球菌(2010).ppt
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1、球球 菌菌华中科技大学同济医学院附属协和医院华中科技大学同济医学院附属协和医院熊熊 艳艳 革兰阳性球菌革兰阳性球菌 触酶(触酶(-)触酶触酶(+)链球菌科链球菌科 微球菌科微球菌科 链球菌链球菌 肠球菌肠球菌 微球菌微球菌葡萄球菌葡萄球菌微球菌科内各属的主要鉴别要点微球菌科内各属的主要鉴别要点 触酶触酶试验试验葡萄糖发酵葡萄糖发酵试验试验动力动力对杆菌肽耐药对杆菌肽耐药(0.04U纸片)纸片)葡萄球菌属葡萄球菌属+-+微球菌属微球菌属+-口腔球菌属口腔球菌属V+-游动球菌属游动球菌属+-+V+:多数(:多数(90%)阳性;)阳性;-:多数(:多数(90%)阴性;)阴性;V:不定不定第一节第一节
2、 葡萄球菌属葡萄球菌属 一生物学特性一生物学特性(一)形态与结构(一)形态与结构 革兰染色阳性,呈圆球形,葡萄状排列。革兰染色阳性,呈圆球形,葡萄状排列。无鞭毛和芽胞。无鞭毛和芽胞。(二)培养特性(二)培养特性 需氧或兼性厌氧,营养要求不高。多数需氧或兼性厌氧,营养要求不高。多数菌株耐盐性强,能在菌株耐盐性强,能在10101515NaClNaCl琼脂中琼脂中生长。生长。菌落:圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘菌落:圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明,可产生不同的脂溶性色整齐并且不透明,可产生不同的脂溶性色素。素。血血琼琼脂脂:多多数数致致病病性性菌菌株株可可产产生生透透明明溶血环,且菌落
3、较大。溶血环,且菌落较大。高高盐盐卵卵磷磷脂脂平平板板:菌菌落落周周围围形形成成白白色色沉淀环,可用于筛选。沉淀环,可用于筛选。亚亚磷磷酸酸钾钾甘甘氨氨酸酸琼琼脂脂:黑黑色色扁扁平平的的小小菌落。菌落。2022/12/20(三)生化反应(三)生化反应(三)生化反应(三)生化反应 触酶试验阳性。触酶试验阳性。葡萄糖氧化发酵试验:发酵葡萄糖氧化发酵试验:发酵+,对糖的发,对糖的发酵反应不规则。酵反应不规则。多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、多数致病性葡萄球菌能分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶。液化明胶和产生血浆凝固酶。2022/12/20(四)抗原构造(四)抗原构造(四)抗原构造(四)抗
4、原构造 1 1蛋白抗原:葡萄球菌蛋白抗原:葡萄球菌A A蛋白(蛋白(SPASPA)l 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁。存在于金黄色葡萄球菌细胞壁。l SPASPA可可与与人人类类IgGIgG的的FcFc段段非非特特异异性性结结合合而而不不影影响响FabFab段,应用于段,应用于协同凝集试验协同凝集试验。l 抵抗吞噬细胞的吞噬。抵抗吞噬细胞的吞噬。2 2多糖抗原:型特异性多糖抗原:型特异性 A A型型多多糖糖抗抗原原:带带有有NN乙乙酰酰葡葡萄萄糖糖胺胺的的核核糖醇,存在于绝大多数金葡菌中。糖醇,存在于绝大多数金葡菌中。B B型型多多糖糖抗抗原原:甘甘油油磷磷壁壁酸酸,来来自自非非致致病病性性葡葡萄
5、萄球菌。球菌。C C型多糖抗原:型多糖抗原:2022/12/20(五)分类及分型(五)分类及分型 葡萄球菌包括葡萄球菌包括35个种及个种及17个亚种个亚种根据产生色素的不同分类根据产生色素的不同分类根据产生凝固酶与否进行分类根据产生凝固酶与否进行分类按噬菌体分型法分类按噬菌体分型法分类葡萄球菌传统分类葡萄球菌传统分类金黄色金黄色葡萄球菌葡萄球菌表皮表皮葡萄球菌葡萄球菌腐生腐生葡萄球菌葡萄球菌产生溶血毒素产生溶血毒素+产生凝固酶产生凝固酶+产生耐热产生耐热DNA酶酶+产生产生SPA+新生霉素敏感性新生霉素敏感性SSR致病性致病性强强弱弱无无(六)抵抗力(六)抵抗力l是抵抗力最强的无芽胞细菌之一。
6、是抵抗力最强的无芽胞细菌之一。l耐干燥耐干燥可达数月。可达数月。l对龙胆紫敏感。对龙胆紫敏感。l易形成耐药性:耐甲氧西林金黄色葡萄易形成耐药性:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(球菌(MRSA)已成为医院感染最常见)已成为医院感染最常见的致病菌。的致病菌。二致病性和免疫性二致病性和免疫性 (一)(一)致病物质致病物质 金金葡葡菌菌的的致致病病性性主主要要与与其其所所产产生生的的各各种种侵侵袭袭性性酶酶,如如:血血浆浆凝凝固固酶酶、耐耐热热核核酸酸酶酶、透透明明质质酸酸酶酶、溶溶纤纤维维蛋蛋白白酶酶等等,以以及及各各种种外外毒毒素,如溶血毒素、杀白细胞毒素等有关。素,如溶血毒素、杀白细胞毒素等有关。凝固
7、酶凝固酶游离凝固酶:游离凝固酶:采用试管法检测采用试管法检测结合凝固酶:结合凝固酶:采用玻片法检测采用玻片法检测金葡菌凝固酶试验均为阳性金葡菌凝固酶试验均为阳性凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志游离凝固酶游离凝固酶协同因子协同因子凝血酶凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白血浆凝固血浆凝固结合凝固酶(位于菌体表面)结合凝固酶(位于菌体表面)纤维蛋白原纤维蛋白原纤维蛋白纤维蛋白细菌凝集细菌凝集注意事项:注意事项:不不要要用用枸枸橼橼酸酸盐盐血血浆浆,以以防防止止能能利利用用枸枸橼橼酸酸盐盐的细菌出现假阳性。的细菌出现假阳性。玻片法必须用大量的细菌和少量的血浆。玻
8、片法必须用大量的细菌和少量的血浆。试管法检查凝块形成时,不要摇动试管。试管法检查凝块形成时,不要摇动试管。凝凝固固酶酶 结合凝固酶(凝聚因子)结合凝固酶(凝聚因子):纤维蛋白原受体:纤维蛋白原受体玻片法阳性玻片法阳性 游游离离凝凝固固酶酶:类类似似凝凝血血酶酶原原物物质质,可可被被协协同同因因子激活子激活试管法阳性试管法阳性2022/12/20(二)所致疾病(二)所致疾病 葡葡萄萄球球菌菌感感染染的的特特点点是是:感感染染部部位位组组织织的的化化脓脓、坏死和脓肿形成。坏死和脓肿形成。金金葡葡、表表皮皮和和腐腐生生是是引引起起临临床床感感染染最最常常见见的的葡葡萄球菌。萄球菌。金金葡葡引引起起的
9、的常常见见感感染染有有:疖疖、痈痈、外外科科切切口口、创创伤伤等等局局部部化化脓脓性性感感染染和和骨骨髓髓炎炎、化化脓脓性性关关节节炎炎、肺炎、心内膜炎、脑膜炎等全身性感染。肺炎、心内膜炎、脑膜炎等全身性感染。表表皮皮葡葡萄萄球球菌菌引引起起人人工工瓣瓣膜膜性性心心内内膜膜炎炎、静静脉脉导导管管感感染染、腹腹膜膜透透析析性性腹腹膜膜炎炎、血血管管移移植植物物感感染染和和人工关节感染等。人工关节感染等。腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌是女性尿路感染的重要病原菌。是女性尿路感染的重要病原菌。n(三)免疫性(三)免疫性有一定天然免疫力。有一定天然免疫力。病后获得的免疫力作用不强、不持久。病后获得的免疫力作用
10、不强、不持久。三微生物学检验三微生物学检验 细菌鉴定的基本程序细菌鉴定的基本程序标本标本直接涂片直接涂片革兰染色镜检革兰染色镜检分离培养分离培养取可疑菌落取可疑菌落鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验结果报告结果报告(一)标本采集(一)标本采集l 根据病种不同,采集不同标本根据病种不同,采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、脑脊液、粪便等。尿液、痰液、脑脊液、粪便等。(二)检验程序(二)检验程序脓、穿刺液、尿液、痰脓、穿刺液、尿液、痰脑脊液脑脊液血液血液粪便、呕吐物粪便、呕吐物增菌培养增菌培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养直
11、接涂片染色直接涂片染色鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验菌落涂片染色菌落涂片染色血浆凝固酶血浆凝固酶耐热核酸酶耐热核酸酶药敏试验药敏试验其它试验其它试验报告报告(三)检验方法(三)检验方法(三)检验方法(三)检验方法 1 1直接镜检直接镜检 2 2分离培养分离培养 3 3鉴定试验鉴定试验触酶试验触酶试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验耐耐热热核核酸酸酶酶试试验验:此此酶酶与与血血浆浆凝凝固固酶酶具具有有同同等等诊断意义。诊断意义。SPASPA的的检检测测:SPASPA能能与与兔兔抗抗羊羊红红细细胞胞血血清清中中的的IgGIgG的的FcFc段结合,使致敏羊红细胞发生凝集
12、。段结合,使致敏羊红细胞发生凝集。2022/12/20检验方法检验方法直接镜检直接镜检方法方法:取标本直接涂片取标本直接涂片,革兰染色后镜检革兰染色后镜检初步报告初步报告:“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌,疑似查见革兰阳性葡萄串状排列球菌,疑似葡萄球菌葡萄球菌”“查见革兰阳性球菌查见革兰阳性球菌”检验方法检验方法分离培养分离培养脓、痰、脑脊液标本脓、痰、脑脊液标本接种血平板接种血平板菌落特征:光滑型、中等大小、脂溶性菌落特征:光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血环(色素、透明溶血环(-溶血环)溶血环)检验方法检验方法分离培养分离培养粪便标本粪便标本高盐甘露醇平板高盐甘露醇平板菌落特征:光滑型、
13、中等大小、淡黄色菌落特征:光滑型、中等大小、淡黄色菌落菌落检验方法检验方法分离培养分离培养血标本血标本增菌(葡萄糖肉汤)增菌(葡萄糖肉汤)分分离培养(血平板)离培养(血平板)生长现象:混浊、胶胨状凝固、溶血生长现象:混浊、胶胨状凝固、溶血金葡菌的鉴定依据金葡菌的鉴定依据血平板上金黄色色素、血平板上金黄色色素、-溶血环溶血环血浆凝固酶血浆凝固酶 +发酵甘露醇发酵甘露醇 +耐热核酸酶耐热核酸酶 +凝固酶阴性葡萄球菌(凝固酶阴性葡萄球菌(CNS)条件致病菌条件致病菌医院内感染的重要病原菌医院内感染的重要病原菌对多种抗生素耐药对多种抗生素耐药凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别凝固酶阳性葡萄球菌的鉴别 结合结合型
14、血型血浆凝浆凝固酶固酶游离游离型血型血浆凝浆凝固酶固酶PYR试验试验 耐热耐热核酸核酸酶试酶试验验 V-P试试验验 鸟氨鸟氨酸脱酸脱羧酶羧酶试验试验 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌+-+-中间型葡萄球菌中间型葡萄球菌-+罕见罕见+-希氏葡萄球菌希氏葡萄球菌+-+-里昂葡萄球菌里昂葡萄球菌+-+-+:多数(:多数(90%)阳性;)阳性;-:多数(:多数(90%)阴性;)阴性;(四)结果评价和报告(四)结果评价和报告 1.1.金金葡葡菌菌系系毒毒力力很很强强的的致致病病菌菌,无无论论从从任任何何标标本本中中分分离离出出均均应应及及时时鉴鉴定定、进进行行药药敏试验和敏试验和尽快报告临床尽快报告临床。2
15、.2.从从输输液液导导管管、人人工工植植入入组组织织中中分分离离出出的的表表皮皮葡葡萄萄球球菌菌和和从从尿尿液液标标本本中中分分离离出出的的腐生葡萄球菌应视为病原菌。腐生葡萄球菌应视为病原菌。3.3.由由于于葡葡萄萄球球菌菌在在尿尿液液中中生生长长缓缓慢慢,故故尿尿液液培培养养菌菌落落计计数数应应考考虑虑为为10103 310104 4/mlml为为阳性菌尿阳性菌尿标准。标准。(四)结果评价和报告(四)结果评价和报告 4.4.其其它它凝凝固固酶酶阴阴性性葡葡萄萄球球菌菌引引起起感感染染流流行行或临床治疗失败时应考虑将其鉴定到种。或临床治疗失败时应考虑将其鉴定到种。5.5.当当MRSAMRSA对
16、对头头孢孢菌菌素素类类的的体体外外药药敏敏试试验验表表现现为为“敏敏感感”时时,不不能能将将这这种种假假象象向向临临床报告,以免造成错误导向。床报告,以免造成错误导向。葡萄球菌最严重的耐药问题:葡萄球菌最严重的耐药问题:MRSMRS(耐甲氧西林的葡萄球菌耐甲氧西林的葡萄球菌)MRSAMRSA(耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌)MRCNSMRCNS(耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林的凝固酶阴性葡萄球菌)VRSAVRSA(耐万古霉素的金黄色葡萄球菌耐万古霉素的金黄色葡萄球菌)MRSMRS耐药机理和特征:耐药机理和特征:MRSMRS具有一外来基因具有一外来基因mecAme
17、cA,它负责编码青霉它负责编码青霉素结合蛋白素结合蛋白2 2a a(PBP2a)PBP2a)。当抗生素作用于当抗生素作用于MRSMRS时,时,PBP2aPBP2a替代了其他替代了其他PBPPBP合成细胞壁的功能。合成细胞壁的功能。但但PBP2aPBP2a与与 内酰胺类抗生素的亲和力极低,内酰胺类抗生素的亲和力极低,故对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等抗故对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等抗生素广谱耐药。同时生素广谱耐药。同时由于基因的连锁性,往往由于基因的连锁性,往往对对内酰胺类以外的氨基糖苷类、大环内酯类、内酰胺类以外的氨基糖苷类、大环内酯类、喹诺酮类、四环素类、林可霉素类等多种抗菌喹诺
18、酮类、四环素类、林可霉素类等多种抗菌药物也耐药。药物也耐药。第二节第二节 链球菌属链球菌属 一链球菌一链球菌 (一)生物学特性(一)生物学特性形态染色形态染色培养特点培养特点生化反应生化反应抗原构造抗原构造分类分类抵抗力抵抗力1.形态与染色形态与染色革兰阳性球菌,呈链状排列,无鞭毛,革兰阳性球菌,呈链状排列,无鞭毛,无芽胞,可形成荚膜。无芽胞,可形成荚膜。在液体培养基中易形成长链在液体培养基中易形成长链 致病性强的菌株多为长链致病性强的菌株多为长链 在脓汁标本中多为短链在脓汁标本中多为短链2.培养特点生长条件培养特点生长条件营养要求高,在含血液、血清培养基上生营养要求高,在含血液、血清培养基上
19、生长良好。长良好。需氧或兼性厌氧,需氧或兼性厌氧,少数为专性厌氧,在少数为专性厌氧,在5 5COCO2 2环境下生长更好环境下生长更好。培养特点生长现象培养特点生长现象液体培养基:呈沉淀生长现象。液体培养基:呈沉淀生长现象。血平板:灰白色、细小、圆形、光滑的、血平板:灰白色、细小、圆形、光滑的、有不同溶血现象的菌落。有不同溶血现象的菌落。分类分类菌落特征菌落特征甲型(甲型()溶血性链)溶血性链球菌球菌灰色、针尖状菌落、周围有草绿灰色、针尖状菌落、周围有草绿色溶血环(色溶血环(溶血)溶血)乙型(乙型()溶血性链)溶血性链球菌球菌灰白色、细小菌落、周围有宽大灰白色、细小菌落、周围有宽大透明溶血环(
20、透明溶血环(溶血溶血)丙型(丙型()链球菌)链球菌灰白色小菌落、无溶血环灰白色小菌落、无溶血环3.生化反应生化反应触酶试验()触酶试验()A群链球菌:杆菌肽敏感试验(群链球菌:杆菌肽敏感试验(+)B群链球菌:群链球菌:CAMP试验(试验(+)、马尿酸)、马尿酸钠水解试验(钠水解试验(+)D群链球菌:胆汁七叶苷试验(群链球菌:胆汁七叶苷试验(+)4.4.抗原构造抗原构造I.I.蛋蛋白白质质抗抗原原:型型特特异异性性抗抗原原(M M、R R、S S、T T蛋白抗原)蛋白抗原)II.II.多糖抗原:群特异性抗原(多糖抗原:群特异性抗原(“C”C”抗原)抗原)III.III.核蛋白抗原:无特异性(核蛋
21、白抗原:无特异性(“P”P”抗原)抗原)5.5.分类分类根据溶血现象分类:根据溶血现象分类:根据抗原结构分类:按链球菌细胞壁中根据抗原结构分类:按链球菌细胞壁中多糖抗原不同分群多糖抗原不同分群根据链球菌生化特点、培养特点及溶血根据链球菌生化特点、培养特点及溶血现象等特征分类现象等特征分类分类分类根据溶血现象分类根据溶血现象分类甲型溶血性链球菌:属条件致病菌甲型溶血性链球菌:属条件致病菌乙型溶血性链球菌:致病力强乙型溶血性链球菌:致病力强丙型链球菌:无致病力丙型链球菌:无致病力分类分类根据抗原构造分类根据抗原构造分类群特异性抗原(群特异性抗原(C抗原):细胞壁多糖抗抗原):细胞壁多糖抗原,可将链
22、球菌分为原,可将链球菌分为20群(群(A、B、C、D、F等),等),引起人类感染的链球菌引起人类感染的链球菌90为为A群。群。型特异性抗原(表面抗原):细胞壁蛋型特异性抗原(表面抗原):细胞壁蛋白抗原,有白抗原,有M、T、R、S四种,根据四种,根据M抗抗原不同,可将原不同,可将A群分为群分为100型。型。常见链球菌生物种的鉴别常见链球菌生物种的鉴别生物种生物种多糖多糖抗原抗原溶血溶血65g/LNaCl精氨酸精氨酸马尿酸马尿酸盐盐胆汁七胆汁七叶甘叶甘化脓性链球菌化脓性链球菌A-+-无乳链球菌无乳链球菌Bd+-类马链球菌类马链球菌C-+-兽疫链球菌兽疫链球菌C-+-马肠链球菌马肠链球菌D-+粪链球
23、菌粪链球菌D+血链球菌血链球菌H-+-唾液链球菌唾液链球菌K-+-肺炎链球菌肺炎链球菌-+-乙型溶血性链球菌的进一步鉴定乙型溶血性链球菌的进一步鉴定 分分群群菌菌落落菌种菌种PYR试验试验VP试验试验CAMP试验试验海藻糖海藻糖山梨醇山梨醇A 大大 化脓性链球菌化脓性链球菌+-A 小小米勒链球菌米勒链球菌-+-B无乳链球菌无乳链球菌-+C 大大马链球菌马链球菌-C 大大类马链球菌类马链球菌-+-C 大大兽疫链球菌兽疫链球菌-+C 小小米勒链球菌米勒链球菌-+-F 小小米勒链球菌米勒链球菌-+-G 大大类马链球菌类马链球菌-G 小小米勒链球菌米勒链球菌-+-6.6.抵抗力抵抗力 抵抗力不强,对临
24、床常用抗菌药物都抵抗力不强,对临床常用抗菌药物都很敏感。很敏感。(二(二)致病性和免疫性致病性和免疫性致病物质致病物质所致疾病所致疾病免疫性免疫性临床意义临床意义A群链球菌群链球菌致病物质致病物质:致热外毒素:致热、细胞毒作用、使皮肤致热外毒素:致热、细胞毒作用、使皮肤产生红疹、抗原性强。产生红疹、抗原性强。溶血素:溶解红细胞、破坏血小板和白细溶血素:溶解红细胞、破坏血小板和白细胞,分为溶血素胞,分为溶血素O和溶血素和溶血素S两种。两种。侵袭性酶:透明质酸酶、链激酶、链道酶,侵袭性酶:透明质酸酶、链激酶、链道酶,有利于细菌在体内扩散。有利于细菌在体内扩散。M蛋白:具有抗吞噬作用;与肾小球基底蛋
25、白:具有抗吞噬作用;与肾小球基底膜有共同抗原成分,与超敏反应有关。膜有共同抗原成分,与超敏反应有关。链球菌溶素链球菌溶素O对氧敏感。对氧敏感。抗原性强,刺激机体产生抗抗原性强,刺激机体产生抗O抗体。抗体。抗抗O试验可用于风湿热等链球菌感染所致试验可用于风湿热等链球菌感染所致超敏反应性疾病的辅助诊断。超敏反应性疾病的辅助诊断。临床意义临床意义A群链球菌群链球菌所致疾病所致疾病化脓性感染:扁桃体炎、丹毒、蜂窝织化脓性感染:扁桃体炎、丹毒、蜂窝织炎、淋巴管炎、败血症等炎、淋巴管炎、败血症等猩红热猩红热风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎风湿热、链球菌感染后肾小球肾炎临床意义其他链球菌临床意义其他链球菌B群
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