茎尖分生组织培养.ppt
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1、第四章茎尖分生组织培养 及脱毒苗生产,一、概念和意义 1.概念 茎尖分生组织培养:指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。 特点:可获无病毒苗,操作困难,成苗时间长。 普通茎尖培养:对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。,第一节 茎尖分生组织培养,茎尖分生组织培养除可以生产脱毒苗外,还具有方法简便,繁殖迅速,遗传性比较稳定,易保持植株的优良性状的优点,在基础理论研究和实际应用中具有重要价值。 2.意义: 1.形态建成研究 茎尖分生组织(不带叶原基,1mm) 4.育种中的应用 与辐射育种结合,二、茎尖分生组织培养一般方法 1.材
2、料的制备 健壮枝梢 去除叶片 分成1-2cm 自来水冲洗 消毒 75%的酒精30秒 0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min 无菌水 修剪剥离茎尖,通常切割下顶端0.20.5 mm叶原基的茎尖(无菌水) 接种。,2.培养基 多为MS培养基及其改良配方,还有White、B5等。 3.培养条件 (1)温度:2628 (2)光照:光培养的效果通常比暗培养好。 (3)湿度:与其他器官培养相似。,一、病毒的危害 多数栽培植物,尤其无性繁殖植物,都易受到一种或几种,甚至几十种病毒的侵染。例如,草莓感染60多种病毒。并且随着栽培时间的推移,侵染病毒的种类越来越多。 受病毒侵染的植物生长缓慢、畸形、产量
3、大幅度下降,品质变劣,甚至完全丧失商品价值。因此说,病毒带来极大的危害。,第二节 脱毒苗的培育和病毒检测,目前,对细菌和真菌侵染的病害,可以通过药物处理达到治愈的目的,如多菌灵等。但目前,还没有药物能治病毒病。 种子一般不带病毒,种子繁殖植物可以得到无菌植株。但对于无性繁殖植物,必须采用一种有效的方法,脱去病毒,才能达到提高产量和质量的目的。,二、病毒侵染的特点 早在40年代,就有科学家(White等)发现病毒在根上和茎上的分布是不均匀的,离根尖和茎尖越近,病毒的密度越低。反之,越高。即病毒在植物体内的分布是不均匀的,分生组织一般无病毒侵染。,分生组织之所以能避开病毒侵染,可能有4方面原因:
4、1、在植物体中,病毒的移动主要靠两条途径,一是通过维管系统,而分生组织中尚未形成维管系统;二是通过胞间连丝,但这条途径病毒移动速度非常缓慢,难以追赶上活跃生长的茎尖和根尖。,2、在旺盛分裂的分生组织中,代谢活动很高,使病毒无法进行复制。 3、在茎尖中存在高水平内源激素,可以抑制病毒的增殖。 4、在植物体内存在有一种“病毒钝化系统”,它在分生组织中的活性应最高,因而使分生组织不受侵染。,以上是四种可能原因,无论哪种说法正确,事实是分生组织一般不带病毒。因此,利用这一原理,进行茎尖培养,培育无病毒苗。,三、脱毒的方法,(一)热处理脱毒法 热处理脱毒原理 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞DNA一起
5、复制。 热处理并不能杀死病毒,只能钝化病毒活性,使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止,失去传染能力。 作为一种物理效应可以加速植物细胞的分裂,使植物细胞在与病毒繁殖的竞争中取胜。,热处理法有:温汤处理(热水浸泡)和热风处理两种。,具体方法: 第一,热水浸泡处理,适用于切下的材料,在50度左右的温水中浸渍数分钟至数小时,方法简便易行但材料易受伤。 第二,热风处理,将生长的盆栽植物移入室内或生长箱内,处理温度因植物种类、生理状况而异。一般为3540度,短则几十分钟,长达数月。,热处理的优缺点 优点: 方法简单,效果明显。 缺点: 1)具有局限性,不能去除所有病毒。只对圆形病毒(苹果花叶病毒),或对线
6、状病毒(马铃薯卷叶病毒)有效;而对杆状病毒(千日红病毒)无效。 2)热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死,造成损失 3)延长热处理时间,病毒钝化效果好,同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。,其它效果 香石竹(康乃馨)在3840下经两个月处理可除去全部病毒。,马铃薯在37下处理1020天能除去卷叶病毒。,(二)茎尖培养脱毒 1.茎尖培养脱毒的原理 (1)病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同,离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。 必须指出的是,所谓无病毒,只是相对的,不是绝对的。 (2)茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。
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- 关 键 词:
- 分生组织 培养 培育
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