福尔马林固定人体肿瘤组织提取DNA的时效性研究.docx
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1、福尔马林固定人体肿瘤组织提取DNA的时效性研究【摘要】目的:研究多长时间内经福尔马林固定的标本既保证了组织形态的完好,还不影响DNA的提取。材料和方法:人体新鲜肿瘤组织经福尔马林固定标本12例,长期经福尔马林固定的标本10例,采用传统饱和酚氯仿抽提法提取DNA。结果:新鲜标本在福尔马林固定一周内提取DNA效果好,一周后DNA开始讲解,一个月后无法提取DNA。福尔马林长期固定的标本,经处理后有2例可以提出DNA,提取效果不好。结论:采用福尔马林固定的组织标本提取DNA最好在一周内,能保证DNA质量。1材料与方法:1.1实验材料:从沈阳市沈洲医院和辽宁省肿瘤收集了新鲜肿瘤标本12例,包括子宫肌瘤4
2、例,胃癌4例,大肠癌4例,每例标本体积约3cm3,同一天取材并固定于10%福尔马林溶液中,溶液均没过组织块。另取1998年从中国医科大学收集经福尔马林固定的胃癌标本10例。1.2方法:称出标本100mg,用均浆器均浆,参考Sambroock等人1的方法提取DNA,加入蛋白酶K的量按标准量(100g/ml),在56水浴3小时,不断轻摇混均,视消化效果可以加入标准量的1/2倍蛋白酶K进行消化,直至将材料完全消化为止,用饱和酚氯仿抽提法提取DNA。每天进行一次DNA的提取。1.3标本处理:对于1998年长期福尔马林固定的标本,依据文献2用PBS溶液冲洗,放在灭菌纸上将其揩干,于超净工作台上用无菌剪刀
3、将材料剪成50mg的小块,放入PBS液浸泡24小时后,转入70%的乙醇中处理24小时。一次换入梯度酒精中处理,80%乙醇2小时,重复一次;90%乙醇2小时,重复一次;95%乙醇2小时,重复一次,然后将材料放入1/2倍的PBS液中浸泡12小时,其间更换一次溶液。然后按照1.2方法提取DNA。1.4标本DNA的扩增随机选取两对引物进行扩增,引物一序列5CAAGCAGTCATCCTTTCTC3,5GCACTTAGGGATCCCATGAA3,扩增条件947min,9430,5420,7230,7210min,40个循环,4保存。引物二序列,扩增条件上游引物5GTAGTTTGCCCAAGGTCAAG3,
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