于移栽成活及叶片生长。综合考
19、虑成活率、叶片生长及生产成本,可首选苔藓作蝴蝶兰组培苗的移栽基质。另A、B、C三基质也适宜作蝴蝶兰成苗的栽培基质,其自出瓶后17个月时株均抽花梗率达42%,但考虑到生产成本,规模化生产时可采用基质A与B,如用A作栽培基质,春季应及时换盆。蝴蝶兰花芽分化及花期调控研究刘晓荣 【摘要】: 本论文结合生产,采用温室盆栽技术和室内分析方法,对蝴蝶兰在营养生长、花芽分化、花梗伸长、花蕾发育四个生长阶段的关键栽培技术和花期调控技术进行了研究,主要研究结论如下: 1通过N、P、K、Ca、Mg 5因素4水平正交设计试验表明,N对两个品种营养生长发育影响最大,对总叶片数影响达到显著水平,P对两个品种花芽分化影响
20、最大,Ca对花梗粗度的影响最大,Mg浓度过大会造成叶片脱落;适合品种2048营养生长最佳营养配比为N:P2O5:K2O:CaO:MgO=40:5:10:10:10;适合品种满天红营养生长最佳营养配比为N:P2O5:K2O:CaO:MgO=40:5:5:10:20;品种2048对肥料配比试验敏感;其中T9(N-P2O5-K2O-CaO: 20-40-20-5)对提高花芽分化速度效果最佳,且增加了叶片厚度,总体观赏价值优于对照。 2在高山条件下,花芽分化过程中,叶片中全氮和全钾的含量变化趋势基本相同;可溶性糖含量与淀粉含量变化趋势基本相反,游离氨基酸与可溶性蛋白含量亦呈相反变化趋势;过氧化物酶含量
21、,开始逐渐上升,花芽分化时维持高峰,之后急剧下降。山下对照无花芽出现,全氮、全钾、可溶性糖变化、可溶性蛋白、过氧化物酶的变化没有规律;花梗发育阶段,全钾的变化趋势比较大。 3在高山低温催花过程中,25 mg/kg 6-BA涂抹或喷施可有效地促进花芽分化,花芽分化率比对照提高8.3%;50 mg/kg GA涂抹处理花芽分化率比对照提高16.6%;25 mg/kg PP333喷施处理花芽分化率比对照提高16.6%;B9对花芽分化影响不大;TDZ不能促进花芽分化。山下施用6-BA、B9、PP333,在调查时间内一直未见有花芽分化,可见低温是影响蝴蝶兰花芽分化的关键因子。缩短花梗试验表明,250 mg
22、/kg PP333缩短效果最佳,比对照缩短6.97cm,PP333处理主要缩短了花梗第一节间长;处理开花的时间均比对照晚。 4在6种植物生长调节剂中,乙烯利和TDZ导致花蕾逐渐地凋落;其余4种都可以有效地促进开花,只有6-BA处理过植株的花朵盛开时间与对照相差无几。不同浓度6-BA处理对蝴蝶兰3个品种花期影响不同,品种2022,75mg/kgBA和100mg/kgBA处理的花期分别比对照提前3d和5d;品种2009,50mg/kgBA、75mg/kgBA和100mg/kgBA处理的植株花期比对照提前开花约5d;品种2048,仅有100mg/kgBA使花期提前4d左右。 施用时期方面,花蕾发育期
23、(15mm)时处理,花蕾发育量均值比花蕾发育期(5mm)处理增加快0.8176mm; 6-BA(50mg/kg)促进花蕾发育效果最佳;6-BA结合KH2PO4处理可以延长花期,缩短小花之间开花间隔,其中100 mg/kg 6-BA+4000 mg/kg KH2PO4(T4)福建农业科技 2003年01期 加入收藏 获取最新 影响蝴蝶兰高山催花效果的因素探析张永柏 刘添锋 廖福琴 黄萍萍 张楚文 【摘要】:试验表明 ,下列因素条件有利于蝴蝶兰高山催花时花芽分化与萌发 :海拔 10 0 0 12 0 0m ,上山时间于 4月 2 6日 (调控至国庆节开花 )和 9月 2日 (调控至春节开花 ) ,
24、光照强度 2 5 0 0 0Lx ,施肥的NP2 O5K2 O为 10302 0 ,苗龄 15个月以上。【作者单位】: 龙岩市农业科学研究所 龙岩市农业科学研究所 龙岩市农业科学研究所 龙岩市农业科学研究所 龙岩市农业科学研究所 【关键词】: 蝴蝶兰 高山 催花 【分类号】:S682.31【DOI】:CNKI:SUN:FJNK.0.2003-01-019【正文快照】: 蝴蝶兰 ()成熟苗须经历一个低温处理即催花 (夜温 15 19 ,日温 2 4 2 9 )阶段 ,才能促进花芽分化和萌发。南方栽培蝴蝶兰为把花期调控至春节或更早 ,可采用水帘式温室、空调房或搬上高山等方法降温催花 ,其中高山催花
25、效果好、成本低、设备投广西热带农业 2004年02期 加入收藏 获取最新 蝴蝶兰花期调控技术研究曾爱平 林绍生 陈中林 陈义增 徐晓薇 【摘要】:通过试验,认为常规施肥结合叶面施肥、一定范围内较强的光照更有利于促进蝴蝶兰花芽分化、花梗生长、提早花期;高山越夏是蝴蝶兰提早开花、提高品质、减少生产成本的最佳途径;促进蝴蝶兰花芽分化所需的低温处理时间并非越长越好,也不是夜间温度越低越好,而是要有适当的昼夜温差,以6左右为宜;蝴蝶兰花芽分化后,为促进花梗的快速生长,可以适当提高栽培环境的温度。中国农业大学 2005年 加入收藏 获取最新 蝴蝶兰组培快繁技术和水质、温度对其生长发育影响的研究叶小曲 【摘
26、要】:本课题研究了3个新引进蝴蝶兰品种的组织快繁技术、试管苗移栽技术和环境因素对蝴蝶兰生长发育的影响。结果如下: 1.培养基为1/4MS+6-BA2mg/L+椰子汁10%+活性炭0.2%、外植体取未开花花梗上部腋芽接种萌芽速度快,生长也快,成活率高。在人工气候箱中昼夜温度25/20,由于温度恒定芽萌动快,生长也相对较快;但在培养室,温度2025中培养的组培苗相对健壮。 2.在接种过程中外植体剪切时于无菌水中进行,并在培养基中添加氧化剂DTT10mg/L,可有效降低花梗腋芽外植体的褐化程度。 3.果荚无菌播种培养,以授粉后生长110d的绿果荚为最佳取材时期;诱导原球茎最佳培养基为花宝1号3g/L
27、+蛋白胨5g/L+香蕉汁10%+活性炭0.2%。G3+6-BA3.0mg/L+香蕉汁10%+NAA0.2mg/L+活性碳0.2%为原球茎增殖快繁的最佳培养基;G3+6-BA2.0mg/t+香蕉汁10%+NAA0.4mg/L+活性碳0.2%为组培苗生长和生根的最佳培养基。 4.试管苗室外炼苗时,置于室外7d不打开瓶盖炼苗方法对幼苗生长有利。移栽基质和蝴蝶兰营养生长时的栽培基质均以苔藓为最佳。 5.自来水与纯净水对蝴蝶兰生长发育的影响差异不大,但是自来水可降低成本,提高植株耐受力。在工厂化生产中,选择昼夜温差在2518,光照强度1200015000Lx,低温处理30d等处理方式对蝴蝶兰花芽分化诱导
28、效果最好,可提前花期1个月(与昼腋25/20处理相比较),抽梗率达98.1%,花朵数多。安徽农业科学 2008年05期 加入收藏 获取最新 蝴蝶兰组织培养研究进展朱懿 严红 【摘要】:按组织培养的一般程序(原球茎的诱导、增殖、分化、生根、移栽)概述了蝴蝶兰组织培养的研究进展,并介绍了种子的无菌播种快繁和丛生芽繁殖途径,以及组织培养过程中的褐化问题研究进展,并对我国未来蝴蝶兰研究发展进行了展望。广西热带农业 2004年03期 加入收藏 获取最新 蝴蝶兰防褐化技术探讨姚丽娟 林绍生 徐晓薇 游聚斌 陈中林 【摘要】:兰科植物在组培快繁时 ,存在着易褐变死亡的问题。在培养基中添加12g/L活性碳 ,
29、适时切除培养物的褐化部分及时更换新鲜培养基 ,能有效地抑制外植体褐变死亡的发生。培养基中加入10 %椰子水 ,能促进原球茎的生长 ,减少原球茎增殖过程中的褐变西北农林科技大学 2006年 加入收藏 获取最新 蝴蝶兰组培外植体褐化影响因素的研究赵伶俐 【摘要】: 蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)是一种极富观赏价值的名贵花卉,被誉为“洋兰皇后”,组织培养为其主要的繁殖方式。褐化现象在其组培快繁过程中普遍存在,严重影响外植体分化,是制约蝴蝶兰工厂化生产的难题。本研究以蝴蝶兰无菌苗为材料,观察其褐化前后的细胞结构;定性定量分析褐化前后外植体内的酚酸;测定不同处理外植体内PPO活性和总酚含量
30、,以期找到有效降低褐化的方法。主要研究结果如下: 1.光学显微镜观察表明,褐变发生后,蝴蝶兰外植体细胞结构破坏,细胞壁有明显的皱缩,有的地方断裂较明显,细胞中沉积大量的黑色颗粒状物质。 2.利用高效液相色谱仪,对蝴蝶兰组培外植体褐化前后体内的酚酸进行定性定量分析,初步表明绿原酸、邻苯二酚、儿茶酚、咖啡酸是与蝴蝶兰(R4)褐化相关的酚酸,而起主要作用的则可能是邻苯二酚和绿原酸。 3.培养基pH6.5或培养温度20时蝴蝶兰外植体褐化率最低。在培养温度(25)相同时,PPO活性、总酚含量高低并不与pH值大小成正比,且褐化率与PPO无显著相关性,pH5.0时,褐化率与总酚含量显著相关;在培养基pH(6
31、.0)相同时,温度越高,褐化率越高,PPO活性越强,总酚含量越高,且20时,褐化率与PPO、总酚含量分别达到极显著、显著相关,30时,褐化率与总酚含量显著相关。 4.1000lx和3000lx光强下培养的蝴蝶兰外植体褐化较轻,2000lx光强培养的外植体褐化严重且PPO活性高于其他两处理,差异显著,三处理中褐化率与PPO活性均无显著相关性;各处理间总酚含量差异不显著,1000lx和2000lx条件下培养的外植体褐化率与总酚含量显著相关。黑暗预处理能减轻蝴蝶兰组培外植体褐化,其中以预处理10d的褐化最轻;未经暗处理的褐化最重且PPO活性最大,总酚含量无一致变化规律,各处理中褐化率与PPO活性显著
32、相关,预暗培养5天的外植体褐化率与总酚含量显著相关。接种前对外植体遮光处理能有效减轻褐化,以双层膜遮光效果好;各处理中褐化率与PPO活性均无显著相关性,未遮光和双层膜遮光的外植体褐化率与总酚含量显著相关。华南热带农业大学 2007年 加入收藏 获取最新 应用热激处理抑制蝴蝶兰组培褐变杨玲 【摘要】: 蝴蝶兰(Phalaenopsis sp.)是兰科植物中栽培最广泛、最受欢迎的种类之一,是一种高附加值的花卉产品。蝴蝶兰为单茎气生兰,分株繁殖系数很低,组织培养是蝴蝶兰的主要繁殖手段,但其组培中存在着褐变现象,严重时可导致外植体死亡,是制约蝴蝶兰规模化生产的主要难题。人们采用了很多方法来解决这一难题
33、。但是,或因抑制褐变效率不高,或会导致分化率下降,或者是操作程序复杂、生产成本增加,使得这些方法在规模化生产上的应用受到了限制。因此,有必要寻找一种新的可用于规模化生产的可靠方法。 国内外很多研究表明,热激处理有抑制褐变的显著效果。但是,迄今为止,还没有发现用热激方法抑制蝴蝶兰组培褐变的报道。本实验研究的主要目的是想摸索出一条简便易行、安全有效的抑制褐变的新方法,即采用热激处理来减轻蝴蝶兰组培过程中褐变的发生。 本研究以蝴蝶兰为材料,研究分析了其培养过程中的褐变规律;研究了热激处理对蝴蝶兰褐变指数、总酚含量、以及褐变相关酶(如PAL、PPO和POD)活性的影响,进而探索蝴蝶兰组织培养过程中,控
34、制褐变所需的最佳热激处理条件,包括热激处理温度,热激处理时间及热激处理后恢复时间。另外,研究了热激处理对蝴蝶兰不同品种组培褐变的影响,结果表明: 1、45条件下,6分钟的热激处理,经过48小时后进行切割接种的蝴蝶兰叶片,能显著减轻组织培养过程中褐变的发生。在该热激条件下,接种后第十五天,采用热激处理的褐变指数比未经热激处理的降低了约4倍;接种后第9天,各处理总酚含量变化最大(总酚含量的变化量是指第9天的值与初始值之差),热激处理后的总酚含量的增量与对照总酚含量的增量相比,降低了3倍。热激处理对褐变相关酶的活性也有显著影响,接种后第9天时,热激处理组与对照组PAL活性差异最大,对照的PAL活性比
35、接种时增大了近5倍,而热激处理后只增加了不足2倍;接种后第3天,对照的POD活性比初始值增大了3倍,而热激处理后的POD活性没有显著变化;PPO的活性变化虽然没有POD那样明显,但经热激处理后的PPO活性也显著低于对照。因而,应用热激处理能够有效抑制蝴蝶兰组培过程中发生的褐变,并能抑制褐变过程中总酚含量及PAL、PPO、POD三种酶活性的增加。 2、对不同蝴蝶兰品种(20个品种)的研究还发现,不同花色的蝴蝶兰品种所固有的总酚含量与褐变指数无相关性,而褐变指数却有随褐变前后总酚含量的变化量变化的趋势,即总酚含量变化量越大,褐变指数越大。 3、对三种不同花色蝴蝶兰品种(F5、15和B3)进行热激处
36、理的研究表明,采用热激处理能够显著减少褐变较重的品种(15和B3)中总酚的含量的变化,并降低褐变相关酶(PAL、PPO、POD)的活性,从而减轻蝴蝶兰培养过程中褐变的发生。因此,应用热激处理抑褐变较重的蝴蝶兰品种组培褐变具有潜在的广泛的应用价值。 本试验将热激处理应用于控制蝴蝶兰组织培养过程中普遍发生的褐变,尝试了一种新的高效安全的控制褐变的方法,这对于规模化、工厂化生产高质量的蝴蝶兰种苗具有指导意义2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集 2007年 加入收藏 获取最新 大花蕙兰组培快繁技术的优化研究刘佩佩 刘燕 【摘要】:本文以大花蕙兰(Cymbidium hybridum)茎尖
37、为外植体对其组织培养和快速繁殖技术进行了优化研究。结果表明:原球茎诱导的最适培养基为:MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L,在该培养基的原球茎诱导率为 80%;MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L 最适于原球茎的增殖;1/2MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L 最适于原球茎的分化成苗;壮苗生根的最适培养基为:1/2MS+NAA0.1 mg/L+AC0.5g/L。【作者单位】:北京林业大学园林学院 北京林业大学园林学院 南京林业大学 2003年 加入收藏 获取最新 名贵兰花产业化生产配套技术中若干问题的研究李淑顺 【摘要】: 本文研究了蝴蝶兰、石斛兰等名
38、贵兰花不同外植体的快速繁殖方法,及蝴蝶兰的施肥技术,从而为兰花的产业化生产提供科学的理论指导。 对蝴蝶兰(Phalaenopsis)花梗侧芽进行表面灭菌对比。结果表明,75酒精3s结合0.1HgCl_210min大大提高了外植体的存活率。 试验中分别在培养基中加入0.3、0.5、0.8、1、1.2的活性炭(AC),经试验对比,发现Ac8gL处理可作为蝴蝶兰褐变防止的有效手段。 蝴蝶兰花梗侧芽的诱导中,发现Kyoto和MS培养基中的花梗侧芽萌动率最高皆达到59;同时发现6-BA浓度太高容易出现细弱的萌芽。因此花梗侧芽启动培养基配方被确定为MS,激素浓度:BA5mgL+NAA0.1mgL。 继代周
39、期分别设为15d、20d、25d、30d,比较其对芽增殖和恢复生长的影响,结果表明经常转接(15d)能有效提高蝴蝶兰新芽的增殖率。 在培养基中加入不同体积比的天然提取物,研究不同处理对芽增殖的影响。发现CM对蝴蝶兰丛生芽增殖略有促进作用,而BN则起到了较明显的抑制作用。 不同序列的叶片切块接种到原球茎(PLB)诱导培养基中,借此研究叶片的分生能力及叶片原球茎(PLB)的诱导。结果发现序列为1的幼叶生活力最强,接种10d便有生长从而变得弯曲;第二第三序列的叶片则出现了黄化、死亡现象。 不同6-BA浓度梯度用于蝴蝶兰幼嫩叶片的PLB诱导,随着6-BA浓度的加大,叶片长势渐好,30d后所有叶片切块的
40、切口皆出现了PLB的雏形,其中6-BA5mgL的配方最佳。 将石斛兰茎节切段接种在含有不同激素配比的潜伏芽诱导培养基中,60d后发现石斛兰潜伏芽极易萌发,随着培养时间的增长潜伏芽萌动率一直呈上升趋势。6-BA2+NAA0.1诱导效果最好,培养40d潜伏芽萌动率已接近100。 将试管中的石斛兰嫩芽放在不同的光、温环境中进行丛生芽诱导,60天后看出,较强的光照与较高的温度,利于芽的增高长大,而较弱的光照与较低的温度利于芽数量的增加,但长出的小苗不如强光照下长得健壮。 利用正交试验研究四种基质与施肥方法对蝴蝶兰生长发育的影响。结果表明,灰色关联度最高(R_i=0.69337)的处理组合是水藓基质施氮
41、200(N,mgL),NPK(20:15:15),现蕾后以PK肥加微量元素处理。施肥方法和基质是影响蝴蝶兰开花数量的两个主要因子。南京林业大学 2004年 加入收藏 获取最新 大花蕙兰产业化栽培技术若干问题研究赵九洲 【摘要】:大花蕙兰(Cymbidium hybridum)的品种类型繁多,花大色艳、花期长、观赏价值高。本文研究了大花蕙兰的水分亏缺的生理机制及其乙酰水杨酸(SA)和6-BA的生理调节机制,研究了大花蕙兰快速繁殖中的酚害和污染及其控制技术。结果表明,水藓(SP)基质的保水力高于花生壳掺沙(PHS=1:1)基质。SP基质临界水分是相对含水量12.29-12.32,其水分自然落干变化
42、动态模型为:(?)_(sp)=142.4e(0.4559x),(R2=0.982(*);PHS基质临界水分12.29,叶片含水量的阈值为64.6574.5,水分变化动态模型为:(?)_(SPS)=38.768x(-0.9267),(R2=0.9381(*)。气孔对水分亏缺反应的水势阈值是-1.38至-1.35MPa左右。叶绿素含量对水分亏缺的反应不敏感,叶绿素的变化滞后于水势和叶片含水量。叶片外渗液相对电导率值在水分亏缺处理的后期急剧增加,叶片含水量(LWC)、叶水势(LWP)可作为大花蕙兰水分亏缺的指标。 在水分亏缺下以外源SA和6-BA处理大花蕙兰叶片。结果表明,0.54.5mmolL S
43、A,使新芽内的IAA含量增高,2.54.5mmolL的6-BA也使IAA含量增高。0.52.5mmolL的SA使玉米素(ZR)含量增高。2.54.5mmolL的6-BA也使ZR含量增高。0.54.5mmolL的SA和6-BA均有抑制ABA含量的作用。0.54.5 mmolL的SA和2.54.5mmolL的6-BA可提高SOD活性和CAT活性,降低MDA含量。SA可提高净光和速率(P_r),增加水分利用效率(WOE),SA浓度范围为2.54.5 mmolL。2.5mmolL的6-BA也可提高WUE。 以正交设计研究了大花蕙兰快速繁殖中的酚害及其污染控制技术。H液体培养基的原球茎(proto-co
44、rm-like body,PLB)诱导率最高为83.25,降低无机盐离子浓度可减轻褐变死亡率。芽态(即芽上的叶片尚未展开与芽上的叶片已展开)叶片尚未展开的芽的PLB诱导率高于叶片已经展开的芽。茎尖纵切的PLB诱导率高于横切。把外植体平伏于培养基的表面的PLB诱导率较低;把外植体深埋于培养基中的PLB诱导率高于外植体平伏于培养基的表面;外植体切割成4mm的切片的PLB诱导率高于2mm的PLB诱导率,较大的外植体有利于PLB的诱导。 在茎尖的培养中,以14MS为基本培养基,添加20gL蔗糖,200gL香蕉泥(BJ)和8gL水晶洋菜,添加6-BA2.5mgL+NAA0.1mgL+活性炭(AC)4gL
45、的诱导率高达96.7,可有效控制酚害的发生,经过70天的培养可直接成苗。 在大花蕙兰的茎段培养中,以14MS+6-BA2.5(mgL)+NAA0.1(mgL)+BJ200(gL)+蔗糖20(gL)加入水晶洋菜8(gL),添加硫代硫酸钠(hyposulphite,HY)h和氨苄(Penicillin,PN),结果表明HY的浓度为1.5(mgL),可有效的控制酚害褐死率。经方差分析,F=29.6,(F_(3,12)=3.49)达显5著水平。 氨苄(Penicillin,PN) 70(gL)和105(gL)均可有效的控制污染问题,一般用70(gL)较为经济。 在PLB继代培养中以H+6-BA3.0mgL+NAA1.0mgL+BJ200gL+蔗糖20gL+ 水晶洋菜109/L,添加40一60m叭的氨节控制污染的效果较好。 研究了N一P一K施肥比例和施肥的浓度与大花蕙兰生长发育的关系,结果表明,施用 N一PZOS一KZO二500一340一200(mg几)的肥料利于叶面积增长,叶绿素含量较高。 净恕教斟曝病的逛则抬伪N一pZos一KZo=453.16一453.16一400(mg/L),娜七合速率与N、p、 K的回归方程为:之一17.695+l.o96xl
限制150内