限制性酶切方式及连接.ppt
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1、 限制酶切方式及连接1 限制酶切的方式1.1 单酶切1.2 双酶切1.3 部分酶切1.4 完全酶切1限制酶切的方式1.1 单酶切 若DNA样品是环状DNA分子,产生与识别序列(n)相同的DNA片段数。若DNA样品是LDNA片段,完全酶切产生n+1个DNA片段。1限制酶切的方式1.1 单酶切 酶切体系:13L ddH2O 反应体系 2L 10buffer 4L 底物DNA 1L 限制酶 总体积:20L 酶切步骤:加样;摇匀,短时离心;反应13h;反应终止。65水浴1015min1限制酶切的方式1.2 双酶切 用不同的限制酶切割同一DNA分子的方法。环状DNA分子完全酶切的结果,产生DNA片段数是
2、两种限制酶识别序列数之和。线性DNA分子完全酶切的结果,产生DNA片段数是两种限制酶识别序列数加1.双酶切可以在不同的反应系统中进行。A 需要较低盐浓度的酶先切割,然后升高盐浓度,另一个酶切割;B 最适反应温度较低的酶先切割,然后升高温度,另一个酶切割;C 第一个酶切割后,经凝胶电泳回收DNA,再选用合适反应系统,进行第二个酶的切割。D 双酶切在同一个反应系统中。1 限制酶切的方式1.3 部分酶切 指限制酶对其在DNA分子上的全部识别序列进行不完全的切割。用途:当某种限制酶的多个识别序列之中有一个识别序列恰好在回收待用的DNA片段上,若完全酶切,将此DNA片段从中切断。为了解决这个问题,就需要
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- 限制性 方式 连接
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