新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂注册审查指导原则(2023版).docx
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1、新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂注册审查指导原则(送审稿)本指导原则旨在指导注册申请人对新型冠状病毒(2019- nCoV)核酸检测试剂(以下简称“新冠病毒核酸检测试剂”) 注册申报资料的准备及撰写,同时也为技术审评部门提供参 考。本指导原则是对新冠病毒核酸检测试剂的一般要求,申 请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。若不适 用,需具体阐述理由及相应的科学依据,并依据产品的具体 特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指 导性文件,但不包括审评审批所涉及的行政事项,亦不作为 法规强制执行,应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
2、 如果有能够满足相关法规要求的其他方法,也可以采用,但 是需要提供详细的研究资料和验证资料。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水 平下制定,随着法规和标准的不断完善,以及科学技术的不 断发展,相关内容也将适时进行调整。一、适用范围新型冠状病毒(2019-nCoV)属于p属冠状病毒,有包 膜,颗粒呈圆形或椭圆形,直径约为60140nm。具有5个必 需基因,分别针对核壳蛋白(N)、包膜蛋白(E)、膜蛋白(M) 和刺突蛋白(S) 4种结构蛋白及RNA依赖性的RNA聚合 酶(RdRp)。核壳蛋白(N)包裹RNA基因组构成核衣壳, 外面围绕着病毒包膜蛋白(E),病毒包膜包埋有膜蛋白(M)、核酸
3、提取和反应体系研究确定最佳核酸提取和反应体系,包括核酸提取用的 样本体积、洗脱体积和PCR加样体积、各种酶浓度、引物/ 探针浓度、dNTP浓度、阳离子浓度及反应各阶段温度、时 间、循环数等。建议在保证核酸提取质量的情况下尽量扩大 总反应体系和加样量,以提高检测灵敏度。反应体系研究应确保不同基因的检测能力具有一致性, 对于结果为单基因阳性时需要复测的试剂,需使用至少10例 临床样本梯度稀释,观察各基因检出情况是否存在显著差异, 避免过高的复测率。提交不同适用机型基线和阈值循环数的确定资料。不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述,并提 交验证资料。3 .稳定性研究申报试剂的稳定性主要包括实时稳
4、定性(有效期)、开瓶 稳定性及冻融次数限制等研究,申请人可根据实际需要选择 合理的稳定性研究方案。稳定性研究资料应包括具体的实施 方案、详细的研究数据以及统计分析结论。对于实时稳定性 研究,应提供至少三批产品在实际储存条件下保存至成品有 效期后的研究资料。4 .阳性判断值研究阳性判断值一般为申报产品检测病毒核酸阳性的Ct值。 阳性判断值研究用样本来源应具有多样性和代表性,考虑不 同时间、地域、不同的感染阶段和生理状态等因素,尽量纳 入较多弱阳性样本。在条件允许的情况下,建议覆盖目前的 流行株进行阳性判断值研究。采用ROC曲线分析建立每个 检测靶基因的阳性判断值,然后确定产品的判读规则(单基 因
5、阳性、双基因阳性等)。对于结果为单基因阳性时需要复测 的试剂,建议对阳性判断值研究数据进行复测率的统计分析。 如判定值存在灰区,应提供灰区的确认资料。如果产品适用不同样本类型,需要对各样本类型进行阳 性判断值的验证。提交阳性判断值研究所用样本的背景信息列表,至少包 括性别、年龄、临床诊断信息、样本来源机构、检测结果等 信息。提供内标检测结果范围的确定方法和研究资料。5 .其他资料主要原材料研究资料该类产品的主要原材料包括引物、探针、酶、dNTP、核 酸分离/纯化组分(如有)、质控品、参考品等。应提供主要原 材料的选择与来源、制备过程、质量控制标准等相关研究资 料、质控品的定值试验资料等。如主要
6、原材料为企业自制, 应提供其详细制备过程;如主要原材料源于外购,应提供资 料包括:选择该原材料的依据及对比筛选试验资料、供货方 提供的质量标准、出厂检验报告,以及该原材料到货后的质 量检验资料。供应商应固定,不得随意更换。5.1.1 引物和探针:应详述引物和探针的设计原则,提供 引物、探针核酸序列、靶序列的基因位点及两者的对应情况。 建议每种病毒设计两套或多套引物、探针以供筛选,通过序 列比对和功能性试验等方式,对病毒进行包容性和特异性 (如交叉反应)的评价,其中序列比对包括与已公布新冠病 毒序列的比对,及与易产生交叉反应的其他病原体的序列比 对;功能性试验包括对不同来源、不同滴度的新冠病毒核
7、酸 阳性样本,和不同的近缘病原体的检测。通过筛选确定最佳 的引物和探针组合。引物、探针的质量标准应至少包括序列 准确性、纯度、浓度及功能性实验等。5.1.2 脱氧三磷酸核甘(dNTP):包括dATP、dGTP、dCTP、 dTTP、dUTP,应提供对其纯度、浓度、功能性等的详细验证 资料。5.1.3 酶:需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆转录酶、 尿喀噬DNA糖基化酶等,应分别对酶活性、功能性等进行 评价和验证。5.1.4 质控品试剂盒一般包含阴性质控品和阳性质控品。阳性质控品 应包含试剂盒检测的靶序列,可采用假病毒制备,建议采用 弱阳性浓度水平。质控品需参与样本处理、核酸的平行提取 和检测的全
8、过程,以对整个提取和PCR扩增过程、试剂/设 备、交叉污染等环节进行合理质量控制。提交试剂盒质控品 有关原料选择、制备、定值过程、浓度范围等试验资料,对 质控品的检测结果Ct值范围做出明确的要求。5.1.5 内标内标,又称内对照,可对管内抑制导致的假阴性结果进 行质量控制,应与靶核酸一同提取及扩增。申请人需对内标 的引物、探针设计和相关反应体系的浓度做精确验证,既要 保证内标荧光通道呈明显的阳性曲线又要尽量降低对靶基 因检测造成的抑制。明确内标的检测结果Ct值范围。建议科 学设置内标,对待测样本的取样质量、试剂的反应体系进行 监控。5.1.6 企业参考品该类产品的企业参考品一般包括阳性参考品、
9、阴性参考 品、检出限参考品和重复性参考品。应根据产品性能验证的 实际需要设置企业参考品。应提交企业参考品的原料来源、选择、制备、阴阳性及 浓度确认方法或试剂等相关验证资料。企业参考品应采用临 床样本,或者使用病毒培养物加入阴性基质。企业参考品的 设置建议如下:阳性参考品:应着重考虑不同来源的病毒样本和滴度要 求,应至少选取不同来源的5个病毒样本。阴性参考品:主要涉及对交叉反应的验证情况,建议包 括冠状病毒(HKU1、OC43、NL63、229E)、SARS冠状病毒 (可采用假病毒)、MERS冠状病毒(可采用假病毒)、流感 病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。检出限参考品:可采用95%阳
10、性检出水平或略高于检出 限的水平,如100%阳性检出水平。重复性参考品:建议包括高、低两个浓度的样本,其中 一个浓度应为检出限附近的浓度。5.2 生产工艺研究资料介绍产品主要生产工艺,可用流程图结合文字的方式表述。 提交主要生产工艺的确定及优化研究资料。(四)临床评价资料该类试剂应通过临床试验路径进行临床评价。临床试验 应满足体外诊断试剂临床试验技术指导原则(国家药品监 督管理局通告2021年第72号)的要求,如相关法规、文件 有更新,临床试验应符合更新后的要求。下面仅说明该类试 剂临床试验中应关注的重点问题。该类试剂临床试验应按要求在三家以上临床试验机构 进行,开展临床试验的机构应按要求经国
11、家药品监督管理局 医疗器械临床试验机构备案系统备案。1 .试验设计采用试验体外诊断试剂与已上市同类产品进行比较研 究,从而对产品临床性能进行确认。2 .受试者选择临床试验的入组人群应为产品的预期适用人群,该产品 的适用人群包括:有新冠感染相关症状的就诊患者及重症高 风险住院患者,以及根据国家卫生健康委员会相关规定需进 行新冠病毒核酸检测的其他人群。临床试验入组人群应能代 表适用人群的各种情形,如:最终确诊感染病例应包括不同 病毒载量(根据对比试剂核酸检测结果确定)的病例,最终 非新冠感染病例应适当纳入有相似症状的其他呼吸道病原 体感染病例。国家卫生健康委员会发布了新型冠状病毒感染 诊疗方案、新
12、型冠状病毒感染“乙类乙管”检测方案和其 他相关文件,申请人在进行临床试验时应考虑现行方案对检 测对象的规定,按照规定入组病例进行临床试验。3 .临床试验样本要求试验体外诊断试剂可同时适用于上呼吸道样本和下呼 吸道样本,也可仅适用于上呼吸道样本。建议按照新冠病 毒样本采集和检测技术指南进行样本采集。应采用临床原始样本进行临床试验。临床试验所用样本 类型、样本采集、样本处理、样本稳定性、核酸提取纯化及 结果判读等应分别满足试验体外诊断试剂与对比试剂产品 说明书的要求,并在临床试验小结和报告中明确上述内容。 临床试验前应对上述内容进行充分的性能评估。4 .临床试验样本量应基于与对比试剂的比较研究估算
13、临床试验样本量。根 据已有研究数据进行初步估算,建议对比试剂(核酸检测试 剂)检测阳性样本不少于200例,阴性样本不少于300例。 如涉及多种样本类型,每种样本类型的阳性和阴性样本例数 建议均不少于70例。应包括至少50例由对比试剂任一基因确定为弱阳性的 样本(一般将任一基因的Ct值小于cutoff值35个Ct值的 样本定义为弱阳性样本),如涉及多种样本类型,弱阳性样本 应覆盖每种样本类型。5 .对比方法应选择质量较好的已上市同类产品作为对比试剂。试验体外诊断试剂与对比试剂应针对同一份样本或同 步采集的相同样本类型的样本(采样顺序应随机)进行检测。 若尚无相同样本类型的核酸检测试剂批准上市,也
14、可选择同 源的、可比的样本,进行对比试剂的检测。申请人应对试验 体外诊断试剂与对比试剂的可比性进行充分的论证。对于新 的样本类型,申请人还应对新样本类型的适用性及其与对比 试剂检测时所用同源样本类型的可比性进行充分论证。6 .统计分析描述性统计分析应对入组人群进行人口学分析,包括年龄、性别和临床 诊断背景信息等。6.1 与对比试剂的总体一致性统计分析统计分析一般以2x2表的形式对结果进行总结,并据此 计算阴性符合率、阳性符合率、总符合率及其95%置信区间。7 .其他7.1 如试验体外诊断试剂同时适用于快检机型和常规机 型,且经临床前验证试验体外诊断试剂在快检机型与常规机 型上的检测性能没有显著
15、差异,但在样本提取纯化或反应体 系等方面存在明显差异,导致检测时间上存在明显差异的, 建议以代表性快检机型为主机型进行临床试验,同时进行一 定数量的代表性快检机型与代表性常规机型之间的比较研 究。7.2 如试验体外诊断试剂为包括新冠项目的多项联检试 剂,应考虑联检的临床意义,确认多项联检试剂具有相同的 适用人群,采用相同的样本类型。多项联检时,每个项目的 检测均应满足相应指导原则的要求。每个项目均应按照试验 体外诊断试剂和对比试剂产品说明书的要求进行临床试验, 如:样本采集、保存液/采样液/处理液和核酸提取纯化试剂等 的要求。7.3 如试验体外诊断试剂包括不同样本类型,针对每种 样本类型,可参
16、考6.2的相关内容,分别进行统计分析。针 对总体统计分析及样本类型的分层统计分析,临床试验结果 均应满足临床使用需求。7.4 针对不一致结果,应结合患者的流行病学背景、临床 症状和疾病转归等信息进行充分的分析。7.5 此外,还应关注并计算试验体外诊断试剂的复测率。 申请人应结合临床使用需求,严格控制复测率。8 .境外临床试验数据的认可境外临床试验数据应符合接受医疗器械境外临床试验 数据技术指导原则和使用体外诊断试剂境外临床试验数 据的注册审查指导原则的相关要求。提交完整的临床试验 方案、报告和伦理审查意见,以及该数据适用于中国患者人 群的论证资料、境内外临床试验质量管理差异的对比资料和 临床试
17、验质量管理差异对于临床试验结果影响的论证资料。注册申请人应根据上述临床试验技术审评要求,论证境 外临床试验数据的充分性。9 .临床评价资料的形式要求申请人应按照体外诊断试剂注册与备案管理办法、 关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文 件格式的公告、体外诊断试剂临床试验技术指导原则及 体外诊断试剂临床试验数据递交要求注册审查指导原贝V 等法规文件要求提交临床评价综述、各机构伦理审查意见、 临床试验方案、临床试验小结、临床试验报告及临床试验数 据库等。临床试验数据表作为临床试验小结的附件提交。数据表 应包括唯一可追溯的样本编号、年龄、性别、样本类型、受 试者临床诊断背景信息、新型冠状病毒
18、感染的诊断结果、试 验体外诊断试剂的检测结果和对比试剂的检测结果(如:各 基因和内标的Ct值)等。具体内容详见附表。其中,受试者临床诊断背景信息应尽量收集各病例的流 行病学史,临床表现如体征、症状,实验室检查包括一般检 查和病原学与血清学检查,特别是临床诊疗过程中新冠病毒 核酸的检测时间和结果等。应在各临床试验机构随机选择至 少50个样本(包括强阳、中阳和所有弱阳性样本),提交试 验体外诊断试剂与对比试剂的检测图谱。(五)产品说明书和标签样稿产品说明书格式应满足体外诊断试剂说明书编写指导 原则的要求。产品说明书中技术内容应与注册申报资料中 的相关研究结果保持一致,如某些内容引用自参考文献,应
19、以规范格式进行标注,并单独列明文献的相关信息。新冠病 毒核酸检测试剂说明书编写应重点关注以下内容。1 .【预期用途】本试剂盒用于体外定性检测具有新型冠状病毒感染相 关症状人群、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别诊 断者的XX样本中,新型冠状病毒(2019-nCoV) xx基因。本试剂盒检测结果应结合流行病学史、临床表现、其他 实验室检查等进行综合分析,作出诊断。该产品在使用上应当遵守新型冠状病毒感染诊疗方案 等文件的相关要求。开展新型冠状病毒核酸检测,应符合新冠病毒样本采集 和检测技术相关指南的要求,做好生物安全工作。2 .【检验原理】简述产品的核酸提取和RT-PCR原理。明确内标基因名
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