大鼠取材方案(7页).doc
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1、-大鼠取材方案-第 7 页实验大鼠取材方案取材内容 1. 取大鼠静脉血分离血浆、血清-80保存。 2. 取大鼠门静脉血分离血清-80保存。 3. 取大鼠甲状腺组织制备甲状腺电镜观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。 4. 取大鼠胸腺组织制备胸腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存备用。 5. 取大鼠肺组织制备肺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 6. 取大鼠肝脏组织制备肝脏组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 7. 取大鼠胰腺组织制备胰腺组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 8. 取大鼠肠系膜淋
2、巴结组织制备肠系膜淋巴结免疫组化观察标本其余组织液氮冰冻保存。 9. 取大鼠胃部组织制备胃粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 10. 取大鼠空肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 11. 取大鼠回肠组织制备肠道粘膜组织电镜观察标本、免疫组化观察标本其余组织分装液氮冰冻保存备用。 12. 取大鼠肾组织制备左肾组织电镜观察标本、免疫组化观察标本右肾组织液氮冰冻保存备用。 13. 取大鼠肾上腺组织左侧制备肾上腺组织免疫组化观察标本右侧肾上腺液氮冰冻保存备用。 14. 取大鼠睾丸组织左侧制备电镜观察标本、免疫组化观察标本右
3、侧睾丸液氮冰冻保存备有。 试剂及药品 戊巴比妥钠或10%水合氯醛、75%酒精、生理盐水、多聚甲醛或福尔马林液、3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛、肝素钠、器械液器械清洗消毒液 器材 备皮刀、解剖台、弯盘、组织剪、眼科剪、手术刀柄、刀片、小号弯式血管钳、蚊式血管钳、眼科镊、无损伤血管夹、聚乙烯管、三通管、丝线、培养皿、天平、一次性离2ml、1.5ml、冻存管、肝素锂真空采血管、微量移液器、高速离心机、注射器10ml、5ml、2ml、无菌手套、冰箱、冰盒、液氮罐 取材动物 Wistar大鼠 取材步骤 1. 取材大鼠前夜禁食自由饮水。 2. 腹腔注射戊巴比妥钠(
4、45mg/kg) 或10%水合氯醛(300mg/kg)将动物麻醉。用5ml的注射器配合5.57号针头。 腹腔注射时右手持注射器左手的小指和无名指抓住大鼠的尾巴另外三个手指抓住大鼠的颈部使大鼠的头部向下。这样腹腔中的器官就会自然倒向胸部防止注射器刺入时损伤大肠、小肠等器官。进针的动作轻柔防止刺伤腹部器官。 尤其是对于体重较小的大鼠腹腔注射时针头可以在腹部皮下穿行一小段距离最好是从腹部一侧进针穿过腹中线后在腹部的另一侧进入腹腔注射完药物后缓缓拔出针头并轻微旋转针头防止漏液。待动物麻醉成功后仰卧位固定于解剖台。 3. 修剪去颈部及腹部毛发75%酒精消毒。 4. 沿腹侧正中线自阴茎上缘由下而上剪开腹部
5、皮肤直至剑突向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露腹壁浅肌层。沿白线钝性分离腹壁肌肉剪开腹膜暴露腹腔将肝脏向上翻起显露门并游离静脉将剪成斜口的聚乙烯管尖端背向肝门方向插入门静脉抽取门静脉血2ml无创血管夹夹闭门静脉止血。将抽取门静脉血加入一次性离心管低温静置过夜4离心3000-3500/min10分钟吸出上清液分装-80摄氏度保存备用。 5. 把胃与脾之间的薄膜除去可见到在其下方有如树枝状的肉色组织分为左、右两叶钝锐结合整体取下胰腺组织及脾脏组织结扎止血。胰腺放置于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。切取胰腺体部约1mm1mm1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.
6、4)或4戊二醛固定胰腺体部相邻部位组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定其余组织全部液氮冰冻保存备用。生理盐水冲洗操作器械。 6. 剔除脾周组织放置脾脏于盛有无菌生理盐水的培养皿中涮洗去血迹。从脾脏一端切取55mm脾组织浸入多聚甲醛或福尔马林液中固定继续切取脾约1mm1mm1mm组织3块3戊二醛磷酸盐缓冲液(PBS0.01mol/LP pH7.4)或4戊二醛固定其余组织液氮冰冻保存备用。 7. 从剑突继续向上剪开皮肤自颌下向两侧钝性剥开皮肤与皮下组织暴露胸廓及颈浅肌层。沿正中剪开胸廓、胸膜避免损伤胸腺的胸腔脏器。暴露心脏找到上下腔静脉后确认右心房5ml注射器直接穿刺右心房最大量抽取外周回心静脉血。
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