【精品】克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中及应用(可编辑).ppt
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1、克隆性基因重重排在淋巴瘤诊断中及应用Clinically Suspicious LNBiopsyMorphology with IHCIf necessary,If necessary,Molecular DxMolecular DxCytogenetics/Cytogenetics/FISHFISHEvaluation of the Suspicious Lymph NodeCarcinoma v.LymphomaFNAWith Flow Cytometry Suspect LymphomaCarcinomaCLLSuspect Lymphoma,Negative orNon-diagnos
2、ticWorkup for PrimaryDiagnosisStaging and TreatmentFISHTreatmentNCCN NHL Lymphoma Guidelines(5-10%)分子和细胞遗传学异常分子和细胞遗传学异常抗原受体基因的克隆性重排抗原受体基因的克隆性重排与类型相关的染色体异常l简要原理简要原理l检测方法检测方法l应用和策略应用和策略l注意事项注意事项IG和和TCR基因结构及重排过程基因结构及重排过程胚系可变区恒定区胚系D-J重排V-D-J重排转录与拼接各区片段数多各区片段数多 重排的多样性重排的多样性 抗体多样性抗体多样性 IGH IGKIGLTCRATCRBT
3、CRGTCRDV V664338464768D D277656546798J J655611354淋巴细胞发育过程中基因重排顺序淋巴细胞发育过程中基因重排顺序IG:H重排:IgH/缺失:IgH/TCR::TCR :TCR 淋巴瘤中基因重排形式淋巴瘤中基因重排形式克隆性重排克隆性重排不同的淋巴细胞相同的重排形式淋巴细胞单克隆性增生 淋巴瘤诊断和鉴别诊断的分子指标淋巴瘤诊断和鉴别诊断的分子指标 克隆性重排的检测方法克隆性重排的检测方法Southern 杂交PCR法特异性探针:胚系的特征性片段外 另一不同大小的片段Southern 杂交优点:敏感性较高 可靠性高缺点:DNA量多(10ug)新鲜组织
4、操作复杂 时间长、成本高 放射性同位素逐渐被PCR方法替代 PCR法 原理原理:VDJ重排 后相互靠拢,用适当的引物可扩增出重排片段新鲜、冻存、石蜡、显微切割或细胞学标本,不受DNA片段的影响,仅需要少量的DNA,时间短,敏感性高,是目前最常用的克隆性重排的检测方法。引物的选择原则引物的选择原则l引物位置:PCR产物长度10-15bpl引物本身的长度0.05)表明TCR基因重排在LyP和CALCL的鉴别中无应用价值。必须结合临床病史必须结合临床病史Ig和和TCR基因重排不一定是谱系的标志:基因重排不一定是谱系的标志:某些某些T、B淋巴瘤有基因重排的交叉淋巴瘤有基因重排的交叉T,B之间:不成熟的
5、T或B相对频繁TCRab,TCRrd之间前前T细胞性白血病细胞性白血病/细胞淋巴瘤细胞淋巴瘤几乎所有都存在几乎所有都存在TCR克隆性重排,但大克隆性重排,但大约约20%同时伴有同时伴有IGH基因重排基因重排前B细胞性白血病/淋巴瘤,非特殊类型均有IGH DJ 区克隆性重排70%存在TCR,重排对谱系鉴定无帮助毛细胞白血病共同表达多克隆性IG亚型,认为存在多点亚型转换阻滞T细胞大颗粒淋巴细胞白血病TCR,TCR克隆性重排,存在TCR,TCR交叉NK细胞慢性淋巴细胞增生异常没有IG和TCR克隆性重排侵袭性NK细胞白血病没有IG和TCR克隆性重排结外NK/T 细胞淋巴瘤,鼻型大多IG及TCR无重排,
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