陈玉泽组培.doc
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1、植 物 组 织 培 养实 验 报 告学院:生命科学技术学院班级:10(植物班) 学号: 姓名:陈 玉 泽 实验一 母液的配制、保存,培养基的制备与灭菌一 、实验目的1、了解MS培养基中化学成分,学习母液的配制方法。2、掌握植物组织培养中常用实验用具的洗涤、灭菌方法及注意事项。3、学习并熟悉自动化灭菌锅的操作和保护。4、学习用牛皮纸包三角瓶口的防污染方法。二 、实验试剂和仪器设备 1、试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl22H2O,MgSO47H2O,FeSO47H2O Na2-EDTA,MnSO44H2O,ZnSO47H2O,H3BO3,KI,Na2MoO42H2O,CuSO45
2、H2O,CoCl26H2O,肌醇,甘氨酸,盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇, 烟酸,蒸馏水。2、仪器设备高压蒸气灭菌锅、电子天平、烧杯、量筒、容量瓶、移液管、试剂瓶、药勺、称量纸、冰箱、三角瓶、洗耳球、刻度吸管、pH试纸、漏斗、玻璃棒、记号笔、线绳、牛皮纸、报纸、石棉网三、 实验步骤(1) 表1.MS培养基药品名称含量药品名称含量药品名陈含量NH4NO31650ZnSO47H2O8.6盐酸硫胺素0.4KNO31900H3BO36.2盐酸吡哆醇0.5KH2PO4170KI0.83烟酸0.5CaCl22H2O440NaMoO42H2O0.25蔗糖30000MgSO47H2O370CuSO45H2O0.025
3、琼脂8000FeSO47H2O27.8CoCl26H2O0.025PH6.0Na2EDTA37.3肌醇100MnSO44H2O22.3甘氨酸2(2)表2.MS培养基所需母液以及扩大倍数名称扩大倍数定容体积(ml)吸取毫升数/L大量元素5050020微量元素5050020Ca盐5050020Mg盐5050020Fe盐5050020有机10020010肌醇10020010激素100505(注:吸取毫升数为每升培养基所吸取的母液的体积)(3) 表3.配制母液所需的药品及称取量药品名称称取量(mg)药品名称称取量(mg)NH4NO341250KI20.75KNO347500Na2MnO42H2O6.2
4、5KH2PO44250CuSO45H2O0.625CaCl22H2O11000CoCl26H2O0.625MgSO47H2O9250肌醇2000FeSO44H2O695甘氨酸40Na-EDTA932.5盐酸硫胺素8MnSO47H2O557.5盐酸吡哆醇10ZnSO47H2O215烟酸10H3BO3155 1、按配方表准确称取各物质。 2、大量元素母液的配制:取50ml量筒一个,将大量、有机、肌醇、镁盐,钙盐、按配方表中的用量依次称取并倒入500ml烧杯中。3、微量元素母液的配制:按照配方表中用量用电子天平依次称取 MnSO44H2O, ZnSO47H2O, H3BO3, KI, Na2MoO4
5、2H2O。CuSO45H2O和 CoCl26H2O先稀释后用移液管吸取,按制备母液I的方法逐个溶解,转移至容量瓶中,洗涤烧杯,然后定容至500ml,转入细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称,放大倍数,配制日期,配制人,并置于冰箱中保存备用。4、有机化合物母液的制备按配方表中用量依次称取:盐酸硫胺素,盐酸吡哆醇,烟酸, 甘氨酸,用蒸馏水溶解后,定容200ml转入细口试剂瓶中,贴上标签,注明母液名称,放大倍数,配制日期,配制人,并置于冰箱中保存备用。5、植物生长物质母液制备NAA母液:准确称取 10mg,用少量 1mol/L NaOH 溶解后加蒸馏水定容至100ml,即配制成0.1mg/ml的NA
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