专题动物细胞融合与单克隆抗体.ppt
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1、专题 动物细胞融合与单克隆抗体 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 1动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个 或多个动物细胞结合形成一个细胞的过或多个动物细胞结合形成一个细胞的过 程。程。2动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二动物细胞融合常用的诱导因素有聚乙二 醇醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。、灭活的病毒、电激等。3动物细胞融合的主要用途是制备单克隆动物细胞融合的主要用途是制备单克隆 抗体。抗体。4杂交瘤细胞是由经免疫的
2、杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成 的,具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。的,具有既能无限增殖又能产生特定抗体的能力。5单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高,并能大量单克隆抗体最主要的优点是特异性强、灵敏度高,并能大量 制备。制备。6单克隆抗体的主要用途有:作为诊断试剂、用于治疗疾病和单克隆抗体的主要用途有:作为诊断试剂、用于治疗疾病和 运载药物。运载药物。自读教材自读教材夯基础夯基础 1概念概念 或或 动物细胞结合形成动物细胞结合形成 的过程,也称细的过程,也称细胞杂交。胞杂交。两个两个多个多个一个细胞一个细胞2.返回学车问答 htt
3、p:/ 学车问题回答驾驶员模拟考试2016 http:/ 科目一 科目二 科目三 科目四 3意义意义 (1)突破了突破了 的局限,使远缘杂交成为可能。的局限,使远缘杂交成为可能。(2)为制备为制备 开辟了新途径。开辟了新途径。有性杂交有性杂交单克隆抗体单克隆抗体 1动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有何动物细胞融合与植物原生质体融合所用的诱导方法有何不同?不同?提示:提示:动物细胞融合可用灭活的病毒进行诱导。动物细胞融合可用灭活的病毒进行诱导。2细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点?细胞融合技术与有性杂交相比有哪些优点?提示:提示:有性杂交有着十分严格的时空关系和种族界限。动有性杂交
4、有着十分严格的时空关系和种族界限。动物细胞融合则不同,它通过人工的方法克服了存在于物种之间物细胞融合则不同,它通过人工的方法克服了存在于物种之间的遗传屏障,从而能够按照人们的意愿,把不同物种的不同组的遗传屏障,从而能够按照人们的意愿,把不同物种的不同组织类型的细胞融合在一起。织类型的细胞融合在一起。跟随名师跟随名师解疑难解疑难 1细胞融合的过程分析细胞融合的过程分析 细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合细胞融合的过程包括细胞膜融合、细胞质融合和细胞核融合,其中细胞膜融合是细胞融合的先导,在细胞膜融合中体现,其中细胞膜融合是细胞融合的先导,在细胞膜融合中体现出细胞膜具有一定的流动
5、性。出细胞膜具有一定的流动性。2动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合原理原理细胞膜的流动性、细胞的全能细胞膜的流动性、细胞的全能性性细胞膜的流动性细胞膜的流动性过程过程细胞细胞A、B 去壁去壁原生质体原生质体A、B 融合融合融合的原生质体融合的原生质体 杂种细胞杂种细胞 植物组植物组,织培养织培养 杂种植株杂种植株细胞细胞A、B 融合融合杂交细胞杂交细胞 有丝分裂有丝分裂多个相同杂交细胞多个相同杂交细胞植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合相关酶相关酶纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶胰蛋白酶或胶原
6、蛋白酶胰蛋白酶或胶原蛋白酶融合方融合方法法物理法:离心、电激、振动;物理法:离心、电激、振动;化学法:聚乙二醇等试剂诱导化学法:聚乙二醇等试剂诱导除物理法和化学法外还除物理法和化学法外还可以用灭活的病毒诱导可以用灭活的病毒诱导结果结果杂种植株杂种植株杂交细胞杂交细胞意义意义克服了远缘杂交的不亲和性,克服了远缘杂交的不亲和性,获得杂种植株获得杂种植株突破了有性杂交方法的突破了有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为局限,使远缘杂交成为可能可能特别提醒特别提醒(1)动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。动物细胞核融合发生在杂种细胞的有丝分裂过程中。(2)灭活的病毒只适用于动物细胞融合。灭活的病毒
7、只适用于动物细胞融合。自读教材自读教材夯基础夯基础 1传统抗体的制备传统抗体的制备抗原抗原血清血清(2)缺点:产量低、缺点:产量低、低、低、差。差。纯度纯度特异性特异性2单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程(2)解决思路:将解决思路:将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合为 。(3)制备过程:制备过程:杂交瘤细胞杂交瘤细胞(4)单克隆抗体的特点:单克隆抗体的特点:强、强、高,并可大量制备。高,并可大量制备。(5)单克隆抗体的应用:单克隆抗体的应用:作为作为 ,具有准确、高效、简易、快速的优点。,具有准确、高效、简易、快速的优点。用于用于 和和 。特异性特异性灵敏度灵敏度诊断
8、试剂诊断试剂治疗疾病治疗疾病运载药物运载药物 1为什么要对小鼠注射抗原?为什么要对小鼠注射抗原?提示:提示:以获得能产生相应抗体的以获得能产生相应抗体的B淋巴细胞淋巴细胞(浆细胞浆细胞)。2根据单克隆抗体制备过程思考下列问题:根据单克隆抗体制备过程思考下列问题:(1)制备单克隆抗体时,为什么要选用制备单克隆抗体时,为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞?细胞融合形成杂交瘤细胞?(2)B淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后,培养液中淋巴细胞和骨髓瘤细胞经聚乙二醇处理后,培养液中存在哪几种细胞?存在哪几种细胞?(3)选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么?选择杂交瘤细
9、胞的两步筛选的目的各是什么?提示:提示:(1)每一个每一个B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体,但淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体,但不能无限增殖;骨髓瘤细胞可大量快速增殖,却不能产生抗体。不能无限增殖;骨髓瘤细胞可大量快速增殖,却不能产生抗体。若将两种细胞融合在一起,既能产生一种特异性抗体又能快速若将两种细胞融合在一起,既能产生一种特异性抗体又能快速增殖。增殖。(2)未融合的未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、BB融融合细胞、瘤瘤融合细胞、合细胞、瘤瘤融合细胞、B瘤融合细胞。瘤融合细胞。(3)第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞;第二步筛选的第一步筛选的目的是获得杂交
10、瘤细胞;第二步筛选的目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。跟随名师跟随名师解疑难解疑难 1血清抗体与单克隆抗体的比较血清抗体与单克隆抗体的比较名称名称产生产生特点特点血清抗体血清抗体由由B淋巴细胞分泌淋巴细胞分泌一般从血清中分离,产量一般从血清中分离,产量低、纯度低、特异性差低、纯度低、特异性差单克隆抗体单克隆抗体 由杂交瘤细胞分泌由杂交瘤细胞分泌特异性强、灵敏度高,能特异性强、灵敏度高,能大量制备大量制备 2制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同制备单克隆抗体过程中两次筛选的目的不同 (1)第一次筛选是将未融合的第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、
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