《基因工程的基本操作程序》课件好.ppt
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1、 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序思考思考:转基因抗虫棉的大致培育过程转基因抗虫棉的大致培育过程?基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定一、目的一、目的基因基因的获取的获取主要是编码蛋白质的结构基因主要是编码蛋白质的结构基因现代获取方法:现代获取方法:1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、化学方法人工合成、化学方法人工合成初始目
2、的基因的来源初始目的基因的来源从生物中直接获取人工合成外显子内含子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核生物基因原核生物基因真核生物基因真核生物基因1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNADNA片断,片断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。这种生物的不同基因,称为基因文库。基因文库基因文库 基因组文库基因组文库部分基因文库部分基因文库(CDNA文库文库)某生物体内某生物体内全部全部DN
3、ADNA 许多许多DNADNA片段片段受体菌群体受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因限制酶限制酶与运载体连接与运载体连接 导入导入基因组文库基因组文库某种生物某个时期的某种生物某个时期的mRNAmRNAcDNAcDNA反转录反转录受体菌群体受体菌群体与运载体连接与运载体连接 导入导入部分基因文库部分基因文库(cDNA文库)文库)2、利用利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 聚合酶链式反应,在生物体外复制特定聚合酶链式反应,在生物体外复制特定DNADNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。因。循环循环变性变性退火退
4、火延伸延伸二二.基因表达载体的构建基因表达载体的构建-核心核心基因表达载体的构建过程基因表达载体的构建过程质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子(重组质粒)分子(重组质粒)同一种同一种一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端复制原点复制原点+启动子启动子+目的基因目的基因+终止子终止子+标志基因标志基因基因表达载体的组成三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞转化转化常用的受体细胞:常用的受体细胞:有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等
5、。酵母菌和动植物细胞等。将目的基因导入受体细胞的原理将目的基因导入受体细胞的原理借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞-农杆菌转化法农杆菌转化法转化转化农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞1.1.将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞转化转化农杆菌转化法农杆菌转化法基因枪法基因枪法花粉管通道法花粉管通道法2.2.将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞显微注射技术显微注射技术提纯基
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