蛋白定量法.ppt
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1、LOGO蛋白质定量法蛋白质定量法2023/4/23BiochemistryExperiments2一实验目的一实验目的掌握蛋白质定量法的分类、原理;掌握紫外分光光度法和Folin酚试剂法掌握标准曲线绘制;掌握分光光度计的使用;2023/4/23BiochemistryExperiments3二常用测定方法与原理二常用测定方法与原理1.凯氏微量定氮法凯氏微量定氮法2.紫外分光光度法紫外分光光度法3.双缩脲法双缩脲法4.Folin酚试剂法酚试剂法(Lowry法法)5.考马氏亮蓝考马氏亮蓝-G2502023/4/23BiochemistryExperiments4 可见紫外分光光度法可见紫外分光光度
2、法(UV-visSpectrophotometry)2023/4/23BiochemistryExperiments5分光光度法 根据根据物质的吸收光谱及光的物质的吸收光谱及光的吸收定吸收定律律,对物质进行,对物质进行定性定性、定量定量分析的分析的一种方法。一种方法。2023/4/23BiochemistryExperiments6LambertBeer 定律定律:当入射光强度一定时,溶液当入射光强度一定时,溶液吸光度吸光度只与液层只与液层厚度和厚度和溶液浓度溶液浓度有关有关.2023/4/23BiochemistryExperiments7 分光光度计仪器型号很多,但其基本原理相似,其主要部
3、件用方框图示意如下光光源源 单色光器单色光器 吸收吸收池池 检测器检测器 讯号处讯号处理理 及显示器及显示器 分光光度计分光光度计2023/4/23BiochemistryExperiments8可见分光光度计是以可见光可见光(钨灯钨灯)为光源,而紫外分光光度计是以氢灯氢灯作光源,经单色器分光后提供所需的波长进入被测溶液。2023/4/23BiochemistryExperiments9(一一)紫外分光光度法紫外分光光度法蛋白质分子中蛋白质分子中酪氨酸和色氨酸酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有残基的苯环含有共轭共轭双键双键,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收高,因此蛋白质具有吸收紫外线的性质,吸收
4、高峰在峰在280 nm波长处。波长处。在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值与其含量在此波长范围内,蛋白质溶液的光吸收值与其含量呈正比关系,可用作定量测定。呈正比关系,可用作定量测定。优点优点:简单快速、不消耗样品、低浓度盐无干扰简单快速、不消耗样品、低浓度盐无干扰;缺点缺点:准确度差准确度差,受核酸影响。受核酸影响。2023/4/23BiochemistryExperiments10试剂管号012345678蛋白质标准溶液(1mg/ml)0.51.01.52.02.53.04.01.0(待测)蒸馏水4.03.53.02.52.01.51.003.0蛋白质浓度0.1250.2500.3750.5
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