动物的克隆(浙科版).ppt
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1、思考:思考:离体的植物细胞和组织可以通过组织离体的植物细胞和组织可以通过组织培养技术克隆成完整的植株,那么动物细胞和培养技术克隆成完整的植株,那么动物细胞和组织能否也进行同样的克隆?组织能否也进行同样的克隆?不能,动物细胞的全能性受到限制,到现不能,动物细胞的全能性受到限制,到现在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很在为止将离体的动物细胞直接克隆成个体还很困难,所以困难,所以动物细胞和组织不能进行动物细胞和组织不能进行与植物一与植物一样的样的个体克隆个体克隆。机械消化或者胰酶消化机械消化或者胰酶消化一、动物细胞、组织培养一、动物细胞、组织培养1、什么方法取得离体的单个动物细胞?、什么方法取得
2、离体的单个动物细胞?2、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正、离体的动物细胞能否正常的生活、表现出正常的生命活动?常的生命活动?能,在人工控制的培养条件下,生长、分裂乃至能,在人工控制的培养条件下,生长、分裂乃至接触抑制和衰老、死亡等,并呈现一定的组织特性。接触抑制和衰老、死亡等,并呈现一定的组织特性。3、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表、是不是所有的动物细胞都能在离体的情况下表现出生命活动?现出生命活动?1、幼嫩细胞(如:、幼嫩细胞(如:动物胚胎或幼龄动物组织、器官动物胚胎或幼龄动物组织、器官)2、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境条件。、含全部营养物质的液体培养基和适宜的环境
3、条件。(胰蛋白酶)(胰蛋白酶)动物细胞培养:动物细胞培养:体外培养分散后的体外培养分散后的体外培养分散后的体外培养分散后的单个细胞,单个细胞,单个细胞,单个细胞,使其得以生存,并保持生命活动现象。使其得以生存,并保持生命活动现象。使其得以生存,并保持生命活动现象。使其得以生存,并保持生命活动现象。像体内一像体内一像体内一像体内一样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。样呈现一定的组织特性。动物组织培养:动物组织培养:体外培养体外培养体外培养体外培养动物组织,动物组织,动物组织,动物组织,使其维持使其维持使其维持使其维持生活状态或生长特性。生活状态或生长特性。生活状态或
4、生长特性。生活状态或生长特性。可以伴随组织分化,但最可以伴随组织分化,但最可以伴随组织分化,但最可以伴随组织分化,但最终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。终成为细胞培养。动物器官培养:动物器官培养:体外培养体外培养体外培养体外培养动物器官原基、部分动物器官原基、部分动物器官原基、部分动物器官原基、部分或整个器官,或整个器官,或整个器官,或整个器官,使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。使之得以保存、生长。保持器官的保持器官的保持器官的保持器官的结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。结构、功能及分化能力。组组织织培培养养6.19516
5、.1951年,海拉细胞系的建成。年,海拉细胞系的建成。1.18851.1885年,鸡神经板在生理盐水中培养成活。年,鸡神经板在生理盐水中培养成活。2.19032.1903年,皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月,年,皮肤及白细胞在腹水及血清中存活一个月,且观察到细胞分裂。且观察到细胞分裂。3.19073.1907年,蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养,成功年,蛙胚神经管在蛙淋巴液中悬浮培养,成功看到神经末端的阿米巴运动。看到神经末端的阿米巴运动。4.19124.1912年,鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养年,鸡胚浸出液对鸡胚心脏组织块进行原代培养和传代培养。和传代培养。5.19435.194
6、3年,获得长期培养细胞系(可连续传代)和细胞年,获得长期培养细胞系(可连续传代)和细胞克隆。克隆。“组织培养组织培养”一词产生一词产生真正的组织培养开始;真正的组织培养开始;创立了悬浮培养法创立了悬浮培养法成功进行了传代培养;成功进行了传代培养;发明了卡氏瓶;发明了卡氏瓶;标志着组织培养工作进入标志着组织培养工作进入全新阶段全新阶段二、动物组织培养技术的发展二、动物组织培养技术的发展2 2、适宜的环境条件、适宜的环境条件无菌、无毒环境:无菌、无毒环境:加抗生素,定期更换培养液加抗生素,定期更换培养液适宜的温度和适宜的温度和pHpH值:值:温度:温度:36.50.5 36.50.5 pHpH值:
7、值:适宜的气体环境:适宜的气体环境:O O2 2和和COCO2 2(95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2)适宜的渗透压等适宜的渗透压等(一)培养条件(一)培养条件 三、动物细胞培养过程三、动物细胞培养过程成分:成分:无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等无机盐、葡萄糖、氨基酸、维生素和动物血清等1、含全部营养物质的培养液、含全部营养物质的培养液从动物从动物胚胎或幼龄动物组织胚胎或幼龄动物组织切片中取小片样品切片中取小片样品转入特殊培养液转入特殊培养液原代培养原代培养分装到多个卡氏瓶中分装到多个卡氏瓶中传代培养传代培养单个单个细胞悬浮液细胞悬浮液CO2培养箱中培养箱中保温培养保温培
8、养细胞系细胞系机械消化或胰酶消化机械消化或胰酶消化(胰蛋白酶)(胰蛋白酶)(二)培养过程(二)培养过程 原代培养物原代培养物选择或纯化选择或纯化选择或纯化选择或纯化细胞株细胞株细胞株细胞株如何界定原代培养和传代培养?为什么要传代培养?如何界定原代培养和传代培养?为什么要传代培养?细胞悬细胞悬浮液浮液转入特殊培养液转入特殊培养液首次培养首次培养换瓶后培养换瓶后培养原代培养原代培养传代培养传代培养为什么?为什么?原代培养原代培养传传代代培培养养原代培养物原代培养物细胞系:细胞系:可连续传代的细胞可连续传代的细胞 原代培养物在首次传代时就原代培养物在首次传代时就成为细胞系。成为细胞系。能连续能连续培
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