BJS201707植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定.doc
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1、1附件植物蛋白饮料中植物源性成分鉴定 BJS 2017071 范围本方法规定了食品核桃源性成分、花生源性成分、杏仁源性成分、芝麻源性成分、榛子源性成分、大豆源性成分鉴定的实时荧光PCR方法。本方法适用于核桃露(乳)、杏仁露、果仁露等复合植物蛋白饮料中标识含有核桃源性成分、花生源性成分、杏仁源性成分、芝麻源性成分、榛子源性成分、大豆源性成分的检测及鉴定。2 原理提取试样中基因组DNA,以DNA为模板,利用物种特异性引物及探针进行实时荧光PCR扩增检测,同时设置阳性、阴性及空白对照。根据扩增的Ct值,判定试样中是否含有该源性成分。3 试剂和材料除另有规定外,试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB
2、 6682的要求。所有试剂均用无DNA 酶污染的容器分装。3.1 核桃源性成分 Jugr2 基因检测用引物对序列为:核桃5端引物:5-CGCGCAGAGAAAGCAGAG-3核桃3端引物:5-GACTCATGTCTCGACCTAATGCT-3核桃探针:5-FAM-TTGTGCCTCTGTTGCTCCTCTTCCC-TAMRA-33.2 花生源性成分 Ara b2 基因检测用引物(对)序列为:花生5端引物:5-GCAACAGGAGCAACAGTTCAAG-3花生3端引物:5-CGCTGTGGTGCCCTAAGG-3花生探针:5-FAM-AGCTCAGGAACTTGCCTCAACAGTGCG-Ec
3、lipse-33.3 杏仁源性成分 Prudul 基因检测用引物(对)序列为:杏仁5端引物:5-TTTGGTTGAAGGAGATGCTC-3杏仁3端引物:5-TAGTTGCTGGTGCTCTTTATG-3杏仁探针:5-FAM-TCCATCAGCAGATGCCACCAAC- Eclipse-33.4 芝麻源性成分 2S albumim mRNA 基因检测用引物(对)序列为:芝麻5端引物:5-CCAGAGGGCTAGGGACCTTC-32芝麻3端引物:5-CTCGGAATTGGCATTGCTG-3芝麻探针:5-FAM-TCGCAGGTGCAACATGCGACC- TAMRA-33.5 榛子源性成分
4、 oleosin 基因检测用引物(对)序列为:榛子5端引物:5-CCCCGCTGTTTGTGATAT-3榛子3端引物:5-ATGATAATAAGCGATACTGTGAT-3榛子探针:5-FAM-TCCCGTTCTCGTCCCTGCGGT- Eclipse-33.6 大豆源性成分 Lectin 基因检测用引物(对)序列为:大豆5端引物:5-GCCCTCTACTCCACCCCCA-3大豆3端引物:5-GCCCATCTGCAAGCCTTTTT-3大豆探针:5-FAM-AGCTTCGCCGCTTCCTTCAACTTCAC- TAMRA-33.7 真核生物 18SrRNA 内参照检测用引物(对)序列为:
5、内参照5端引物: 5-TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA-3内参照3端引物: 5-AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT-3内参照探针:5-FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC- TAMRA-33.8 CTAB 缓冲液:55 mmol/L CTAB,1400mmol/L NaCl,20 mmol/L EDTA,100 mmol/L Tris,用 10%盐酸调节 pH 至 8.0,121高压灭菌 20 min, 备用。3.9 蛋白酶 K:20mg/mL。3.10 苯酚:氯仿:异戊醇(体积比:25:24:1)。3.11 异丙醇。3.1
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