紫外分光光法测定氨茶碱含量.pptx
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1、紫外紫外-可见分光光度法(可见分光光度法(药典相关规定药典相关规定)1.1.对溶剂的要求对溶剂的要求 含杂原子的有机溶剂,通常具有末端吸收。因此,它含杂原子的有机溶剂,通常具有末端吸收。因此,它们的适用范围不能小于截止波长。例如们的适用范围不能小于截止波长。例如甲醇、乙醇的截止使甲醇、乙醇的截止使用波长为用波长为205nm205nm。另外,当溶剂不纯时,也可能增加干扰吸另外,当溶剂不纯时,也可能增加干扰吸收。因此,在测定样品前,应先收。因此,在测定样品前,应先检查所用溶剂在样品所用波检查所用溶剂在样品所用波长附近是否符合要求长附近是否符合要求,即将溶剂置,即将溶剂置1cm1cm石英吸收池中,以
2、空石英吸收池中,以空气为空白测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度在气为空白测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度在220-220-240nm240nm范围内不超过范围内不超过0.40.4,在,在241-250nm241-250nm范围内不得超过范围内不得超过0.20.2,在在251-300nm251-300nm范围内不得超过范围内不得超过0.100.10,在,在300nm300nm以上时不得超过以上时不得超过0.05.0.05.第1页/共20页第2页/共20页测定法测定法 应以配制样品溶液的同批溶剂为空白对照,吸收峰波长应应以配制样品溶液的同批溶剂为空白对照,吸收峰波长应在该品种项下规定的波长在该品
3、种项下规定的波长2nm2nm以内,并以吸光度最大的波长为以内,并以吸光度最大的波长为测定波长。测定波长。第3页/共20页含量测定含量测定(1 1)对照品比较法)对照品比较法(2 2)吸收系数法)吸收系数法第4页/共20页(3 3)计算分光光度法)计算分光光度法(4 4)比色法)比色法 样品本身在紫外样品本身在紫外-可见区没有强吸收,或可见区没有强吸收,或在紫外区虽有吸收但为避免干扰或提高灵敏度,在紫外区虽有吸收但为避免干扰或提高灵敏度,可加入适当的显色剂显色后测定。可加入适当的显色剂显色后测定。第5页/共20页药物其他分析定量方法药物其他分析定量方法标准曲线法标准曲线法 也称外标法或直接比较法
4、也称外标法或直接比较法,是一种简便、快速的定,是一种简便、快速的定量方法。与分光光度分析中的标准曲线法相似,首先用量方法。与分光光度分析中的标准曲线法相似,首先用欲测组分的标准样品绘制标准曲线。欲测组分的标准样品绘制标准曲线。内标法内标法第6页/共20页标准曲线法标准曲线法 标准曲线的标准曲线的横坐标横坐标(X)(X)表示可以表示可以精确测量的变精确测量的变量量(如标准溶液的浓度如标准溶液的浓度),称为普通变量,纵坐标,称为普通变量,纵坐标(Y)(Y)表示表示仪器的响应值仪器的响应值(也称测量值,如吸光度、电也称测量值,如吸光度、电极电位等极电位等),称为随机变量。当,称为随机变量。当X X取
5、值为取值为X1,X1,X2,X2,Xn Xn时,仪器测得的时,仪器测得的Y Y值分别为值分别为Y1,Y2,Y1,Y2,Yn Yn。将这些测量点。将这些测量点Xi,YiXi,Yi描绘在坐标系中,描绘在坐标系中,用直尺绘出一条表示用直尺绘出一条表示X X与与Y Y之间的直线线性关系,这之间的直线线性关系,这就是常用的标准曲线法。就是常用的标准曲线法。用作绘制标准曲线的标准物质,它的含量范围用作绘制标准曲线的标准物质,它的含量范围应包括试祥中被测物质的含量,应包括试祥中被测物质的含量,标准曲线不能任意标准曲线不能任意延长延长。第7页/共20页标准曲线法的优点是:标准曲线法的优点是:绘制好标准工作曲线
6、后绘制好标准工作曲线后测定工作就变得相当测定工作就变得相当简单,简单,可直接从标准工作可直接从标准工作曲线上读出含量,因此特别曲线上读出含量,因此特别适合于大量样品适合于大量样品的的分析。分析。标准曲线法的缺点是:标准曲线法的缺点是:每次样品分析的每次样品分析的色谱色谱条条件件(检测器的响应性能,柱温,流动相流速及(检测器的响应性能,柱温,流动相流速及组成,进样量,柱效等)组成,进样量,柱效等)很难完全相同很难完全相同,因此,因此容易出现较大误差。此外,标准工作曲线绘制容易出现较大误差。此外,标准工作曲线绘制时,一般使用欲测组分的标准样品(或已知准时,一般使用欲测组分的标准样品(或已知准确含量
7、的样品),而实际样品的组成却千差万确含量的样品),而实际样品的组成却千差万别,因此必将给测量带来一定的误差。别,因此必将给测量带来一定的误差。第8页/共20页内标法内标法内标法内标法 internal standard method internal standard method 是色谱分析中一是色谱分析中一种比较准确的定量方法,种比较准确的定量方法,尤其在没有标准物对照时尤其在没有标准物对照时,此,此方法更显其优越性。它尤其广泛的应用于高效液相色谱方法更显其优越性。它尤其广泛的应用于高效液相色谱中。这种方法中。这种方法可以抵消仪器和操作过程带来的误差。可以抵消仪器和操作过程带来的误差。内标
8、法是内标法是将一定重量的纯物质将一定重量的纯物质作为内标物作为内标物加到一定量的加到一定量的被分析样品混合物被分析样品混合物中,然后对含有内标物的样品进行色中,然后对含有内标物的样品进行色谱分析,分别测定内标物和待测组分的峰面积(或峰高)谱分析,分别测定内标物和待测组分的峰面积(或峰高)及相对校正因子,内标物在色谱图上得到分离的峰。根及相对校正因子,内标物在色谱图上得到分离的峰。根据已知含量的内标物的峰面积和样品的峰面积,计算组据已知含量的内标物的峰面积和样品的峰面积,计算组分的百分含量。分的百分含量。第9页/共20页 内标物的选择要符合以下要求:内标物的选择要符合以下要求:(1 1)内标物的
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