《活性测定》PPT课件.ppt
《《活性测定》PPT课件.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《《活性测定》PPT课件.ppt(13页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、实验八实验八血清丙氨酸氨基转移酶(血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性测定)活性测定 改良赖氏法改良赖氏法【实验目的】【实验目的】掌握改良赖氏法测定掌握改良赖氏法测定ALT的原理、注意事项和的原理、注意事项和临床意义,熟悉标准曲线的绘制。临床意义,熟悉标准曲线的绘制。【实验原理实验原理】1、催化反应、催化反应 ALT催化谷氨酸与丙酮酸间的氨基移换反应:催化谷氨酸与丙酮酸间的氨基移换反应:L-丙氨酸丙氨酸-酮戊二酸酮戊二酸-丙酮酸丙酮酸L-谷氨酸谷氨酸H2、显色反应、显色反应草黄色草黄色棕红色棕红色p注意:-酮戊二酸也与2,4-二硝基苯肼反应产生苯腙,但两种苯腙的吸收光谱曲线有差别,在500520
2、nm差异最大,以等摩尔浓度计算,丙酮酸苯腙的呈色强度约为-酮戊二酸苯腙的3倍。据此特点,可计算出丙酮酸的生成量。【操作步骤】【操作步骤】(一)样品准备:样品为空腹血清、血浆(肝素抗凝,肝素可抗凝血液;EDTA抗凝,可抗凝血液)。样品应在低温条件下运输保存,样品中ALT在28可稳定7天。(二)标准曲线绘制:加入加入试剂试剂(l)01234 pH7.4PBS100100100100100丙酮酸标准液丙酮酸标准液 050100150200 底物底物缓缓冲液冲液5004504003503002,4-二硝基苯肼二硝基苯肼 500500500500500混匀,置混匀,置37恒温恒温20分分钟钟氢氧化钠氢氧
3、化钠 50005000500050005000相当于相当于酶酶活力活力KarU 285797150酶酶活力(活力(UL)50109209406 A505 A(An-A0)混匀后,室温混匀后,室温10分分钟钟,505nm波波长长,以,以蒸蒸馏馏水水校正零点,校正零点,读读取各管的吸光度取各管的吸光度值值,制作工作曲,制作工作曲线线。(三)血清酶活性测定 取2支试管,按下表操作 加入加入试剂试剂(u1)空白管(空白管(B)测测定管(定管(U)血清血清100 pH7.4PBS100底物底物缓缓冲液冲液500500混匀,置混匀,置37恒温恒温30分钟分钟 2,4二硝基苯二硝基苯肼肼 500 500混匀
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 活性测定 活性 测定 PPT 课件
限制150内