微生物检验常规培养基的制作.ppt
《微生物检验常规培养基的制作.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《微生物检验常规培养基的制作.ppt(75页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、培养基的分类培养基的分类l1.按用途分类:l基础培养基、营养培养基、增菌培养基、选择性培养基、鉴别培养基、显色培养基 现在学习的是第1页,共75页l基础培养基 含细菌所需最基本营养成分,可供大多数细菌生长。常用的如含适量蛋白胨、氯化钠、磷酸盐,pH7.2-7.6的营养肉汤和营养琼脂。l营养培养基 基础培养基再加入一些其他营养成分,如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生长因子等,以满足营养要求较高的细菌生长繁殖所需要的营养。现在学习的是第2页,共75页l增菌培养基 多为液体培养基,主要目的是增加标本中目的菌数量,以提高目的菌检出率。l选择性培养基 在培养基中加入抑制物质,使之具有选择性,有利于目的菌
2、检出和识别,而抑制其他非目的菌生长或者使其生长不佳。现在学习的是第3页,共75页加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入氨基嘌呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞现在学习的是第4页,共75页l鉴别培养基 利用各种细菌分解糖类和蛋白质的能力及其代谢产物的不同,即生化反应能力不同,在培养基中加入特定的作用底物和指示剂,以此来区别各种细菌。主要用于检查各种细菌的生化反应。l如伊红美蓝培养基可鉴别大肠杆菌,其代谢产物有机酸与伊红美蓝结合,使菌落呈现绿色金属现在学习的
3、是第5页,共75页大肠杆菌大肠杆菌EMB平板平板现在学习的是第6页,共75页沙门氏菌沙门氏菌BS琼脂琼脂现在学习的是第7页,共75页沙门氏菌沙门氏菌XLD琼脂琼脂现在学习的是第8页,共75页l显色培养基 细菌在生长繁殖过程中可合成和释放某些特异性酶,按酶的特性,选用相应底物和指示剂,将其配制在相关培养基中。根据细菌反应后出现的菌落颜色变化,确定待分离可疑菌株,有助于细菌快速诊断。现在学习的是第9页,共75页副溶血性弧菌副溶血性弧菌现在学习的是第10页,共75页副溶副溶API 20E现在学习的是第11页,共75页2.按物理性状分类按物理性状分类液体培养基流体培养基半固体培养基固体培养基现在学习的
4、是第12页,共75页液体培养基:不含凝固剂,利于菌体的快速繁殖、代谢和积累产物流体培养基:含0.05-0.07%琼脂粉,可降低空气中氧进入培养基的速度,利于一般厌氧菌的生长繁殖半固体培养基:含0.2-0.8%琼脂粉,多用于细菌的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料;固体培养基:含1.5-2%琼脂,用于细菌的分离、鉴定、菌种保存及细菌疫苗制备等多方面现在学习的是第13页,共75页液体培养基液体培养基现在学习的是第14页,共75页固体培养基固体培养基现在学习的是第15页,共75页半固体培养基半固体培养基现在学习的是第16页,共75页液体培养基:主要用于工业生产;固体培养基:主要用于分离、鉴定等
5、;半固体培养基:主要用于观察、保藏菌种。现在学习的是第17页,共75页3.按成分分类按成分分类l合成培养基 由化学物质和成分已知的各种物质所组成,可以是无机盐和有机物质等。l天然培养基 由化学物质不完全清楚或各批物质很难一致的天然物质所组成,如蛋白胨、牛肉膏、血液、马铃薯等。l半合成培养基 由不明化学成分的天然物质和 已知化学成分的物质组成现在学习的是第18页,共75页天然培养基 化学成分不明确,主要用于工业生产;合成培养基 化学成分明确,主要用于分类、鉴定。现在学习的是第19页,共75页l天然培养基:优点:取材便利、营养丰富、配制简便;缺点:营养成分难以控制、实验结果的重复性较 差。l天然培
6、养基如培养细菌的牛肉膏蛋白胨培养基;血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。现在学习的是第20页,共75页l合成培养基:l优点:化学成分及其含量明确、实验的可重复性好;l缺点:配制繁琐、成本较高。现在学习的是第21页,共75页培养基的主要成分及其作用培养基的主要成分及其作用l(1)营养物质:细菌在生长繁殖过程中所需要的营养成分,因细菌种类不同而异,有的对营养要求不高,仅需碳源、氮源即可;有的则要求较高,除碳源、氮源外,还需要鸡蛋、血清、血液等。l主要有蛋白胨、牛肉浸液、牛肉浸膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类等。现在学习的是第22页,共75页l1)蛋白胨:蛋白胨是培养基
7、中作为氮源应用最广泛的基本成分,它用于合成菌体蛋白质、酶类以及细菌生长繁殖。其特点是易溶于水,吸水性强,故须干燥密封保存。此外,蛋白胨受高热不凝固,遇酸不沉淀,在培养基中具缓冲作用,并含有各种游离氨基酸,易被细菌所利用。现在学习的是第23页,共75页l蛋白胨是动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的中间产物。蛋白质消化越彻底,含氨基酸越多,越有利于细菌生长繁殖。由于蛋白质来源不同,消化程度不同,制成的胨质量相差很大。通常的商品蛋白胨是由胃蛋白酶消化蛋白质而制成的含胨、多肽及多种氨基酸的混合物,可供大多数细菌生长需要。其缺点是含某些氨基酸较少。胰蛋白胨是胰蛋白酶在碱性条件下消化蛋白质所获得的分解产
8、物,其中含有很多氨基酸和多肽,特别是富含色氨酸,更适合作靛基质试验用的蛋白胨水。现在学习的是第24页,共75页2)牛肉浸液)牛肉浸液l牛肉浸液是将新鲜不含脂肪、肌膜、肌腱等精牛肉浸泡煮沸制成的肉汁。包括两类浸出物。一类为含氮可溶性浸出物(如肌酸、尿酸、腺苷酸、黄嘌呤、核苷酸、尿素、谷氨酸、肌肽等),另一类为非含氮浸出物质(如肝糖、磷酸己糖、乳糖、琥珀酸、肌醇、脂肪与无机盐等)。牛肉浸液可作为细菌氮源和碳源,但因含氮物质较少,尚不能满足细菌生长需要。现在学习的是第25页,共75页3)牛肉浸膏)牛肉浸膏l为牛肉浸液经长时间加热,蒸发掉水分后浓缩而成的膏状制品。牛肉浸液中的不耐热物质如糖类等已被破坏
9、,因而其营养价值不如肉浸液,但其因不含糖和使用方便,故可作肠道细菌鉴别培养基基础成分。现在学习的是第26页,共75页4)糖、醇类)糖、醇类l糖类是细菌生长繁殖所需的碳源、能源的基本成分。最常用的单糖是葡萄糖、阿拉伯糖等;双糖是乳糖、蔗糖等;多糖有菊糖和淀粉;醇类有甘露醇、卫矛醇等。其他的糖类和醇类主要用于发酵反应以及鉴定细菌。糖不耐热,过久的高热会被破坏,在碱性及与氮源一起高温情况下,破坏更快,制备这类培养基时,通常不用高温,并与培养基中其他成分分别灭菌。现在学习的是第27页,共75页5)血液)血液l培养基中加入血液,可增加蛋白质、多种氨基酸、糖类、无机盐等营养成分,同时还能提供辅酶、血红素等
10、特殊生长因子,供某些对营养要求高的细菌生长繁殖之用。此外,含血液的培养基还可以用于观察细菌溶血反应,作为细菌鉴定的一项指标。现在学习的是第28页,共75页血平板溶血现象血平板溶血现象现在学习的是第29页,共75页6)鸡蛋和动物血清)鸡蛋和动物血清l鸡蛋和动物血清对一部分细菌来说是必须营养成分,可作为养料直接被细菌利用。常用于制备特殊培养基,如培养结核杆菌的罗氏培养基和白喉棒状杆菌的吕氏血清培养基等。此外鸡蛋和血清还具有凝固剂作用,便于观察细菌菌落形态和生长情况。现在学习的是第30页,共75页7)生长因子)生长因子l在细菌生长繁殖过程中,需要一定的辅助生长因子。生长因子根据化学结构及代谢功能不同
11、分为三大类:维生素、氨基酸和嘌呤与嘧啶。细菌对这些物质需要量不大,但如缺少,某些细菌就不能生长。通常肝浸液、肉浸液、酵母浸液和血液中含有大部分生长因子,但有时需要另外加入。现在学习的是第31页,共75页8)无机盐类)无机盐类l制备培养基时常加入氯化钠和磷酸盐,这是因为细菌生长繁殖需要无机盐类,如K、Na、Mg、Fe、磷酸盐、氯化物等。l其中,有的需要量极微,如Mn、Cu等。这些无机离子除作为构成菌体的成分外,还是酶的激活剂,并起维持一定渗透压的作用。现在学习的是第32页,共75页(2)水分)水分l细菌细胞75%-80%由水组成。水是细菌营养、代谢过程中不可缺少的物质;水又是良好的溶剂,培养基中
12、许多营养物质均需溶于水才能被细菌吸收。蒸馏水和离子交换水不含杂质,在制备培养基时,一般需使用蒸馏水和离子交换水。无蒸馏水可以用自来水代替,因其中含有某些微量元素,有利于细菌生长,但应先煮沸使部分盐类沉淀,过滤澄清后再使用。现在学习的是第33页,共75页(3)凝固物质)凝固物质l配制固体培养基的凝固物质有琼脂、明胶和蛋白、血清等,最常用琼脂,特殊目的也可用明胶等。l琼脂是从石花菜等海藻中提取出来的一种胶状物质,属多糖类,一般不被细菌分解利用,无营养价值。琼脂在98摄氏度以上融化,在低于45摄氏度时则凝固成胶冻状态。用途不同的培养基中琼脂含量不同,固体培养基含量为2%-2.5%,半固体培养基琼脂含
13、量为0.3%-0.5%。现在学习的是第34页,共75页(4)抑制剂和指示剂)抑制剂和指示剂l抑制剂和指示剂是由于选择、鉴定和判断结果的需要而加入到培养基中的物质,并不为细菌生长繁殖所需。l抑制剂加入目的是抑制非检出菌生长或其少生长,以利于检出菌生长。根据所要抑制选择不同抑制剂。常用抑制剂有胆盐、煌绿、玫瑰红酸、亚硫酸钠、四硫磺酸盐、叠氮钠及一些染料和某些抗生素等。在选择抑制剂时需注意抑制剂应具有选择性抑制作用。现在学习的是第35页,共75页l指示剂是为方便了解和观察细菌是否利用和分解培养基中糖、醇类物质,而在培养基中加入的成分。l常用指示剂多为酸碱指示剂,如酚红、溴甲酚紫、溴麝香草酚蓝、中性红
14、、甲基红、碱性复红等,还有氧化还原指示剂,如亚甲蓝。l此外,一些新的氧化还原指示剂如四氮唑盐类等,也已广泛用于细菌快速培养和鉴定以及快速药敏试验方面。现在学习的是第36页,共75页培养基配制原则:(1)目的要明确:根据微生物的种类、培养目的等确定配制培养基的种类,因为不同的微生物对培养物质的需求不同。(2)营养要协调:注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜:各种微生物适宜生长的pH范围不同。细菌pH为:6.5-7.5;放线菌pH为:7.5-8.5;真菌pH为:5.0-6.0。现在学习的是第37页,共75页第二节第二节 实验内容实验内容现在学习的是第38页,共75页一、实验目的一、实验目
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 微生物 检验 常规 培养基 制作
限制150内