《疫学应用》PPT课件.ppt
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1、 免疫学应用免疫学应用湘潭职业技术学院检验教研室邓阳勇 第一节第一节 免疫学诊断免疫学诊断一、抗原抗体的检测二、淋巴细胞的检测一、抗原抗体的检测一、抗原抗体的检测l原理原理:Ag与相应与相应Ab在体内与体外可发生特在体内与体外可发生特异性结合异性结合l检测原则检测原则:1.已知已知Ag检测未知检测未知Ab2.已知已知Ab检测未知检测未知Ag 细菌学诊断细菌学诊断v标本采集时应注意无菌操作,尽量避免杂菌污染。标本采集时应注意无菌操作,尽量避免杂菌污染。v根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位,根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位,采取不同标本。采取不同标本。v应在使用抗菌药物前采集标本,否
2、则在培养时应应在使用抗菌药物前采集标本,否则在培养时应加入拮抗剂。加入拮抗剂。v尽可能采集病变明显部位的材料。尽可能采集病变明显部位的材料。v标本必须新鲜,采集后尽快送检。标本必须新鲜,采集后尽快送检。v送检过程中要采取适当的保存方式。送检过程中要采取适当的保存方式。标本采集与送检原则标本采集与送检原则致病菌的检验程序致病菌的检验程序标本标本生化试验生化试验 血清学试验血清学试验 动物试验 药敏试验直接涂片检查直接涂片检查分离培养分离培养 分子生物学技术(核酸杂交、PCR)其它(HPLC)人体受致病菌感染后,其免疫系统被刺激后发生人体受致病菌感染后,其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗
3、体。抗体的量常随感染免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多,表现为效价(滴度)的升高。因此,过程而增多,表现为效价(滴度)的升高。因此,用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化,可作为某无相应特异抗体和其效价的动态变化,可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验,故称为试验,故称为血清学诊断血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本,当后者的抗体效
4、价比前者血清标本,当后者的抗体效价比前者升高大于等升高大于等于于4倍倍时方有意义。时方有意义。常用方法:直接凝集试验、乳胶常用方法:直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。血清学诊断血清学诊断 抗原抗体反应抗原抗体反应1、抗原抗体的结合与析出2、抗原抗体反应的特点3、抗原抗体反应的影响因素引起抗原抗体结合的作用力引起抗原抗体结合的作用力1、电荷引力(库仑引力)2、电子云引力(Van der Waals力)3、氢键结合力4、疏水作用力抗原抗体结合物析出的原因抗原抗体结合物析出的原因析出+电解质+抗原抗体反应的特点抗原抗
5、体反应的特点1、特异性2、适合比例性3、可逆性网格学说网格学说(latticetheory)抗体过剩抗原过剩抗体抗体比例合适可逆性可逆性K(亲和常数)=Ag+AbAg Ab 抗原抗体反应的影响因素抗原抗体反应的影响因素1、电解质2、酸碱度(pH值6-8)3、温度(37-42。C)抗原或抗体的检测方法抗原或抗体的检测方法类型类型抗原抗原抗体抗体辅助物辅助物敏感度(敏感度(g抗体氮)抗体氮)凝集反应凝集反应颗粒性颗粒性凝集素凝集素0.01沉淀反应沉淀反应可溶性可溶性沉淀素沉淀素5-10补体溶血反应补体溶血反应红细胞红细胞溶血素溶血素补体补体G-细菌细菌溶菌素溶菌素补体补体(同上)(同上)补体结合反
6、应补体结合反应固定补体抗体固定补体抗体补体补体SRBC溶血素溶血素0.1中和反应中和反应外毒素外毒素抗毒素抗毒素靶细胞靶细胞0.01病毒病毒中和抗体中和抗体靶细胞靶细胞(同上)(同上)直接凝集反应直接凝集反应玻片法:玻片法:ABO血型鉴定血型鉴定试管法:肥达试验试管法:肥达试验颗粒性抗原抗体(凝集素)正向间接凝集反应正向间接凝集反应如:类风湿因子的检测如:类风湿因子的检测可溶性抗原载体颗粒抗体(凝集素)反向间接凝集反应反向间接凝集反应抗体可溶性抗原载体颗粒间接凝集抑制反应间接凝集抑制反应如妊娠诊断试验检测如妊娠诊断试验检测HCG凝集凝集抑制待检样品待检样品液相内沉淀反应液相内沉淀反应絮状沉淀反
7、应环状沉淀反应如法医学血迹鉴定+抗血清抗原抗原抗体凝胶内沉淀反应凝胶内沉淀反应免疫扩散技术免疫扩散技术免疫电泳技术免疫电泳技术单向扩散试验单向扩散试验双向扩散试验双向扩散试验火箭电泳火箭电泳对流电泳对流电泳免疫电泳免疫电泳主要的免疫标记物主要的免疫标记物类别类别标记物标记物用途用途荧光素荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定放射性核素放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I酶酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析
8、测定 标记免疫技术的分类标记免疫技术的分类一、按测定用途分类:一、按测定用途分类:1、免疫组化技术2、免疫测定技术二、按标记物分类二、按标记物分类:1、酶免疫技术酶免疫技术2、荧光免疫技术、荧光免疫技术3、放射免疫技术、放射免疫技术4、发光免疫技术5、金免疫技术直接法间接法补体法双标记法结合相游离相ELISA间接法间接法夹心法夹心法竞争法竞争法二、免疫细胞检测技术免疫细胞检测技术1、细胞表面标志检测2、细胞功能检测3、细胞因子检测常用的免疫细胞表面标志检测技术常用的免疫细胞表面标志检测技术一、免疫标记检测一、免疫标记检测1、荧光抗体法、荧光抗体法2、酶免疫检测法、酶免疫检测法3、免疫金银染色法
9、、免疫金银染色法二、补体依赖的细胞毒试验二、补体依赖的细胞毒试验(CDC)三、三、E花环形成试验花环形成试验SmIg的荧光抗体检测法的荧光抗体检测法SmIg的酶免疫检测法的酶免疫检测法补体依赖的细胞毒试验补体依赖的细胞毒试验(CDC)染料补体E-花环花环T细胞B细胞花环形成细胞绵羊红细胞一、转化、增殖试验一、转化、增殖试验1、淋巴细胞转化试验、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养、混合淋巴细胞培养二、细胞毒检测二、细胞毒检测1、T细胞介导的细胞毒试验细胞介导的细胞毒试验2、NK活性测定活性测定3、ADCC作用测定作用测定常用的免疫细胞功能检测技术常用的免疫细胞功能检测技术放射性测定3H-TdR
10、丝裂原(抗原)刺激淋淋巴巴细细胞胞转转化化试试验验原原理理示示意意放射性测定细细胞胞毒毒试试验验原原理理示示意意靶细胞效应细胞分离上清可检测的细胞因子可检测的细胞因子白细胞介素(Interleukin)IL-1、IL-2、IL-18干扰素(Interferon)IFN-、IFN-、IFN-肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor)TNF-、TNF-集落刺激因子(Colony-stimulating factor)M-CSF、G-CSF转化生长因子(Transforming growth factor)TGF-趋化因子(Chemokine)IL-8、GROs、MCP-1生长因子(
11、Growth factor)EGF、FGF、IGF、PDGF细胞因子检测的特点细胞因子检测的特点1、免疫原性较弱2、样品含量低3、样品具有时效性4、生物效应特异性差细胞因子检测的方法细胞因子检测的方法1、免疫标记技术检测、免疫标记技术检测抗原性测定抗原性测定2、细胞生物学方法检测、细胞生物学方法检测生物活性测定生物活性测定3、分子生物学技术检测、分子生物学技术检测mRNA表达测定表达测定特异性免疫获得方式:特异性免疫获得方式:自然免疫、人工免疫自然免疫、人工免疫l自然被动免疫自然被动免疫:如胎儿从母体获得:如胎儿从母体获得IgG婴儿从母体获得婴儿从母体获得IgMl自然自动免疫自然自动免疫:感染
12、病原体后获得免疫力:感染病原体后获得免疫力l人工自动免疫人工自动免疫:接种类毒素、疫苗等接种类毒素、疫苗等l人工被动免疫人工被动免疫:注射抗毒素、丙种球蛋白等:注射抗毒素、丙种球蛋白等第二节第二节免疫预防免疫预防 思考题思考题:l1.1.你知道注射你知道注射“乙肝疫苗、卡介苗、白白破三乙肝疫苗、卡介苗、白白破三联疫苗联疫苗”的目的是什么?机制?属于何种免疫的目的是什么?机制?属于何种免疫?l2.2.你知道注射你知道注射“丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、丙球、胎盘球蛋白、抗毒素、IL-2IL-2、IFN”IFN”的目的是什么?机制?属于何种的目的是什么?机制?属于何种免疫?免疫?l3.3.注射疫苗和注
13、射丙球等制剂获得免疫力的方注射疫苗和注射丙球等制剂获得免疫力的方式各有什么特点?式各有什么特点?l4 4请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时请你举一个实例说明何时使用疫苗、何时使用丙球等制剂?理由及注意事项使用丙球等制剂?理由及注意事项。人工免疫人工免疫l定义定义:根据特异性免疫应答的原理,采用人工方法:根据特异性免疫应答的原理,采用人工方法将将Ag/Ab制成各种制剂,制成各种制剂,接种于人体接种于人体,使其,使其产生产生/获获得特异性免疫力得特异性免疫力,达到预防某些疾病的目的。,达到预防某些疾病的目的。l分类:分类:1、人工、人工主动主动免疫免疫用用疫疫苗苗或或类类毒毒素素等等抗抗原原接接
14、种种机机体体,使使之之产产生生特特异异免疫,从而预防感染的措施。免疫,从而预防感染的措施。2、人工、人工被动被动免疫免疫用用抗抗体体或或细细胞胞因因子子等等制制剂剂,使使之之获获得得特特异异免免疫疫,以治疗或紧急预以治疗或紧急预防感染的措施。防感染的措施。一、一、人工主动免疫人工主动免疫 (artificial active immunity):定义定义:人工主动免疫将疫苗人工主动免疫将疫苗(vaccine)或类毒素或类毒素接种于人体,使机体产生获得性免疫力的接种于人体,使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施,主要用于预一种防治微生物感染的措施,主要用于预防。防。人工主动免疫生物制剂
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