新生儿溶血的检测zhy.ppt
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1、复习复习n n新生儿溶血病的机制n nABO-HDN的特点n nRh-HDN的特点n n临床表现病理生理病理生理 Rh溶血溶血 ABO溶血溶血胎儿红细胞溶血重胎儿红细胞溶血重心力衰竭心力衰竭髓外造血髓外造血肝脾肿大肝脾肿大胎儿全身水肿胎儿全身水肿低低蛋白血症蛋白血症胎儿重度贫血胎儿重度贫血胎儿血中胆红素胎儿血中胆红素新生儿黄疸新生儿黄疸母亲肝脏母亲肝脏 胎盘胎盘娩出时黄疸不明显娩出时黄疸不明显 新生儿处理胆红素新生儿处理胆红素血清血清UCB过过高高胆红素脑病胆红素脑病 血脑屏障血脑屏障 胎儿红细胞溶血轻胎儿红细胞溶血轻新生儿溶血病血清学检查 通过血清学检查可了解:通过血清学检查可了解:通过血清
2、学检查可了解:通过血清学检查可了解:母婴血型是否不合母婴血型是否不合母婴血型是否不合母婴血型是否不合、母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的母亲血清是否存在与患儿红细胞相对应的IgGIgGIgGIgG性质性质性质性质的抗体及效价的抗体及效价的抗体及效价的抗体及效价、患儿红细胞是否被来自母亲的患儿红细胞是否被来自母亲的患儿红细胞是否被来自母亲的患儿红细胞是否被来自母亲的IgGIgGIgGIgG抗体所致敏抗体所致敏抗体所致敏抗体所致敏,从而对新生儿溶血病进行预防诊断从而对新生儿溶血病进行预防诊断从而对新生儿溶血病进行预防诊断从而
3、对新生儿溶血病进行预防诊断和治疗。和治疗。和治疗。和治疗。血型血清学检查对新生儿溶血病的诊断、血型血清学检查对新生儿溶血病的诊断、预防和治疗有重要意义预防和治疗有重要意义产前检查 孕妇血样本检查孕妇血样本检查孕妇血样本检查孕妇血样本检查(产前检查产前检查产前检查产前检查)是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进是孕妇血液常规进行产前检查,用以鉴定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检查,用以鉴定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检查,用以鉴定这些孕妇妊娠患新生儿行产前检查,用以鉴定这些孕妇妊娠患新生儿溶血病胎儿的危险,一旦被鉴定有此危险时,溶血病胎儿的危险,一旦被鉴定有此危险时,溶血病胎儿的危险,一旦被
4、鉴定有此危险时,溶血病胎儿的危险,一旦被鉴定有此危险时,定期过筛试验可用于确定影响的程度。定期过筛试验可用于确定影响的程度。定期过筛试验可用于确定影响的程度。定期过筛试验可用于确定影响的程度。产前新生儿溶血病的预测产前新生儿溶血病的预测n n产前免疫血液学检查n n羊水检测n n其它检查n nIgGIgG分型分型n nB B超、胎心等超、胎心等产前免疫血液学检查的内容产前免疫血液学检查的内容n n孕产史与输血史n n夫妇血型n nIgG不规则抗体孕产输血史的影响孕产输血史的影响无输血孕无输血孕产史产史1 15 5次输次输血孕产史血孕产史5 5次以上输次以上输血孕产史血孕产史统计人数统计人数32
5、3274741919检出抗体检出抗体*人数人数0 013136 6检出抗体检出抗体占总数占总数0 017.517.531.531.5抗体*:有临床意义的不规则抗体数据来自Transfusion 1984 Nov-Dec;24(6):482-5.妻子血型妻子血型丈夫配合血型丈夫配合血型丈夫不配合血型丈夫不配合血型O OO OA A、B B、ABABA AO O、A AB B、ABABB BO O、B BA A、ABABABABO O、A A、B B、ABAB/RhDRhD+RhDRhD-RhDRhD-/RhDRhDRhDRhD-RhDRhD+孕妇血样本检查1 1、血型鉴定、血型鉴定:包括夫妇的:
6、包括夫妇的ABOABO、RhRh血型血型。孕妇血样本检查2 2 2 2、抗体筛选和鉴定、抗体筛选和鉴定、抗体筛选和鉴定、抗体筛选和鉴定 取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作取母亲血清与筛选红细胞作抗体筛选试验抗体筛选试验抗体筛选试验抗体筛选试验 。如果该试验阳性,应进一步用配组谱细胞作如果该试验阳性,应进一步用配组谱细胞作如果该试验阳性,应进一步用配组谱细胞作如果该试验阳性,应进一步用配组谱细胞作抗体鉴定,以确定抗体的特异性。当检出某一抗抗体鉴定,以确定抗体的特异性。当检出某一抗抗体鉴定,以确定抗体的特异性。当检出某一抗抗体鉴定,以确定抗体的特异性。当检出某
7、一抗体后,需进一步鉴定双亲的相关红细胞抗原。体后,需进一步鉴定双亲的相关红细胞抗原。体后,需进一步鉴定双亲的相关红细胞抗原。体后,需进一步鉴定双亲的相关红细胞抗原。如夫妇如夫妇如夫妇如夫妇ABOABOABOABO血型配合,可直接用孕妇血清加丈血型配合,可直接用孕妇血清加丈血型配合,可直接用孕妇血清加丈血型配合,可直接用孕妇血清加丈夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。夫红细胞做抗体筛查试验。检出有意义的抗体后,应定期复查,检出有意义的抗体后,应定期复查,观测抗体效价变化情况,抗体效价持续升观测抗体效价变化情况,抗体效价持续升高提示胎儿可能受害。必要时可准备产后
8、高提示胎儿可能受害。必要时可准备产后立即换血。立即换血。n n如果抗体筛选试验阴性,只有丈夫红细胞出现阳如果抗体筛选试验阴性,只有丈夫红细胞出现阳如果抗体筛选试验阴性,只有丈夫红细胞出现阳如果抗体筛选试验阴性,只有丈夫红细胞出现阳性反应,则提示孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应,则提示孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应,则提示孕妇血清中存在针对低频率抗原性反应,则提示孕妇血清中存在针对低频率抗原的抗体。的抗体。的抗体。的抗体。n n如果孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿的血型如果孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿的血型如果孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿的血型如果孕妇血清中抗体未针对其丈夫或婴儿的
9、血型抗原,则该抗体可能是由于输血等原因引起的对抗原,则该抗体可能是由于输血等原因引起的对抗原,则该抗体可能是由于输血等原因引起的对抗原,则该抗体可能是由于输血等原因引起的对胎儿无害。胎儿无害。胎儿无害。胎儿无害。n n检测检测RhRh系系HDNHDN的同时,注意母婴的同时,注意母婴ABOABO系系HDNHDN的的并存,需以缺乏该并存,需以缺乏该RhRh抗体相应抗原的抗体相应抗原的A(B)A(B)红细胞进行检测证实。红细胞进行检测证实。n n如母亲如母亲RhRh D D阴性,阴性,A A型型 父亲父亲RhRh D D阳性阳性 B B型型检测母亲体内除抗检测母亲体内除抗-D-D外,是否存在抗外,是
10、否存在抗B B应该用母亲血清应该用母亲血清+RhRh D D阴性的阴性的B B型红细胞反应型红细胞反应母婴Rh血型不合溶血病的血清学检查孕妇血样本的检查孕妇血样本的检查孕妇血样本的检查孕妇血样本的检查 RhRhRhRh阴性第一次怀孕孕妇的抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇的抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇的抗体检测应分别在阴性第一次怀孕孕妇的抗体检测应分别在20202020、28282828、34343434周进行。检测包括对母亲的血清用抗体筛周进行。检测包括对母亲的血清用抗体筛周进行。检测包括对母亲的血清用抗体筛周进行。检测包括对母亲的血清用抗体筛选红细胞以及选红细胞以及选红细胞以及选红细
11、胞以及(在在在在ABOABOABOABO血型配合时)丈夫红细胞作血型配合时)丈夫红细胞作血型配合时)丈夫红细胞作血型配合时)丈夫红细胞作抗体筛选。抗体筛选。抗体筛选。抗体筛选。经产妇或曾输过经产妇或曾输过经产妇或曾输过经产妇或曾输过RhRhRhRh阳性血,怀孕初期作抗体筛阳性血,怀孕初期作抗体筛阳性血,怀孕初期作抗体筛阳性血,怀孕初期作抗体筛查,一旦检出,则至少查,一旦检出,则至少查,一旦检出,则至少查,一旦检出,则至少每每每每4 4 4 4周周周周检测一次,密切观察检测一次,密切观察检测一次,密切观察检测一次,密切观察抗体效价变化抗体效价变化抗体效价变化抗体效价变化。孕妇血样本检查3 3、血
12、清中、血清中IgGIgG抗体及效价的检查抗体及效价的检查:ABOABOABOABO系系系系HDNHDN由由由由IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)引起,检测母亲血清引起,检测母亲血清引起,检测母亲血清引起,检测母亲血清中有无中有无中有无中有无IgGIgG性质的抗性质的抗性质的抗性质的抗A A(B B)抗体及效价,即可预抗体及效价,即可预抗体及效价,即可预抗体及效价,即可预ABOABO系系系系HDNHDN发生的可能性。发生的可能性。发生的可能性。发生的可能性。效价测定方法:效价测定方法:应用应用2-2-巯基乙醇(巯基乙醇(2-Me2-Me)或二硫苏糖)或二硫苏糖醇(醇(DTTDTT)破坏或中和)
13、破坏或中和IgMIgM抗体使之不能再抗体使之不能再与盐水介质中相对应的红细胞凝集。经处与盐水介质中相对应的红细胞凝集。经处理后的血清加盐水进行倍比稀释理后的血清加盐水进行倍比稀释 加入相对加入相对应的红细胞用间接抗球蛋白法检测。应的红细胞用间接抗球蛋白法检测。如何检测IgG类血型抗体?IgGIgG抗体的检测方法抗体的检测方法n n当IAT效价盐水效价4倍或以上时结果可信。n nIgG抗A、B效价可以从32开始检测,其它不规则抗体均从1或2开始检测。n n用唾液血型物质中和IgM抗A,B?值得注意的是无公认的检测高滴度抗A、抗B的实验方法,亦无明确的实验室操作指南。思考:1 1、你认为是否所有的
14、孕妇都应该作抗体筛查?为你认为是否所有的孕妇都应该作抗体筛查?为什么?什么?2 2、如果不是,什么情况下建议孕妇作抗体筛查?、如果不是,什么情况下建议孕妇作抗体筛查?产前检查产前检查羊水检查羊水检查n n抽取羊水检测胆红素抽取羊水检测胆红素n n检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂的比例检测羊水中卵磷脂和鞘磷脂的比例(L/S)(L/S)n n检测羊水中血型抗原帮助判断检测羊水中血型抗原帮助判断ABOABO血型血型 羊水穿刺术容易造成母亲和胎儿出血,并引起羊水穿刺术容易造成母亲和胎儿出血,并引起母亲的免疫反应,因此现在很少有医院采用。母亲的免疫反应,因此现在很少有医院采用。新生儿溶血患儿血样本检查 患儿血样
15、本检查是诊断患儿血样本检查是诊断HDNHDN的最有利证的最有利证据,证实患儿红细胞是否被来自母体的据,证实患儿红细胞是否被来自母体的IgGIgG抗抗A A(B B)抗体所致敏。抗体所致敏。试验包括试验包括红细胞直接抗球蛋白试验、游红细胞直接抗球蛋白试验、游离抗体试验、抗体放散试验。离抗体试验、抗体放散试验。实验室检查实验室检查 试验名称目的方法结果判定 意义直接抗人球蛋白试验测定患儿红细胞上结合的血型抗体“最适稀释度”的抗人球蛋白血清与充分洗涤后的受检红细胞盐水悬液混合红细胞凝聚为阳性红细胞已致敏,为确诊实验Rh溶血病阳性率高而ABO溶血病低抗体释放试验测定患儿红细胞上结合的血型抗体使患儿致敏
16、红细胞结合的母体血型抗体释放于释放液中,该释放液与同型成人红细胞混合,再加入抗人球蛋白血清红细胞凝聚为阳性检测致敏红细胞的敏感试验,为确诊实验Rh和ABO溶血病一般均为阳性游离抗体试验测定患儿血清中来自母体的血型抗体在患儿血清中加入与其相同血型的成人红细胞,再加入抗人球蛋白血清红细胞凝聚为阳性估计是否继续溶血和换血效果,不是确诊试验新生儿溶血患儿血型鉴定n nABO血型鉴定:常规方法n nRh血型鉴定:常规方法ABO-HDN患儿新生儿溶血患儿血型鉴定n nABO血型鉴定:常规方法n nRh血型鉴定:Rh溶血病婴儿的Rh血型定型比较困难,原因是婴儿红细胞的直抗呈强阳性,无论在酶,抗球蛋白中都必然
17、呈阳性,所以一般的检测方法都不能适用。Rh-HDN患儿RhRh-HDN-HDN患儿患儿RhRh血型鉴定血型鉴定 n n对新生儿红细胞进行热放散(不必放散到直抗完全阴性)后再用酶法或抗球蛋白法或盐水法鉴定血型。n n用恰当的盐水介质抗体。包括所有的单克隆盐水介质试剂;n n对于化学改性的盐水介质试剂除非说明书中注明可以用于直抗阳性细胞的血型鉴定,一般不能在此应用。n n新生儿红细胞的“遮断现象”新生儿新生儿RhDRhD阳性并且红细胞完全被母亲的抗阳性并且红细胞完全被母亲的抗D D所所饱和,以至于红细胞上没有饱和,以至于红细胞上没有D D位点与盐水介质定型位点与盐水介质定型试剂起反应,又称封闭性试
18、剂起反应,又称封闭性D D。此时用盐水介质抗体检测结果可能出现弱阳性此时用盐水介质抗体检测结果可能出现弱阳性甚至阴性。甚至阴性。因此此时如果母亲为因此此时如果母亲为RhDRhD阴性,且血清中已经阴性,且血清中已经检出抗检出抗D D,新生儿直抗强阳性且与抗,新生儿直抗强阳性且与抗D D产生阴性或产生阴性或模棱两可的结果,应考虑这种情况,根据需要将模棱两可的结果,应考虑这种情况,根据需要将细胞热放散后再定型。细胞热放散后再定型。HDN患儿血样本检查1 1 1 1、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白、红细胞直接抗球蛋白 如果新生儿红细胞被如果新生儿红细胞被如果新生儿红细胞被如
19、果新生儿红细胞被IgGIgGIgGIgG抗体抗体抗体抗体所致敏,直接抗球蛋所致敏,直接抗球蛋所致敏,直接抗球蛋所致敏,直接抗球蛋白试验能得到阳性结果。由于新生儿的白试验能得到阳性结果。由于新生儿的白试验能得到阳性结果。由于新生儿的白试验能得到阳性结果。由于新生儿的A A A A(B B B B)抗原密抗原密抗原密抗原密度比成人低,所以被结合的抗体亦很少,呈弱阳性度比成人低,所以被结合的抗体亦很少,呈弱阳性度比成人低,所以被结合的抗体亦很少,呈弱阳性度比成人低,所以被结合的抗体亦很少,呈弱阳性的混合视野外观。的混合视野外观。的混合视野外观。的混合视野外观。RHRHRHRH血型不合血型不合血型不合
20、血型不合HDNHDNHDNHDN的直抗试验往往强阳性。这是区别的直抗试验往往强阳性。这是区别的直抗试验往往强阳性。这是区别的直抗试验往往强阳性。这是区别ABOABOABOABO新生儿溶血病的重要标志。新生儿溶血病的重要标志。新生儿溶血病的重要标志。新生儿溶血病的重要标志。直抗试验越强,通常病情越重。直抗试验越强,通常病情越重。直抗试验越强,通常病情越重。直抗试验越强,通常病情越重。2 2、游离抗体试验、游离抗体试验ABO-HDNABO-HDN患儿血样本检查患儿血样本检查 新生儿血清中的新生儿血清中的新生儿血清中的新生儿血清中的IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)抗体来自母亲,抗体来自母亲,抗体
21、来自母亲,抗体来自母亲,如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的如果患儿血清中发现有与其红细胞不配合的IgGIgG抗抗抗抗A A(B B)时,应将其血清与时,应将其血清与时,应将其血清与时,应将其血清与A A、B B、O O试剂红试剂红试剂红试剂红细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。细胞用间接抗球蛋白试验加以证实。Rh-HDN患儿游离试验患儿游离试验 n nRh溶血病的游离试验要求最好用母亲的血清代替婴儿血清做一组谱细胞。n n该试验阳性不能证实新生儿溶血病,因
22、为该试验检出的抗体可能是由于母亲以前经输血或孕产留下的。该试验只能确定婴儿血清中可能存在的血型抗体。n n确诊Rh新生儿溶血病要靠直抗和释放试验。n n同时用婴儿自身血清加相应A、B细胞排除ABO溶血病。加入的A、B细胞应不含能与母亲血清中Rh抗体反应的抗原。3 3、抗体放散试验抗体放散试验 用放散法提取致敏于红细胞表面的抗体。用放散法提取致敏于红细胞表面的抗体。用放散法提取致敏于红细胞表面的抗体。用放散法提取致敏于红细胞表面的抗体。将抗体放散于盐水溶液中,然后加入将抗体放散于盐水溶液中,然后加入将抗体放散于盐水溶液中,然后加入将抗体放散于盐水溶液中,然后加入A A、B B、O O红红红红细胞
23、,作细胞,作细胞,作细胞,作间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验,放散试验中使用,放散试验中使用,放散试验中使用,放散试验中使用的红细胞是直抗试验的几百倍,因此此法甚为的红细胞是直抗试验的几百倍,因此此法甚为的红细胞是直抗试验的几百倍,因此此法甚为的红细胞是直抗试验的几百倍,因此此法甚为敏感,即使是直接抗球蛋白试验阴性的患儿,敏感,即使是直接抗球蛋白试验阴性的患儿,敏感,即使是直接抗球蛋白试验阴性的患儿,敏感,即使是直接抗球蛋白试验阴性的患儿,一旦本试验出现阳性结果,即可明确诊断。本一旦本试验出现阳性结果,即可明确诊断。本一旦本试验出现阳性结果,即可明确诊断。本一旦
24、本试验出现阳性结果,即可明确诊断。本试验是新生儿溶血病三项试验中最具价值的一试验是新生儿溶血病三项试验中最具价值的一试验是新生儿溶血病三项试验中最具价值的一试验是新生儿溶血病三项试验中最具价值的一项试验。项试验。项试验。项试验。ABO-HDN患儿血样本检查 热放散法提取致敏红细胞表面的抗体,将抗体放散于盐水溶液中,然后加入经酶处理的A、B、O红细胞,做间接抗球蛋白试验。注意事项:洗出尽可能多的红细胞进行放散;放散液的温度不能超过56,以防溶血;天冷时放散液离心注意保温;将尽可能多的放散液吸出;注意除去放散液中残留的红细胞。注意 在放散试验的结果观察中,会遇到一种交叉反应性抗-AB抗体,它针对的
25、特异性是A和B抗原所共有的,因而它能凝集A型和B型红细胞,抗-AB同样可引起ABO溶血病。ABO-HDN患儿血样本检查ABO新生儿溶血病判读中可能遇到的问题直抗阳性而释放试验阴性直抗阳性而释放试验阴性 可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗可能是试验误差或抗C3C3C3C3阳性造成或是药物阳性造成或是药物阳性造成或是药物阳性造成或是药物引起新生儿溶血病引起新生儿溶血病引起新生儿溶血病引起新生儿溶血病在在A A(B B)细胞的释放液中检出抗细胞的释放液中检出抗-B B(A A)在释放试验的结果观察中,会遇到交叉反应在释放试验的结果观察中,会遇到交叉反应在释放试验的结果观察中,会遇
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