实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测.ppt
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1、实验六 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测,常祖明,实验目的,1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法,实验原理,1.DNA琼脂糖凝胶电泳的原理,琼脂糖是一种线性多糖聚合物,天然聚合长链状分子,在沸水中溶解,45开始形成多孔性刚性滤孔,凝胶孔径的大小取决于琼脂糖的浓度,浓度越高,孔隙越小,其分辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。,实验原理,(1)电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷,在电泳时向阳极移动。,(2)分子筛效益 在一定的电场强度下,DNA分子的迁移速度主要取决于分子筛效益,即DNA分子本身的大小和构象(共价
2、闭环DNA线状DNA开环DNA),而且其迁移速度与其相对分子质量的对数值成反比,所以不用相对分子质量的DNA分子可以在琼脂糖凝胶电泳中分离。,2. DNA分子进行染色的原理(以溴化乙锭为例),观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂,用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光,当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时,溴化乙锭从正极向负极移动,这样溴化乙锭分子就会嵌入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物,这种络合物在紫外光下发射的荧光要比单纯的DNA分子要强的多,便于DNA的检测。,实验仪器、材料、试剂,实
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