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1、免疫球蛋白基因免疫球蛋白基因Immunoglobulin Genes第1页/共66页免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)(Immunoglobulin,Ig)抗体抗体抗体抗体(antibody)(antibody)分泌型分泌型分泌型分泌型IgIg(secreted Ig,SIg)(secreted Ig,SIg)膜型膜型膜型膜型IgIg(membrane Ig,mIg)(membrane Ig,mIg)德国细菌学家德国细菌学家Behring日本学者日本学者Kitasato抗毒素、免疫血清疗法抗毒素、免疫血清疗法首届生理学和医学诺贝尔奖首届生理学和医学诺
2、贝尔奖一一、基本概念基本概念第2页/共66页人工制备的抗体人工制备的抗体 多克隆抗体多克隆抗体 (polyclonal antibody)单克隆抗体单克隆抗体 (monoclonal antibody)基因工程抗体基因工程抗体 (genetic engineering antibody)Milstein、Kohler、Jerne单克隆抗体制备技术单克隆抗体制备技术1984年获诺贝尔奖年获诺贝尔奖第3页/共66页 (一一)基本结构:基本结构:Ig单体由两条重链和两条轻链经二硫键连接而成。单体由两条重链和两条轻链经二硫键连接而成。二、免疫球蛋白的结构二、免疫球蛋白的结构Edelman与与Porte
3、r解析解析Ig结构结构1972年获诺贝尔奖年获诺贝尔奖(或或)第4页/共66页(m m链链)(g g 链链)(e e链)(a a链链)(d d链链)第5页/共66页 Ig的可变区和恒定区的可变区和恒定区 重链可变区重链可变区 (variable region of heavy chain,VH)轻链可变区轻链可变区 (variable region of light chain,VL)可变区可变区(variable region,V)第6页/共66页重链恒定区重链恒定区(constant region of heavy chain,CH)功能区功能区:CH13(IgG、IgA、IgD)CH14
4、(IgM、IgE)轻链恒定区轻链恒定区(constant region of light chain,CL)恒定区恒定区(constant region,C)第7页/共66页VH免疫球蛋白免疫球蛋白V区和区和C区结构示意图区结构示意图 第8页/共66页高变区高变区(hypervariable region,HVR)又称又称互补决定区互补决定区(complementarity-determining region,CDR)VH和和VL各各有有3个个CDR(CDR13),共共同同组组成成 Ig的抗原结合部位。的抗原结合部位。骨架区骨架区(framework region,FR)VH和和VL各有各有
5、4个个FR(FR14)第9页/共66页免疫球蛋白免疫球蛋白CDR和和FR结构示意图结构示意图 第10页/共66页(二二)Ig的水解片段的水解片段1.木瓜酶水解木瓜酶水解Ig 2个相同的个相同的抗原结合片段抗原结合片段 (fragment of antigen-binding,Fab)1个个可结晶片段可结晶片段 (fragment crystallizable,Fc)2.胃蛋白酶水解胃蛋白酶水解Ig 1个个F(ab)2 和和1个个pFc第11页/共66页第12页/共66页(三三)功能区或结构域功能区或结构域(domain)免疫球蛋白超家族免疫球蛋白超家族 (immunoglobulin supe
6、rfamily,IgSF)第13页/共66页 胚系胚系Ig基因在基因组中以基因在基因组中以基因簇基因簇(gene clusters)的形式存在。的形式存在。重链基因簇重链基因簇(IGH):含:含V,D,J,C基因片段基因片段 IGHV,IGHD,IGHJ,IGHC 轻链基因簇轻链基因簇(IGK):含:含V,J,C基因片段基因片段 IGKV,IGKJ,IGKC 轻链基因簇轻链基因簇(IGL):含:含V,J,C基因片段基因片段 IGLV,IGLJ,IGLC三三、免疫球蛋白的、免疫球蛋白的基因基因第14页/共66页 人人Ig基因片段基因片段 基因片段基因片段Ig基因基因 V D J C IGH 95
7、(50)23 9(6)11(9)IGK 90(60)0 5 1IGL 60(30)0 7 7(4)Tonegawa1987年获年获诺贝尔奖诺贝尔奖第15页/共66页第16页/共66页重排序列信号重排序列信号(RSS)rearrangementsingnal sequance第17页/共66页Ig基因重排和表达基因重排和表达等位基因排斥等位基因排斥(Allelic exclusion)一一 旦旦 VH-DH-JH重重排排成成功功,并并且且得得到到功功能能性性表表达达,会会抑抑制制另另一一条条同同源源染染色色体体上上等等位位基基因因的重排。的重排。同型排斥同型排斥(isotype exclusio
8、n)V或或V基基因因只只有有一一个个能能重重排排、表表达达,V基基因因首首先先重重排排并并抑抑制制V基基因因的的重重排排;只只有有当当V基基因因重重排排不不成成功功,V基基因因才才能能进行重排进行重排。第18页/共66页转换区转换区switch region第19页/共66页基因工程抗体基因工程抗体(genetic engineering antibody)第20页/共66页抗体药物销售趋势图抗体药物销售趋势图第21页/共66页一、鼠单抗人源化一、鼠单抗人源化 人源化抗体人源化抗体(humanized antibody)免疫原性降低,对各种水解酶的抵抗力增强;可根据需要使抗体连接用免疫原性降低
9、,对各种水解酶的抵抗力增强;可根据需要使抗体连接用于治疗或诊断的相应物质,以增强基因工程抗体的治疗效果或提高诊断的敏于治疗或诊断的相应物质,以增强基因工程抗体的治疗效果或提高诊断的敏感性。感性。第22页/共66页 用用人人抗抗体体的的恒恒定定区区取取代代鼠鼠单单抗抗的的恒恒定定区区,使鼠使鼠单抗恒定区人源化,但保留鼠单抗的可变区。单抗恒定区人源化,但保留鼠单抗的可变区。(一一)人人-鼠嵌合抗体鼠嵌合抗体 (human-mouse chimeric antibody)第23页/共66页Fab和和F(ab)2嵌合抗体:嵌合抗体:将鼠的功能性抗体轻链和重链可变区将鼠的功能性抗体轻链和重链可变区基因分
10、别与人抗体的基因分别与人抗体的 链和重链链和重链CH1恒定恒定区基因重组,克隆到表达载体中。区基因重组,克隆到表达载体中。主要通过哺乳类细胞表达,最常用的主要通过哺乳类细胞表达,最常用的是小鼠骨髓瘤细胞系和是小鼠骨髓瘤细胞系和CHO细胞细胞。第24页/共66页 最最大大限限度度地地减减少少鼠鼠单单抗抗的的异异源源性性,又又能能使使人人单单抗获得鼠单抗的特异性。抗获得鼠单抗的特异性。(二二)CDR移植抗体移植抗体(CDR-grafted antibody)人改型抗体人改型抗体(human reshaped antibody)第25页/共66页二、单价小分子抗体二、单价小分子抗体优点:优点:分子量
11、小而穿透力强;分子量小而穿透力强;不含不含Fc段,可减少副作用;段,可减少副作用;能够在大肠杆菌等原核细胞中表达,降能够在大肠杆菌等原核细胞中表达,降 低生产成本;低生产成本;在体内半衰期较短,廓清快;在体内半衰期较短,廓清快;基因操作较容易,可进一步经过改造,基因操作较容易,可进一步经过改造,制备其他类型的基因工程抗体。制备其他类型的基因工程抗体。第26页/共66页 由由重重链链Fd段段和和完完整整的的轻轻链链通通过过一一个个链链间间二二硫硫键连键连接接形成的异二聚体,只有一个抗原结合部位。形成的异二聚体,只有一个抗原结合部位。(一一)FabFab第27页/共66页(二二)Fv和和ScFv(
12、single-chain Fv)Fv段段由由VH和和VL籍籍非非共共价价键键结结合合,是是抗抗体体分分子子中中保保留留抗抗原原结结合合部部位位的的最最小小功功能能片片段段,其其稳稳定定性性差。差。Fv ScFv第28页/共66页ScFv:VH-linker-VL或或VL-linker-VH Linker一一般般含含有有1415个个氨氨基基酸酸残残基基,应应用用最最广广的的是是含含有有重重复复出出现现的的4个甘氨酸和一个丝氨酸的个甘氨酸和一个丝氨酸的(Gly4Ser)3优点:优点:比比Fv稳定;稳定;保持单价结合抗原的亲和力;保持单价结合抗原的亲和力;分子量小,组织穿透性较强。分子量小,组织穿透
13、性较强。第29页/共66页(三三)单区抗体单区抗体(single domain antibody)及及 最小识别单位最小识别单位(minimal recognition unit,MRU)单单区区抗抗体体是是抗抗体体分分子子中中单单独独具具有有结结合合抗抗原原能能力力的的重重链链可可变变区区(VH),MRU是是来来自自CDR的的短短肽肽,可可模拟亲本抗体的抗原结合活性模拟亲本抗体的抗原结合活性 Fv ScFv 单区抗体单区抗体第30页/共66页单区抗体的优越性:单区抗体的优越性:穿透力强,有利于实际应用;穿透力强,有利于实际应用;不需将不需将VH和和VL基因分别克隆和进行正确基因分别克隆和进行
14、正确 配对,制备时操作简便;配对,制备时操作简便;只有只有VH而不需与而不需与VL相互作用,稳定性较相互作用,稳定性较 Fv和和ScFv更好;更好;其抗原结合部位的构象较为特殊,其抗原结合部位的构象较为特殊,VH抗抗 体体CDR襻插入抗原表面的凹陷中,这对襻插入抗原表面的凹陷中,这对 于制备酶抑制性抗体有重要意义。于制备酶抑制性抗体有重要意义。第31页/共66页MRU的优越性:的优越性:穿透能力强,半寿期短,显像时本底低,适用于临床显像诊断。穿透能力强,半寿期短,显像时本底低,适用于临床显像诊断。第32页/共66页三、双价和多价小分子抗体三、双价和多价小分子抗体(一一)化学交联法化学交联法 D
15、TNB、O-PDM使使2个个ScFv在体外相连接,形成双价小分子抗体。在体外相连接,形成双价小分子抗体。易引起抗体分子的抗原结合部位的结构改变,降低抗体的活性。易引起抗体分子的抗原结合部位的结构改变,降低抗体的活性。第33页/共66页(二二)二聚化结构域融合法二聚化结构域融合法 在单价小分子抗体的在单价小分子抗体的3端连接具有二聚端连接具有二聚化倾向的结构域化倾向的结构域(dimerization domain)亮氨酸拉链亮氨酸拉链(leucine zipper)a a螺旋束螺旋束(helix bundle)Ig的的CH3区区 链亲和素链亲和素第34页/共66页(三三)接头长度控制法接头长度控
16、制法 双链抗体双链抗体(diabody)将将ScFv的的接接头头缩缩短短,使使两两个个ScFv分分子子间间的的VH和和VL配配对对,发发生生非非共共价价键键结结合,形成双价小分子抗体。合,形成双价小分子抗体。构建时操作简单,具有良好的性能和应用前景。构建时操作简单,具有良好的性能和应用前景。三链抗体三链抗体(triabody)四链抗体四链抗体(tetrabody)第35页/共66页双链抗体双链抗体 三链抗体三链抗体 四链抗体四链抗体 第36页/共66页四、双特异性抗体四、双特异性抗体 (bispecific antibody,BsAb)(一一)化学偶联方法化学偶联方法 SPDP、DTNB、O-
17、PDM等等化化学学交交联联剂剂可可将将两两个个不不同同抗抗原原特特异异性性的全抗体分子或其功能性片段连接成的全抗体分子或其功能性片段连接成BsAb。第37页/共66页化学偶联方法:化学偶联方法:简便快速,产物容易纯化简便快速,产物容易纯化 易造成抗体分子的抗原结合部位发生改变,从而降低其活性易造成抗体分子的抗原结合部位发生改变,从而降低其活性 交联剂的致畸和致癌作用交联剂的致畸和致癌作用 主要用于体外的主要用于体外的 实验研究。实验研究。第38页/共66页(二二)杂交杂交-杂交瘤方法杂交瘤方法 (hybrid-hybridoma)四源杂交瘤四源杂交瘤(quadroma):使两株各自分泌不同特异
18、性单抗的使两株各自分泌不同特异性单抗的 杂交瘤细胞再融合杂交瘤细胞再融合三源杂交瘤三源杂交瘤(trioma):用一株杂交瘤细胞与用一株杂交瘤细胞与 免疫后的脾细胞融合免疫后的脾细胞融合第39页/共66页由于两套重链和轻链之间可重新随机组合,而由于两套重链和轻链之间可重新随机组合,而目的目的BsAb仅占仅占20左右,所以必须从大量相左右,所以必须从大量相似的似的Ig中费时费力地筛选出目的中费时费力地筛选出目的BsAb;多倍体杂交瘤的稳定性差,必须经常对杂交瘤多倍体杂交瘤的稳定性差,必须经常对杂交瘤进行克隆;进行克隆;分泌抗体的量少,且活性低,增加纯化难度;分泌抗体的量少,且活性低,增加纯化难度;
19、人源杂交瘤技术存在诸多问题,鼠源性人源杂交瘤技术存在诸多问题,鼠源性BsAb用于人体会出现用于人体会出现HAMA,故应用受到限制。,故应用受到限制。杂交杂交-杂交瘤方法的主要缺点:杂交瘤方法的主要缺点:第40页/共66页(三三)基因工程方法基因工程方法 主主要要是是以以Fab、Fv和和ScFv等等抗抗体体分分子子片片断断为为基基本本构构件件,用用基基因因工工程程方法制备方法制备BsAb。1.末端半胱氨酸残基末端半胱氨酸残基(Cys)共价交联共价交联 在在两两种种不不同同ScFv或或带带铰铰链链区区的的Fab段段的的羧羧基基端端分分别别接接上上半半胱胱氨氨酸酸残残基基(SerCys或或Gly4C
20、ys)第41页/共66页2.链间连接肽相连链间连接肽相连 单链双特异性抗体单链双特异性抗体 (single-chain bispecific antibody,scBsAb)在在DNA水平用一个柔性较强、长度合水平用一个柔性较强、长度合适的肽段将两个适的肽段将两个ScFv首尾相接,常用的是首尾相接,常用的是Gly4Ser,而长肽链可用,而长肽链可用(Gly4Ser)3,形成双,形成双ScFv的单肽链,经过的单肽链,经过正确折叠成为正确折叠成为BsAb。第42页/共66页3.二聚化结构域融合法二聚化结构域融合法第43页/共66页4.构建双特异性双链抗体构建双特异性双链抗体 (bispecific
21、 diabody)将抗体将抗体A的的VH和抗体和抗体B的的VL用一短的接头连接成一条杂合用一短的接头连接成一条杂合ScFv,同理将抗体,同理将抗体A的的VL和抗体和抗体B的的VH连接成另一条杂连接成另一条杂 合合ScFv,构建含有这两条链,构建含有这两条链 的双顺反子表达载体,当两的双顺反子表达载体,当两 者同时表达时,由于短接头者同时表达时,由于短接头 的限制,使两个不同特异性的限制,使两个不同特异性 抗体的轻链可变区和重链可抗体的轻链可变区和重链可 变区交叉组合。变区交叉组合。BAAB第44页/共66页五、抗体融合蛋白五、抗体融合蛋白(一一)含含FvFv段的抗体融合蛋白段的抗体融合蛋白 1
22、.免疫靶向性抗体融合蛋白免疫靶向性抗体融合蛋白 将毒素、酶、细胞因子等生物活性蛋白与含将毒素、酶、细胞因子等生物活性蛋白与含Fv段的针对肿瘤的抗体片段融合,段的针对肿瘤的抗体片段融合,应用于靶向治疗恶性肿瘤。应用于靶向治疗恶性肿瘤。第45页/共66页重组免疫毒素重组免疫毒素(immunotoxin)抗体分子与毒性蛋白的偶联物抗体分子与毒性蛋白的偶联物 常用毒素:常用毒素:细菌来源的毒素细菌来源的毒素 假单胞菌外毒素和白喉毒素假单胞菌外毒素和白喉毒素 植物来源的毒素植物来源的毒素 蓖麻毒素、肥皂草素及商陆抗病毒蛋白蓖麻毒素、肥皂草素及商陆抗病毒蛋白 第46页/共66页 毒毒素素的的细细胞胞毒毒性
23、性作作用用使使得得所所构构建建的的免免疫疫毒毒素素不不能能在在真真核核细细胞胞表表达达,而而用用大肠杆菌进行表达制备。大肠杆菌进行表达制备。植植物物毒毒素素难难于于在在原原核核细细胞胞中中表表达达,故故很很少少用用来来构构建建抗抗体体融融合合蛋蛋白白,而而多多采用化学交联的方法制备抗体与毒素的偶联物。采用化学交联的方法制备抗体与毒素的偶联物。毒毒素素都都是是异异源源蛋蛋白白,具具有有免免疫疫原原性性,进进入入人人体体后后可可诱诱导导产产生生人人抗抗异异源源毒毒素的抗体素的抗体(human anti-toxin antibody,HATA)。第47页/共66页免疫细胞因子免疫细胞因子(immun
24、ocytokine)用用含含Fv的的针针对对肿肿瘤瘤的的抗抗体体片片段段与与细细胞胞因因子子融融合合,靶靶向向治治疗疗肿肿瘤瘤,降降低低毒毒副副作用。较常见的有抗体作用。较常见的有抗体-IL-2、抗体、抗体-IL-12、抗体、抗体-GM-CSF、抗体、抗体-TNF-a a等。等。第48页/共66页抗体抗体-酶融合蛋白酶融合蛋白 抗体导向的酶抗体导向的酶-前药治疗前药治疗(antibody-directed enzyme prodrug therapy,ADEPT)抗体抗体-核酸酶融合蛋白核酸酶融合蛋白 抗体抗体-溶栓剂融合蛋白溶栓剂融合蛋白 第49页/共66页2.免疫桥连性抗体融合蛋白免疫桥连
25、性抗体融合蛋白 由一个抗体分子与另一个具有特异由一个抗体分子与另一个具有特异靶向作用的分子构建成融合蛋白,可同靶向作用的分子构建成融合蛋白,可同时结合效应细胞与靶细胞,使两种不同时结合效应细胞与靶细胞,使两种不同细胞发生桥连。细胞发生桥连。抗抗CD3-EGF 第50页/共66页(二二)含含Fc段的抗体融合蛋白段的抗体融合蛋白 免疫粘附素免疫粘附素(immunoadhesin):用用抗抗体体Fc段段与与细细胞胞表表面面某某些些具具有有特特异异识识别别及及结结合功能的蛋白分子构建的融合蛋白。合功能的蛋白分子构建的融合蛋白。通过受体与配体间相互作用产生效应通过受体与配体间相互作用产生效应 发挥发挥F
26、c段的免疫功能:段的免疫功能:调理吞噬作用调理吞噬作用 ADCC效应效应 激活补体激活补体 与蛋白与蛋白A或抗或抗Ig结合,利于纯化和检测结合,利于纯化和检测 延延长长融融合合蛋蛋白白的的半半寿寿期期(如如CD4-Fc融融合合蛋蛋白白)第51页/共66页六、抗原化抗体六、抗原化抗体 将特定抗原分子表位的编码基因序列将特定抗原分子表位的编码基因序列插入抗体重链可变区的插入抗体重链可变区的CDR3部位,表达部位,表达出具有该抗原表位的氨基酸组成和构象以出具有该抗原表位的氨基酸组成和构象以及免疫原性的重组抗体。及免疫原性的重组抗体。应用:应用:干扰或阻断作用干扰或阻断作用 制备新型疫苗制备新型疫苗第
27、52页/共66页七、细胞内抗体七、细胞内抗体(intrabody)将将携携带带小小分分子子抗抗体体基基因因的的表表达达载载体体导导入入细细胞胞内内,在在细细胞胞内内特特定定部部位位表表达达的的抗抗体体分分子,结合细胞内的靶抗原后能影响靶抗原的生物学活性。子,结合细胞内的靶抗原后能影响靶抗原的生物学活性。为为了了达达到到不不同同的的目目的的效效应应,可可以以对对小小分分子子抗抗体体基基因因进进行行修修饰饰,使使其其表表达达于于细细胞胞的的不同部位,当抗体与不同部位中的靶分子结合后,可以产生不同的效应。不同部位,当抗体与不同部位中的靶分子结合后,可以产生不同的效应。第53页/共66页应用前景:应用
28、前景:分子功能的研究分子功能的研究 IL-2Ra a,erbB2 基因治疗基因治疗 抗肿瘤基因治疗抗肿瘤基因治疗 抗艾滋病的基因治疗抗艾滋病的基因治疗 针对针对HIV外壳蛋白外壳蛋白gpl20、调节蛋白、调节蛋白Tat 和和Rev、逆转录酶、整合酶、逆转录酶、整合酶 存在的问题存在的问题第54页/共66页 依赖于依赖于PCR技术、抗体分子在大肠技术、抗体分子在大肠杆菌的功能性表达以及噬菌体展示技术杆菌的功能性表达以及噬菌体展示技术(phage display technology)而发展起而发展起来的抗体工程技术。来的抗体工程技术。抗体库技术:抗体库技术:第55页/共66页一、噬菌体抗体库技术
29、一、噬菌体抗体库技术(一一)丝状噬菌体丝状噬菌体(Filamentous phage)纤丝状病毒颗粒纤丝状病毒颗粒 基因组是单链环状基因组是单链环状DNA 复制型复制型DNA是病毒基因组是病毒基因组DNA增殖的中增殖的中 间体,可被用作基因克隆的载体间体,可被用作基因克隆的载体 基因组共编码基因组共编码10种蛋白种蛋白 外源蛋白的基因与基因外源蛋白的基因与基因或基因或基因融合融合 表达在噬菌体表面表达在噬菌体表面第56页/共66页(二二)噬菌体展示技术噬菌体展示技术 将将蛋蛋白白分分子子或或肽肽段段的的基基因因克克隆隆到到丝丝状状噬噬菌菌体体的的基基因因组组DNA中中,与与噬噬菌菌体体的的外外
30、壳壳蛋蛋白白形形成成融融合合蛋蛋白白,在在噬噬菌菌体体的的表表面面表表达达,使使特特定定分分子子的的基基因因型型和和表表型型统统一一在在同同一一病病毒毒颗颗粒粒内内,通通过过筛筛选选噬噬菌菌体体表表面面的的能能结结合合特特定定配配体体的的蛋蛋白白,即即可可获得相应的编码基因。获得相应的编码基因。第57页/共66页噬菌体展示技术噬菌体展示技术“吸附一洗脱一扩增吸附一洗脱一扩增”的过的过程程第58页/共66页优越性:优越性:简便易行,省时省力;简便易行,省时省力;筛选能力强,经过多轮筛选,可从目前技术所能产生的库容中选择出稀有克隆;筛选能力强,经过多轮筛选,可从目前技术所能产生的库容中选择出稀有克
31、隆;可直接得到特异克隆编码可直接得到特异克隆编码DNA,便于进一步的基因操作和表达。,便于进一步的基因操作和表达。第59页/共66页(三三)噬菌体抗体库噬菌体抗体库噬菌体抗体噬菌体抗体 抗体分子片段与噬菌体外壳蛋白融合,并在噬菌体颗粒表面表达。抗体分子片段与噬菌体外壳蛋白融合,并在噬菌体颗粒表面表达。Fab ScFv diabody第60页/共66页噬菌体抗体库噬菌体抗体库(phage antibody library)是将抗体分子多样性可变区基因是将抗体分子多样性可变区基因组装到表达载体内,使之在噬菌体表面表达多样性噬菌体抗体的集合。组装到表达载体内,使之在噬菌体表面表达多样性噬菌体抗体的集
32、合。第61页/共66页二、其它展示抗体库技术二、其它展示抗体库技术(一一)细菌表面展示技术细菌表面展示技术 (二二)酵母表面展示技术酵母表面展示技术 (三三)哺乳动物细胞表面展示技术哺乳动物细胞表面展示技术 (四四)核糖体展示技术核糖体展示技术第62页/共66页转基因动物表达抗体转基因动物表达抗体 运用转基因动物作为生物反应器来生产运用转基因动物作为生物反应器来生产重组抗体。需考虑目的基因的定位表达。重组抗体。需考虑目的基因的定位表达。优点:优点:动动物物反反应应器器为为高高级级生生命命体体,能能加加工工生生产产 复复杂杂蛋蛋白白,产产生生的的蛋蛋白白近近乎乎天天然然,生生物活性高;物活性高;
33、动动物物反反应应器器一一旦旦成成功功,其其易易于于中中试试放放大大,工工艺艺简简单单,成成本本较较低低,易易于于纯纯化化,适适合商业开发。合商业开发。第63页/共66页 利用转基因技术利用转基因技术将人全套将人全套IgIg基因座转入基因座转入IgIg基因已被敲除的小鼠基因已被敲除的小鼠,再用,再用抗原免疫小鼠,可产生相应的特异性人源抗体,并且可结合杂交瘤技术进抗原免疫小鼠,可产生相应的特异性人源抗体,并且可结合杂交瘤技术进一步制备出单克隆抗体。一步制备出单克隆抗体。转人转人转人转人IgIg基因小鼠制备抗体基因小鼠制备抗体基因小鼠制备抗体基因小鼠制备抗体第64页/共66页存在的缺陷:存在的缺陷:若抗原免疫后不能产生有效的免疫应答,就不能得到所需的人源抗体;若抗原免疫后不能产生有效的免疫应答,就不能得到所需的人源抗体;转基因通常有体细胞突变和其它独特的序列,导致不十分完全的人源抗体序列;转基因通常有体细胞突变和其它独特的序列,导致不十分完全的人源抗体序列;产生的抗体具有鼠糖基化模式;产生的抗体具有鼠糖基化模式;转基因小鼠表达的人转基因小鼠表达的人Ig多样性较少。多样性较少。第65页/共66页感谢您的观看。第66页/共66页
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