病毒的接种.ppt
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1、病毒的接种病毒的接种实验目的n了解了解 病毒的培养方法n掌握掌握 病毒的鸡胚绒毛尿囊膜接种法鸡胚绒毛尿囊膜接种法及小小鼠脑内接种鼠脑内接种方法。概述n病毒结构简单,缺乏完整的酶系统缺乏完整的酶系统,不能在无生命的人工培养基中生长,必须必须在活的组织细胞中才能增殖在活的组织细胞中才能增殖。动物接种法鸡胚培养法组织细胞培养法常用的分离、培养、鉴定病毒的方法动物接种动物接种动物接种动物接种(Animal inoculation)是最早应用的病毒培养法,在病毒学研究中主要有三方面用途:分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、分离鉴定病毒、通过传代增殖或减弱病毒毒力、制备免疫血清。制备免疫血清。在分离
2、病毒时由于动物自身可能带有病毒,而且许多病毒没有敏感动物,因而目前多被组织培养所代替。常用的动物有小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、家兔、羊和猴等。接种的途径有鼻内、皮内、脑内、腹腔内和静脉注射等。小鼠脑内接种小鼠脑内接种1、以无菌0.25ml注射器抽取流行性乙型脑炎病毒悬液0.1ml,去除注射器内的气泡。2、取出小鼠,左手将小鼠固定(固定时用大拇指和食指握住小鼠的头部,左手手掌轻轻按住小鼠的体部)。3、右手用棉签蘸以碘酒,消毒小鼠的右侧颞部皮毛(不碰到眼)。4、右手拿注射器在小鼠颞部(眼与耳根联线的中点略偏耳朵的方向)注入,进入颅腔即可(一般进针23mm),不要插得太深,注射量为0.020.03ml。
3、5、注射完毕,将用过的注射器放入煮沸消毒器内,煮沸消毒。实验动物置于防蚊设备的室内饲养,逐日观察动物发病情况。鸡胚接种鸡胚接种n接种途径接种途径n可根据病毒种类选择适宜接种部位,如分离流感病毒常用羊水囊和尿囊同时接种法,而痘病毒常采用绒毛尿囊膜接种法 n尿囊腔接种法n卵黄囊接种法n绒毛尿囊膜接种法n羊膜囊接种法 气室鸡胚卵黄囊尿囊腔羊膜腔绒毛尿囊膜卵白卵膜判断鸡胚是否存活判断鸡胚是否存活 在检卵灯下观察能否看到清晰的血管能否看到清晰的血管;胚胎是否移动是否移动;若胚龄过长,则需观察其胎盘部分,胎盘部分变苍白说明胚胎死亡,正常时胎正常时胎盘发暗盘发暗,蛋白部分透亮。绒毛尿囊膜接种法绒毛尿囊膜接种
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