NY∕T 573-2022 动物弓形虫病诊断技术.pdf
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1、2022?07?11发布2022?10?01实施动物弓形虫病诊断技术41中华人民共和国农业行业标准备案号:XXXX-XXXX11.220CCS B5732022Diagnostic techniques for animal toxoplasmosis中华人民共和国农业农村部发 布代替NY/T 57320025732022NY/T5732022书 书 书中国农业出版社出版购买正版纸质文本请联系中国农业出版社标准质量分社冀编辑?电话?前?言本文件按照?标准化工作导则?第?部分?标准化文件的结构和起草规则?的规定起草?本文件代替?弓形虫病诊断技术?与?相比?除结构调整和编辑性改动外?主要技术变化如
2、下?增加了临床诊断和病理变化?见第?章?病原学检测方法增加了直接镜检和聚合酶链式反应?见第?章和第?章?修订了动物接种实验?见第?章?血清学检测删除了间接血凝试验?见?年版的第?章?增加了改良凝集试验和间接免疫荧光试验?见第?章和第?章?请注意本文件的某些内容可能涉及专利?本文件的发布机构不承担识别专利的责任?本文件由农业农村部畜牧兽医局提出?本文件由全国动物卫生标准化技术委员会?归口?本文件起草单位?中国农业大学?本文件主要起草人?刘晶?刘群?潘保良?本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为?年首次发布为?本次为第一次修订?引?言弓形虫病?是由刚地弓形虫?引起的一种人兽共患寄生虫病?该病呈世
3、界性分布?可感染许多温血动物?包括猪?羊?牛?犬和猫等?弓形虫病可使孕畜流产?产死胎?急性弓形虫病可造成家畜的死亡?对猪和羊的危害最为严重?动物弓形虫是人弓形虫病的主要感染来源?弓形虫感染孕妇后可引起流产?胎儿畸形或产出弱智儿?免疫功能低下人群感染后?可侵害多种器官或系统?并造成损伤甚至死亡?我国?一?二?三类动物疫病病种名录?规定?弓形虫病为二类动物疫病中的多种动物共患病?动物弓形虫病的诊断具有重要的公共卫生意义?本文件在?版?弓形虫病诊断技术?的基础上?参考了?陆生动物诊断试验和疫苗标准手册?版?相关国际标准?本文件中补充了病原学诊断的直接镜检和聚合酶链式反应?诊断方法?修订了动物接种实验
4、?修订了原有的血清学诊断方法?删除了间接血凝试验?增加了改良凝集试验?间接免疫荧光抗体试验?所列的标准既适用于我国动物弓形虫病的诊断需求?也符合国际标准?动物弓形虫病诊断技术?范围本文件规定了动物弓形虫病诊断的直接镜检?动物接种?聚合酶链式反应?改良凝集试验和间接免疫荧光试验的技术要求?本文件适用于猪?牛?羊?犬?猫?兔等动物弓形虫病的诊断与流行病学调查?所列方法包括病原学诊断和血清学诊断?其中?病原学诊断?包括直接镜检?动物接种和聚合酶链式反应适用于在动物淋巴结?脑组织?肌肉?各组织中弓形虫病原的鉴定?血清学诊断?包括改良凝集试验?间接免疫荧光抗体试验适用于对动物血清抗体的检测?规范性引用文
5、件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款?其中?注日期的引用文件?仅该日期对应的版本适用于本文件?不注日期的引用文件?其最新版本?包括所有的修改单?适用本文件?分析实验室用水规格和试验方法?实验室?生物安全通用要求?兽医诊断样品采集?保存与运输技术规范?术语和定义下列术语和定义适用于本文件?速殖子?弓形虫无性生殖阶段?速殖子呈月牙形?一端偏尖?一端偏钝圆?长?宽?在有核细胞内呈出芽生殖?速殖子常见于急性感染阶段的体液?淋巴细胞及全身的有核细胞?见附录?缓殖子?弓形虫发育阶段之一?呈月牙形?长?宽?存在于包囊中?速殖子可转化成缓殖子?缓殖子也可以在环境适宜时转化成速殖子?
6、见附录?包囊?呈球形?囊壁薄?直径?内含圆形或月牙形缓殖子?每个包囊含数十个至数千个缓殖子不等?包囊可在宿主体内长期存在?常见于脑及肌肉组织内?见附录?缩略语下列缩略语适用于本文件?牛血清白蛋白?二脒基?苯基吲哚?乙二胺四乙酸?异硫氰酸荧光素?间接免疫荧光抗体试验?间接血凝试验?改良凝集试验?磷酸盐缓冲液?聚合酶链式反应?临床诊断?临床症状?不同动物感染弓形虫后的临床症状差异很大?弓形虫病对猪和羊的危害最为严重?猪弓形虫病临床症状包括?高热?精神委顿?食欲减退或废绝?渴欲增加?呼吸困难呈腹式呼吸?严重者呈犬坐姿势?流水样或黏液性鼻涕?耳?唇?腹部及四肢下部皮肤前期充血?后期发绀或有淤血斑?耳尖
7、出现干性坏死?腹股沟淋巴结肿大?妊娠期母猪发生流产?产死胎或产出患有先天性弓形虫病的仔猪?羊弓形虫病临床症状包括?发病急?精神沉郁?体温可达?以上?呈稽留热?呼吸频率加快?呈明显腹式呼吸?流泪?流涎?病羊眼内有大量的浆液性或黏脓性分泌物?少数病羊运动失调?全身震颤?出现神经系统和呼吸系统的症状?妊娠羊发生流产?妊娠早期胚胎死亡和吸收?胎儿死亡和木乃伊化?其他动物弓形虫病临床症状包括?牛?鸡?犬?猫等动物都可以被弓形虫感染?孕牛感染弓形虫?增加流产的风险?鸡急性弓形虫病出现斜颈和侧卧位等神经症状?除急性症外?大多数宿主呈慢性?或隐性?感染?在体内形成包囊?多不表现出明显临床症状?病理变化?急性感
8、染?常出现全身性病变?表现为全身淋巴结肿大?有出血点和小坏死灶?肺高度水肿?有出血斑点和白色坏死灶?脾脏肿大?呈棕红色?肝脏呈灰红色?散在有小点坏死?肠系膜淋巴结肿大?肠道重度充血?肠黏膜上常可见到扁豆大小的坏死灶?肠腔和腹腔内有多量渗出液?肾皮质有出血点和灰白色坏死灶?膀胱有少数出血点?弓形虫病心肌炎的特征是多灶性坏死性心肌炎?慢性感染各内脏器官水肿?并有散在的坏死灶?在脑组织和肌肉中可见弓形虫包囊?直接镜检?仪器设备与耗材?离心机?光学显微镜?剪刀和镊子?载玻片和盖玻片?试管?微量移液器及吸头?试剂材料?姬姆萨染液?见附录?中的?除特殊说明以外?本文件所有试剂均为分析纯?水符合?的规定?样
9、品处理取动物淋巴结穿刺液?腹水或羊水等体液?离心?取沉淀涂片?干燥?固定和姬姆萨液染色?光镜下观察?组织涂片或触片经姬姆萨液染色?光镜下观察?结果判定淋巴结穿刺液?腹水?羊水等体液?在光镜下检测到弓形虫速殖子则判定为病原学阳性?组织涂片或触片?光镜下检测到弓形虫速殖子?包囊或缓殖子则判定为病原学阳性?动物接种?仪器设备与耗材?小鼠独立通气笼?生物安全柜?离心机?光学显微镜?剪刀和镊子?玻璃组织研钵?注射器?载玻片和盖玻片?微量移液器及吸头?试剂材料?周龄?周龄?级?小鼠?无菌生理盐水?含?青霉素和?链霉素?蛋白酶?姬姆萨染液?样品的采集及处理无菌采集被检动物的脑?心?肺组织和骨骼肌各?或腹腔液
10、?所取组织混合后放入玻璃组织研钵中?加入无菌沙和?的无菌生理盐水研磨成组织糜?研磨好的组织用?的无菌生理盐水配制成?的组织悬浮液?操作方法将小鼠分为?组?每组?只小鼠?第?组为组织糜灌胃接种组?经口灌胃接种小鼠?第?组为腹腔液接种组?直接腹腔接种?每只小鼠分别接种待检样品?第?组为阴性对照组?腹腔接种生理盐水?小鼠接种待检样品后?如在?内死亡?则应抽取腹腔渗出液涂片?姬姆萨液染色后镜检?同时?另采集脑?肝?肺?脾涂片?姬姆萨液染色后镜检?若小鼠未死亡?则应在接种后?周对小鼠进行扑杀?按上述操作取脑组织染色镜检并辅助进行?检测?见第?章?结果判定当阴性对照组没有查出弓形虫时?可进行结果判定?否则
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