微生物实验中常见的问题汇总.docx
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1、微生物实验中常见的问题汇总微生物实验中常见的问题汇总一、无菌操作要求 1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时,必须穿专用的工作服、帽及拖鞋,应放在无菌室缓冲间, 工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时,应在进无菌室前用肥皂洗手,然后用 75酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管,平皿及培养基等必须经消毒灭菌,打开包装未使用完的器皿,不能放置后再使用,金属用具应高压灭菌或用 95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时,吸管尖部不能触及外露部位,使用吸管接种于试管或平皿时,吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯
2、前操作,接种细菌或样品时,吸管从包装中取 出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝,必要时还要烧到环和针与杆 的连接处,接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸 5min,再经火焰烧灼。8. 吸管吸取菌液或样品时,应用相应的橡皮头吸取,不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃,并要密封,不得随意打开,并设有与无菌 间大小相应的缓冲间及推拉门,另设有 0.5-0.7 平方米的小窗,以备进入无菌间后传递物品。2、无菌间内应保持清洁,工作后用 2%-3%煤酚皂溶液消毒,擦拭工作台面,不得存放与实验无关的物品。 3、无菌间使
3、用前后应将门关紧, 打开紫外灯,如采用室内悬吊紫外灯消毒时,需 30W 紫外灯,距离在 1.0m 处,照射时间不少于 30min,使用紫外灯,应注意不得直接在紫外线下操作,以免引起损伤,灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭,除去上面灰尘和油垢,以减少紫外线穿透的影响。 4、处理和接种食品标本时,进入无菌间操作,不得随意出入,如需要传递物品,可通过小窗传递。 5、在无菌间内如需要安装空调时,则应有过滤装置。三、消毒灭菌要求微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等,必须经灭菌后方能使用。(一)干热和湿热高压蒸气锅灭菌方法1、灭菌前准备(1)所有需要灭菌的物品首先应清洗晾干,玻璃
4、器皿如吸管、平皿用纸包装严密,如 用金属筒应将上面通气孔打开。(2)装培养基的三角瓶塞,用纸包好,试管盖好盖,注射器须将管芯抽出,用纱布包 好。2、装放(1)干热灭菌器:装放物品不可过挤,且不能接触箱的四壁。(2)大型高压蒸气锅:放置灭菌物品分别包扎好,直接放入消毒筒内,物品之间不能 过挤。3、设备检查(1)检查门的开关是否灵活,橡皮圈有无损坏,是否平整。(2)检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位,关好门和盖,通蒸气或加热后,观察是式高压锅或立式压力蒸气灭菌器的使用应按下列步骤进行:手提式高压锅在主体内加入 3L 清水,立式高压锅加水 16L(重复使用时应将水 量补足,水变混浊需更换).手提式压
5、力锅将顶盖上的排气管插入消毒桶内壁的方管中(无软管或软管锈蚀破裂的灭菌器不得使用) 。盖好顶盖拧紧,勿使漏气;置灭菌器于火源上加热,立式压力锅通上电源,并打开顶盖上的排气阀放了冷气(水沸腾后排气 10-15min) 。关闭排气阀,使蒸气压上升到规定要求,并维持规定时间(按灭菌物品性质与有关情况而定) 。达到规定时间后,对需干燥的物品,立即打开排气阀排出蒸气,待压力恢复到零时,自然冷却至 60后开盖取物,如为液体物品,不要打开排气阀,而应立即将锅去除热源,待自然冷却,压力恢复至零,温度降到 60以下再开盖取物,以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破。 (3)卧式压力锅蒸气灭菌器的使用按下列步骤进行:
6、关紧锅门,打开进气阀,将蒸气引入夹层进行预热,夹层内冷空气经阻气器自动排出。 夹层达到预定温度后,打开锅室进气阀,将蒸气引入锅室,锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。待锅室达到规定的压力与温度时,调节进气阀,使保持恒定。自然或人工降温至 60再开门取物,不得使用快速排出蒸气法,以防突然降压,液体剧烈沸腾或容器爆破。使用自动程序控制式压力蒸气灭菌器,在放好物品关紧门后,应根据物品类别按 动相应开关,以便按要求程序自动进行灭菌,灭菌时必须利用附设仪表记录温度与时间以备查,操作要求应严格按照厂家说明书进行。5、灭菌温度与时间(1)干热灭菌器灭菌温度 160,1.5-2h。(2)压力蒸气灭菌 锅灭菌温度
7、与时间。(二)间歇灭菌方法1、灭菌方法系利用不加压力的蒸气灭菌,某些物质经高压蒸气灭菌容易破坏,可用此法灭菌。(1)将欲灭菌物品置于锅内,盖上顶盖,打开排水口,使器内余水排尽。(2)关闭排水口,打开进气门,根据需要消毒 1020min。 (3)灭菌完毕关闭进气门,取出物品待冷至室温温度,放入 37温箱过夜,次日仍按上述方法消毒,如此三次,即可达到灭菌目的。2、血清凝固器使用方法,培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时,因高热会破坏其营 养成份,故用低温,可使血清凝固,又可达到灭菌目的。(1)在使用该法灭菌的血清等分装时,需严格遵守无菌操作,试管、平皿也经灭菌后使用。(2)将培养基按要求使成斜面或高层
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