《学士学位毕业答辩》PPT课件.ppt
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1、保加利亚乳杆菌蛋白质提保加利亚乳杆菌蛋白质提取方法研究取方法研究学生姓名:黄学生姓名:黄 宇宇所在院系:食品学院所在院系:食品学院所学专业:食品质量与安全所学专业:食品质量与安全目目 录录前前 言言材材 料料 与与 方方 法法结结 果果 与与 分分 析析实实 验验 结结 论论东北农业大学东北农业大学1234前前 言言东北农业大学东北农业大学 以裂解液为提取介质,分别采用反复冻融、超声破碎以及玻以裂解液为提取介质,分别采用反复冻融、超声破碎以及玻璃珠破碎璃珠破碎3 3种方法提取细菌蛋白质,通过分析细菌破碎程度、蛋白种方法提取细菌蛋白质,通过分析细菌破碎程度、蛋白质质SDS-PAGESDS-PAG
2、E电泳及蛋白质浓度测定,比较各提取方法的效果。电泳及蛋白质浓度测定,比较各提取方法的效果。筛筛选出一种稳定有效的保加利亚乳杆菌的蛋白质提取方法。选出一种稳定有效的保加利亚乳杆菌的蛋白质提取方法。实实 验验 材材 料料东北农业大学东北农业大学菌种菌种设备设备无菌工作台、全自动高压灭菌锅、生物显微镜无菌工作台、全自动高压灭菌锅、生物显微镜 、离、离心机、天平心机、天平 、真空冷冻干燥机、紫外可见分光光度、真空冷冻干燥机、紫外可见分光光度计、超声细胞破碎仪、计、超声细胞破碎仪、pHpH计、微量进样器。计、微量进样器。试剂试剂十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、SDS-PAGE SDS-PAGE 低分子量
3、标准蛋白、低分子量标准蛋白、-巯基乙醇、巯基乙醇、EDTA EDTA、丙烯酰胺、丙烯酰胺、30%30%丙烯酰胺溶液、甘丙烯酰胺溶液、甘氨酸、氨酸、MRSMRS培养基和蛋白质电泳储备液等。培养基和蛋白质电泳储备液等。德氏乳杆菌保加利亚亚种德氏乳杆菌保加利亚亚种(乳品科学教育部重点实验乳品科学教育部重点实验室提供室提供)。实实 验验 方方 法法东北农业大学东北农业大学保加利亚乳杆菌生长曲线的建立保加利亚乳杆菌生长曲线的建立菌株活化、保加利亚乳杆菌生长曲线的建立菌株活化、保加利亚乳杆菌生长曲线的建立无细胞提取物的制备无细胞提取物的制备l超超声声破破碎碎法法:将将细细菌菌沉沉淀淀加加入入裂裂解解液液,
4、在在冰冰浴浴中中用用超超声声波波破破碎碎仪仪破破壁壁。离心,得到无细胞提取物。离心,得到无细胞提取物。l反反复复冻冻融融法法:将将细细菌菌沉沉淀淀加加入入裂裂解解液液,液液氮氮中中反反复复冻冻融融后后,离离心心取取上上清清液备用。液备用。l玻玻璃璃珠珠法法:将将细细菌菌沉沉淀淀加加入入裂裂解解液液,放放入入适适量量酸酸洗洗玻玻璃璃珠珠,冰冰浴浴。高高速速涡旋振荡得到无细胞提取物。涡旋振荡得到无细胞提取物。实实 验验 方方 法法东北农业大学东北农业大学细菌裂解程度观察细菌裂解程度观察涂片涂片晾干晾干固定固定染色染色水洗水洗煤染煤染脱色脱色复染复染蛋白质定量蛋白质定量BCABCA试剂盒试剂盒(碧云
5、天碧云天)测定蛋白质浓度测定蛋白质浓度,根据标准曲线计算出样品的蛋根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。白浓度。SDS-PAGE蛋白电泳蛋白电泳垂垂直直平平板板电电泳泳槽槽的的安安装装分分离离胶胶的的制制备备浓浓缩缩胶胶的的制制备备样样品品处处理理及及加样加样电泳电泳染色及脱色染色及脱色菌菌 株株 活活 化化东北农业大学东北农业大学 11%(w/v)11%(w/v)脱脂乳脱脂乳培养基,培养基,3737,培养,培养36 h36 h后,凝固,革兰氏染色镜后,凝固,革兰氏染色镜检观察结果检观察结果(如图如图),菌种,菌种纯,活力高,可用于下步纯,活力高,可用于下步实验。实验。保加利亚乳杆菌生长曲线的建立
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