《疫分析法》PPT课件.ppt
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1、第七章第七章 免疫分析法免疫分析法一 免疫分析法:是基于抗体与抗原或半抗原之间的高选择性反应而建立起来的一种生物化学分析方法。高选择性和低检出限。分析方法:放射性免疫、荧光免疫、酶联免疫、发光免疫、电化学免疫,克隆酶给予体免疫,免疫抗散等。抗原的概念抗原的概念 抗原(抗原(抗原(抗原(antigen,Ag)antigen,Ag)antigen,Ag)antigen,Ag):是是是是一类能刺激机体免疫系统一类能刺激机体免疫系统一类能刺激机体免疫系统一类能刺激机体免疫系统发生免疫应答,并能与相应免疫应答产物(抗体发生免疫应答,并能与相应免疫应答产物(抗体发生免疫应答,并能与相应免疫应答产物(抗体发
2、生免疫应答,并能与相应免疫应答产物(抗体和致敏淋巴细胞和致敏淋巴细胞和致敏淋巴细胞和致敏淋巴细胞)在体内外发生特异性结合的物质。在体内外发生特异性结合的物质。在体内外发生特异性结合的物质。在体内外发生特异性结合的物质。抗原的两种特性:免疫原性和抗原性(免疫反应抗原的两种特性:免疫原性和抗原性(免疫反应抗原的两种特性:免疫原性和抗原性(免疫反应抗原的两种特性:免疫原性和抗原性(免疫反应性)性)性)性)免疫原性(免疫原性(免疫原性(免疫原性(immunogenicityimmunogenicityimmunogenicityimmunogenicity),能刺激机体发生免能刺激机体发生免能刺激机体
3、发生免能刺激机体发生免疫应答,产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。疫应答,产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。疫应答,产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。疫应答,产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。免疫反应性免疫反应性免疫反应性免疫反应性能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。异性结合的能力。异性结合的能力。异性结合的能力。凡具有免疫原性和抗原性的物质称为凡具有免疫原性和抗原性的物质称为凡具有免疫原性和抗原性的物质称为凡具有免疫原性和抗原性的物质称为完全抗原完全抗原完全抗原完全抗原。只有抗原性而不具有免疫原性的物质
4、称为只有抗原性而不具有免疫原性的物质称为只有抗原性而不具有免疫原性的物质称为只有抗原性而不具有免疫原性的物质称为半抗原半抗原半抗原半抗原。半抗原半抗原半抗原半抗原+蛋白质蛋白质蛋白质蛋白质完全抗原完全抗原完全抗原完全抗原 赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为载体。载体。载体。载体。1.1.抗原的免疫原性抗原的免疫原性抗原物质必须具备的条件:抗原物质必须具备的条件:一、异物性一、异物性二、一定的理化性状二、一定的理化性状三、完整性三、完整性四、宿主的遗传性四、宿主的遗传性一、异物性一、异物性 异物异物异物
5、异物是指化学结构与宿主的自身成分相异或机是指化学结构与宿主的自身成分相异或机是指化学结构与宿主的自身成分相异或机是指化学结构与宿主的自身成分相异或机体的免疫细胞从未与它接触过的物质。异物性的物体的免疫细胞从未与它接触过的物质。异物性的物体的免疫细胞从未与它接触过的物质。异物性的物体的免疫细胞从未与它接触过的物质。异物性的物质包括以下几类:质包括以下几类:质包括以下几类:质包括以下几类:1 1、异种物质异种物质异种物质异种物质 如:马血清蛋白、各种微生物如:马血清蛋白、各种微生物如:马血清蛋白、各种微生物如:马血清蛋白、各种微生物及其代谢产物对人体而言都是异种物质,具有强的及其代谢产物对人体而言
6、都是异种物质,具有强的及其代谢产物对人体而言都是异种物质,具有强的及其代谢产物对人体而言都是异种物质,具有强的免疫原性。免疫原性。免疫原性。免疫原性。2 2、同种异体物质同种异体物质同种异体物质同种异体物质 如:如:如:如:ABOABO血型抗原、人类血型抗原、人类血型抗原、人类血型抗原、人类主要组织相容性抗原。主要组织相容性抗原。主要组织相容性抗原。主要组织相容性抗原。3 3、自身抗原物质自身抗原物质自身抗原物质自身抗原物质 如:自身组织成分结构改如:自身组织成分结构改如:自身组织成分结构改如:自身组织成分结构改变、隐蔽性自身成分暴露构成自身抗原。变、隐蔽性自身成分暴露构成自身抗原。变、隐蔽性
7、自身成分暴露构成自身抗原。变、隐蔽性自身成分暴露构成自身抗原。二、一定的理化性状二、一定的理化性状 大分子胶体物质大分子胶体物质大分子胶体物质大分子胶体物质 凡具有免疫原性的物质,分子量凡具有免疫原性的物质,分子量凡具有免疫原性的物质,分子量凡具有免疫原性的物质,分子量都较大,一般在都较大,一般在都较大,一般在都较大,一般在10kDa10kDa10kDa10kDa以上以上以上以上,在一定范围内在一定范围内在一定范围内在一定范围内,分子量分子量分子量分子量越大免疫原性越强。越大免疫原性越强。越大免疫原性越强。越大免疫原性越强。一定的化学组成和结构一定的化学组成和结构一定的化学组成和结构一定的化学
8、组成和结构 从化学组成来看,凡含有从化学组成来看,凡含有从化学组成来看,凡含有从化学组成来看,凡含有芳香族氨基酸(尤其是酪氨酸)的蛋白质,其免芳香族氨基酸(尤其是酪氨酸)的蛋白质,其免芳香族氨基酸(尤其是酪氨酸)的蛋白质,其免芳香族氨基酸(尤其是酪氨酸)的蛋白质,其免疫原性较强。从结构来看,结构越复杂其免疫原疫原性较强。从结构来看,结构越复杂其免疫原疫原性较强。从结构来看,结构越复杂其免疫原疫原性较强。从结构来看,结构越复杂其免疫原性越强。性越强。性越强。性越强。分子构象与易接近性分子构象与易接近性分子构象与易接近性分子构象与易接近性 分子构象是指抗原分子中一分子构象是指抗原分子中一分子构象是
9、指抗原分子中一分子构象是指抗原分子中一些特殊化学基团的三维结构,它决定抗原分子是些特殊化学基团的三维结构,它决定抗原分子是些特殊化学基团的三维结构,它决定抗原分子是些特殊化学基团的三维结构,它决定抗原分子是否能与淋巴细胞表面的抗原受体相互吻合。易接否能与淋巴细胞表面的抗原受体相互吻合。易接否能与淋巴细胞表面的抗原受体相互吻合。易接否能与淋巴细胞表面的抗原受体相互吻合。易接近性是指抗原分子的特殊化学基团与淋巴细胞表近性是指抗原分子的特殊化学基团与淋巴细胞表近性是指抗原分子的特殊化学基团与淋巴细胞表近性是指抗原分子的特殊化学基团与淋巴细胞表面相应的抗原受体相互接触的难易程度。面相应的抗原受体相互接
10、触的难易程度。面相应的抗原受体相互接触的难易程度。面相应的抗原受体相互接触的难易程度。三、完整性三、完整性 具有一定理化性状的物质须经非消化道具有一定理化性状的物质须经非消化道途径进入机体(包括注射、吸入、混入伤口途径进入机体(包括注射、吸入、混入伤口等),并接触淋巴细胞,才能成为良好抗原。等),并接触淋巴细胞,才能成为良好抗原。如果是口服后可被消化酶水解成胨、氨基酸,如果是口服后可被消化酶水解成胨、氨基酸,破坏了其结构,就丧失了免疫原性。破坏了其结构,就丧失了免疫原性。自然界中天然的抗原物质有:自然界中天然的抗原物质有:蛋白质、多糖、核蛋白蛋白质、多糖、核蛋白 四、宿主遗传性四、宿主遗传性
11、抗原的免疫原性也与机体的应答能力有抗原的免疫原性也与机体的应答能力有关,同种动物不同个体对同一种抗原的免关,同种动物不同个体对同一种抗原的免疫应答存在明显的差异,这种差异受遗传疫应答存在明显的差异,这种差异受遗传因素控制,控制免疫应答的基因称为因素控制,控制免疫应答的基因称为免疫免疫应答基因(应答基因(immune response,Ir)immune response,Ir)2.抗原的特异性抗原的特异性抗原决定簇(基)抗原决定簇(基)载体决定簇和半抗原决定簇载体决定簇和半抗原决定簇共同抗原和交叉反应共同抗原和交叉反应一、抗原决定簇一、抗原决定簇1 1、概念概念概念概念 抗原决定簇(抗原决定簇
12、(抗原决定簇(抗原决定簇(antigenic antigenic determinant,AD)determinant,AD)是指抗原中决定抗原特异性的特是指抗原中决定抗原特异性的特是指抗原中决定抗原特异性的特是指抗原中决定抗原特异性的特殊化学基团,又称为殊化学基团,又称为殊化学基团,又称为殊化学基团,又称为表位表位表位表位(epitope)epitope)epitope)epitope)。表位的性质、。表位的性质、。表位的性质、。表位的性质、数目和空间构象决定着抗原的特异性。抗原通过数目和空间构象决定着抗原的特异性。抗原通过数目和空间构象决定着抗原的特异性。抗原通过数目和空间构象决定着抗原的
13、特异性。抗原通过ADAD与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合,激活淋与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合,激活淋与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合,激活淋与相应淋巴细胞表面的抗原受体结合,激活淋巴细胞,引起免疫应答。巴细胞,引起免疫应答。巴细胞,引起免疫应答。巴细胞,引起免疫应答。2 2 2 2、种类和数量种类和数量种类和数量种类和数量 一个抗原分子可以有一种或多一个抗原分子可以有一种或多一个抗原分子可以有一种或多一个抗原分子可以有一种或多种不同的种不同的种不同的种不同的AD AD,一种,一种,一种,一种ADAD决定着一种特异性,多种决定着一种特异性,多种决定着一种特异性,多种决定着一种特异性,多种AD
14、AD决定着多种特异性决定着多种特异性决定着多种特异性决定着多种特异性3 3、部位部位部位部位 位于抗原表面的位于抗原表面的位于抗原表面的位于抗原表面的ADAD能直接被相应淋能直接被相应淋能直接被相应淋能直接被相应淋巴细胞所识别,称巴细胞所识别,称巴细胞所识别,称巴细胞所识别,称功能性决定簇,功能性决定簇,功能性决定簇,功能性决定簇,存在抗原分子内存在抗原分子内存在抗原分子内存在抗原分子内部的部的部的部的ADAD无激发免疫应答的功能,称隐蔽决定簇。无激发免疫应答的功能,称隐蔽决定簇。无激发免疫应答的功能,称隐蔽决定簇。无激发免疫应答的功能,称隐蔽决定簇。只有经理化因素处理后,使之暴露可能成为新的
15、功只有经理化因素处理后,使之暴露可能成为新的功只有经理化因素处理后,使之暴露可能成为新的功只有经理化因素处理后,使之暴露可能成为新的功能决定簇。能决定簇。能决定簇。能决定簇。4 4 4 4、大小、大小、大小、大小 抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结合部位相当。合部位相当。合部位相当。合部位相当。一个蛋白质抗原决定簇含一个蛋白质抗原决定簇含一个蛋白质抗原决定簇含一个蛋白质抗原决定簇含5-75-75-75-7个氨基酸残基个氨基酸残基个氨基酸残基个氨基酸残基一个多糖抗原决定簇含一个多糖抗原决定簇含一
16、个多糖抗原决定簇含一个多糖抗原决定簇含5-75-75-75-7个单糖个单糖个单糖个单糖一个核酸半抗原决定簇含一个核酸半抗原决定簇含一个核酸半抗原决定簇含一个核酸半抗原决定簇含6-86-86-86-8个核苷酸个核苷酸个核苷酸个核苷酸5 5 5 5、抗原结合价、抗原结合价、抗原结合价、抗原结合价(antigenic valence)antigenic valence)antigenic valence)antigenic valence)是指能和是指能和是指能和是指能和抗体分子结合的抗原决定簇的总数。抗体分子结合的抗原决定簇的总数。抗体分子结合的抗原决定簇的总数。抗体分子结合的抗原决定簇的总数。半
17、抗原为一价半抗原为一价半抗原为一价半抗原为一价天然抗原的分子结构复杂,分子表面有多个决定天然抗原的分子结构复杂,分子表面有多个决定天然抗原的分子结构复杂,分子表面有多个决定天然抗原的分子结构复杂,分子表面有多个决定簇为多价簇为多价簇为多价簇为多价 构象决定簇构象决定簇构象决定簇构象决定簇:序列上不相连而依赖于蛋白序列上不相连而依赖于蛋白质或多糖的空间构象形成的决定簇,多暴质或多糖的空间构象形成的决定簇,多暴露于抗原分子表面。露于抗原分子表面。顺序决定簇顺序决定簇顺序决定簇顺序决定簇:一段相连的氨基酸序列所形一段相连的氨基酸序列所形成的决定簇,多位于抗原分子内部。成的决定簇,多位于抗原分子内部。
18、功能性功能性功能性功能性ADADADAD:分子表面,易被识别分子表面,易被识别隐蔽性隐蔽性隐蔽性隐蔽性AD.AD.AD.AD.分子内部分子内部B B B B细胞决定簇:细胞决定簇:细胞决定簇:细胞决定簇:分子表面分子表面T T T T细胞决定簇:细胞决定簇:细胞决定簇:细胞决定簇:分子内部分子内部AD的分类:的分类:三、共同抗原和交叉反应三、共同抗原和交叉反应 两种来源不同的抗原,除各有其主要的特异性两种来源不同的抗原,除各有其主要的特异性两种来源不同的抗原,除各有其主要的特异性两种来源不同的抗原,除各有其主要的特异性抗原决定簇外,相互之间也存在部分相同的抗抗原决定簇外,相互之间也存在部分相同
19、的抗抗原决定簇外,相互之间也存在部分相同的抗抗原决定簇外,相互之间也存在部分相同的抗原决定簇,这种共有的抗原决定簇称为原决定簇,这种共有的抗原决定簇称为原决定簇,这种共有的抗原决定簇称为原决定簇,这种共有的抗原决定簇称为共同抗共同抗共同抗共同抗原。原。原。原。亲缘关系很近的生物之间存在的共同抗原称为亲缘关系很近的生物之间存在的共同抗原称为亲缘关系很近的生物之间存在的共同抗原称为亲缘关系很近的生物之间存在的共同抗原称为类属抗原。类属抗原。类属抗原。类属抗原。无种属关系的生物之间存在的共同抗原称为无种属关系的生物之间存在的共同抗原称为无种属关系的生物之间存在的共同抗原称为无种属关系的生物之间存在的
20、共同抗原称为异异异异嗜性抗原。嗜性抗原。嗜性抗原。嗜性抗原。一种共同抗原刺激机体产生的抗体,可与其他一种共同抗原刺激机体产生的抗体,可与其他一种共同抗原刺激机体产生的抗体,可与其他一种共同抗原刺激机体产生的抗体,可与其他含有共同抗原的物质发生结合反应,称为含有共同抗原的物质发生结合反应,称为含有共同抗原的物质发生结合反应,称为含有共同抗原的物质发生结合反应,称为交叉交叉交叉交叉反应。反应。反应。反应。3.抗原的分类抗原的分类根据抗原的性质分类:根据抗原的性质分类:根据抗原的性质分类:根据抗原的性质分类:完全抗原完全抗原完全抗原完全抗原 半抗原半抗原半抗原半抗原 根据抗原与机体的亲缘关系分类:根
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