糖的组织化学.pptx
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1、糖 的 组 织 化 学第1页/共55页糖的分类1.单糖和双糖2.多糖:淀粉、纤维素、糖原3.粘液物质(粘多糖)中性粘多糖 酸性粘多糖4.糖蛋白 粘蛋白 氨基己糖4%糖蛋白 氨基己糖4%5.糖脂 含有半乳糖,脂肪酸,神经氨基醇第2页/共55页糖糖 原原第3页/共55页一.糖原的概念 由多糖衍化而来,是天然存在于动物组织内的多糖 分布:胞浆内 肝、心肌、骨骼肌 同种葡萄糖的聚合物 作为糖原染色的切片,必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片第4页/共55页二.固定剂的选用1.Carnoy(冷4)无水乙醇 60ml 防止糖原溶于水 氯 仿 30ml 增加渗透力 冰 醋 酸 10ml 抵消乙醇对组织的 收
2、缩、硬脆作用 *优点:固定迅速,保存肝糖原 第5页/共55页2.Gendre(冷4)苦味酸无水乙醇饱和液 80ml 甲醛 15ml 冰醋酸 5ml临用前混合配制第6页/共55页3.Lillie固定液(AAF)无水乙醇 85ml 冰醋酸 5ml 甲醛 10ml 固定液预冷4,固定24h后,95%乙醇脱水,包埋第7页/共55页三.固定中注意事项1.尽可能取小块新鲜组织及时固定,不用水溶性固定液2.应用含酒精的溶液作为固定液,但最好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳3.固定原理:使糖原与固定液之间相结合的蛋白质凝固,糖原被周围凝固的蛋白质膜保护起来,第8页/共55页四.显示糖原的方
3、法 1.碘染色 2.胭脂红染色*3.过碘酸-Schiff 反应 4.银浸染法第9页/共55页过碘酸-Schiff 反应Periodicacid-Schiff,PAS第10页/共55页(一)染色原理过碘酸是一种强氧化剂,能氧化糖分子,使相邻二个碳原子上的羟基(-OH)变为醛基(-COOH)第11页/共55页Schiff氏试剂是付品红(碱性品红)经SO2作用后,形成的无色溶液付品红Schiff试剂第12页/共55页当Schiff氏试剂与醛基作用后,形成含有发色基团的化合物,呈现紫红色沉淀第13页/共55页*PAS反应的基本原理 1.通过过碘酸的氧化作用,将糖分子中的碳键打断,游离出醛基 2.醛基与
4、Schiff试剂反应显出红色沉淀第14页/共55页(二)染色步骤1.切片脱蜡至水2.1%过碘酸溶液内氧化5-10min3.流水洗5min,再用蒸馏水洗4.用Schiff试剂处理10-20min5.流水洗10min6.复染(可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核)7.脱水、透明、封片第15页/共55页切片经二甲苯和各级酒精复水后,入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟,取出后水洗。第16页/共55页切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右,将切片取出水洗,为洗去非特异性着色,将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗,取出后水洗,镜检。第17页/共55页 肝糖原-PAS染色
5、 X200第18页/共55页 肝糖原-PAS+苏木素复染 X200第19页/共55页【结果】胞浆内PAS阳性物质呈紫红色,颗粒状或均质团块状,胞核呈蓝色或绿色 红色深浅反应含糖原量的多少【对照】采用淀粉酶或唾液酶消化切片 对照片PAS(-),未处理片(+)第20页/共55页PAS反应阳性物质反应阳性物质物质类别物质类别举例举例染色强度染色强度多糖多糖糖原糖原强强中性粘液物质中性粘液物质结肠杯状细胞结肠杯状细胞强强某些酸性粘液物质某些酸性粘液物质酸性非硫酸性含酸性非硫酸性含唾液粘多糖唾液粘多糖中中基底膜基底膜肾小球基底膜肾小球基底膜中中色素色素脂褐素脂褐素中中脂质脂质脑苷脂脑苷脂中中淀粉样物淀粉
6、样物淀粉样物淀粉样物弱弱软骨软骨软骨软骨弱弱真菌真菌曲菌曲菌强强脑垂体脑垂体粘液样细胞粘液样细胞强强第21页/共55页This normal glomerulus is stained with PAS to highlight basement membranes.The capillary loops of the glomerulus are well-defined and thin.第22页/共55页A888 kidney 11-PAS第23页/共55页A888 kidney 14-PAS第24页/共55页(三)PAS反应的应用证明与鉴别细胞内空泡样变性 (水变性、脂肪变性、糖原)心
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