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1、 基因工程是指按照人们的愿望,进行严格基因工程是指按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外的设计,通过体外 和和 等技术,等技术,赋予生物以新的赋予生物以新的 ,创造出更符合人,创造出更符合人们需要的新的生物们需要的新的生物 和生物和生物 。基因工程的别名基因工程的别名基因拼接技术或基因拼接技术或DNADNA重组技术重组技术操作环境操作环境生物体外生物体外操作对象操作对象操作水平操作水平基本过程基本过程结果结果人类需要的基因产物人类需要的基因产物基因基因DNA分子水平分子水平基因表达载体的构建基因表达载体的构建目的基因的获取目的基因的获取目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定导入受体细胞导入
2、受体细胞DNA重组重组转基因转基因遗传特性遗传特性类型类型产品产品基因工程的概念基因工程的概念基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明是遗传物质的证明DNA双螺旋结构和中心法则的确立双螺旋结构和中心法则的确立遗传密码的破译遗传密码的破译基基础础理理论论技技术术发发明明基因转移载体的发现基因转移载体的发现工具酶的发明工具酶的发明DNA合成和测序技术的发明合成和测序技术的发明DNA体外重组的实现体外重组的实现重组重组DNA表达实验的成功表达实验的成功第一例转基因动物问世第一例转基因动物问世PCR技术的发明技术的发明DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶“分子手
3、术刀分子手术刀”DNA连接酶连接酶“分子缝合针分子缝合针”基因进入受体细胞的载体基因进入受体细胞的载体“分子运分子运输车输车”限制性核酸内切酶“分子手术刀”主要在原核生物中主要在原核生物中特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点特异性,即识别特定核苷酸序列,切割特定切点磷酸二酯键磷酸二酯键EcoEcoRIRI限制酶能识别限制酶能识别GAATTCGAATTC序列,并在序列,并在G G和和A A之间切开之间切开分布:分布:作用特点:作用特点:切点:切点:举例:举例:限制性内切酶限制限制酶酶限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列,无论是限制酶所识别的序列,无论是6个碱基个碱基还是还是4个
4、碱基,都可以找到一条中心轴个碱基,都可以找到一条中心轴线,中轴线两侧的双链线,中轴线两侧的双链DNA上的碱基上的碱基是反向对称重复排列的。是反向对称重复排列的。DNA连接酶“分子缝合针”连接酶有两种:一种是从大肠杆菌中分离得到的,连接酶有两种:一种是从大肠杆菌中分离得到的,称之为称之为EcoliEcoli连接酶。另一种是从连接酶。另一种是从T4T4噬菌体中噬菌体中分离得到,称为分离得到,称为T T4 4连接酶。连接酶。这两种连接酶催化反应基本相同,都是连接双链这两种连接酶催化反应基本相同,都是连接双链DNADNA的缺口,而不能连接单链的缺口,而不能连接单链DNADNA。EcoliEcoli连接
5、酶只能连接黏性末端;连接酶只能连接黏性末端;T T4 4连接酶既连接酶既可可“缝合缝合”黏性末端,又可黏性末端,又可“缝合缝合”平末端。平末端。基因的载体“分子运输车”载体必须具备的条件:载体必须具备的条件:1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存;、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存;2、具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;、具有多个限制酶切点,以便与外源基因连接;3、具有某些标记基因,便于进行筛选。(如抗菌素的抗、具有某些标记基因,便于进行筛选。(如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等性基因、产物具有颜色反应的基因等)4、对受体细胞无害、对受体细胞无害载体的作用:载体的作用:1、将外源
6、基因转移到受体细胞中去。、将外源基因转移到受体细胞中去。2、利用运载体在受体细胞内,对外源基因进行大量复制。、利用运载体在受体细胞内,对外源基因进行大量复制。常用的载体有:常用的载体有:质粒,质粒,噬菌体的衍生物,动植物病毒等噬菌体的衍生物,动植物病毒等(一)目的基因的获取(一)目的基因的获取1 1、目的基因、目的基因:编码蛋白质的基因:编码蛋白质的基因(1 1)从基因文库获取:)从基因文库获取:用限制酶切割用限制酶切割DNA,DNA,形成许多形成许多DNADNA片段(基因组文库片段(基因组文库)(2 2)人工合成法:)人工合成法:反转录法:反转录法:用用mRNAmRNA反转录出反转录出DNA
7、DNA片段片段(cDNAcDNA)化学合成法:化学合成法:根据蛋白质的氨基酸序列,推测根据蛋白质的氨基酸序列,推测mRNA mRNA 序列,再推测序列,再推测DNADNA序列,然后人工合成序列,然后人工合成DNADNA(cDNAcDNA)2 2、基因文库、基因文库:(1 1)基因组文库基因组文库:一种生物所有的基因一种生物所有的基因(2 2)部分基因文库部分基因文库:一种生物的部分基因(一种生物的部分基因(cDNAcDNA)3 3、获取方法:、获取方法:概念:概念:PCRPCR全称为全称为_,是一项,是一项 在生物在生物_复制复制_ _ _的核酸合成技术的核酸合成技术 条件:条件:_ _、_、
8、_ _、_._.前提条件:前提条件:原理:原理:_方式:方式:以以_方式扩增,即方式扩增,即_(n n为扩增循为扩增循 环的次数)环的次数)结果:结果:选修选修1 P1 P6060聚合酶链式反应聚合酶链式反应体外体外特定特定DNADNA片段片段DNADNA复制复制已知基因的核苷酸序列已知基因的核苷酸序列四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸一对引物一对引物DNADNA聚合酶聚合酶指数指数2 2n n使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增(3 3)利用)利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因模板模板过程:过程:a a、变性、变性(90-9590-95):
9、双链):双链DNADNA模板模板 在热作用下,在热作用下,_断裂,形成断裂,形成_b b、复性、复性(复性复性55-6555-65):系统温度降低,引):系统温度降低,引 物与物与DNADNA模板结合,形成局部模板结合,形成局部_。c c、延伸(、延伸(70-7570-75):在):在TaqTaq酶的作用下,从酶的作用下,从 引物的引物的 延伸,合成与模板互补延伸,合成与模板互补 的的_。氢键氢键单链单链DNADNA双链双链DNADNA链链33端端1.1.用一定的用一定的_切割切割质粒,使其出现一个切质粒,使其出现一个切 口,露出口,露出_。2.2.用用_切断目切断目 的基因,使其产生的基因,
10、使其产生_ _ _。核心核心3.3.将切下的目的基因片段插入质粒的将切下的目的基因片段插入质粒的_处,处,再加入适量再加入适量_,形成了一个重组,形成了一个重组 DNADNA分子(重组质粒)分子(重组质粒)限制酶限制酶黏性末端黏性末端同一种限制酶同一种限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口DNADNA连接酶连接酶相同相同(二二)基因表达载体的构建基因表达载体的构建基因表达载体的组成:基因表达载体的组成:复制原点复制原点+启动子启动子+目的基因目的基因+终止子终止子+标记基因标记基因启动子:启动子:结合结合RNARNA聚合酶聚合酶 开始转录开始转录mRNAmRNA终止子:终止子:位于基因尾端位于基因
11、尾端 终止转录终止转录mRNAmRNA标记基因:标记基因:鉴别目的基因鉴别目的基因 是否导入是否导入(筛选筛选)目的:使目的基因在受体细胞中稳定存目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时使目在,并且可以遗传给下一代,同时使目的基因能够表达和发挥作用。的基因能够表达和发挥作用。(三三)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞转化转化导入方法导入方法动物细胞动物细胞显微注射法显微注射法(受精卵受精卵)微生物细胞微生物细胞感受态细胞(感受态细胞(CaCa2+2+)植物细植物细-目的基因进入目的基因进入_内,并且在内,并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程
12、受体细胞受体细胞表达表达稳定稳定农杆菌转化法农杆菌转化法花粉管通道法花粉管通道法基因枪法基因枪法1、将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞(1)农杆菌)农杆菌转化法转化法特点特点:能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物,对对单子叶植物无感染能力单子叶植物无感染能力Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受体细可转移至受体细胞并整合到其染色体上胞并整合到其染色体上转化过程转化过程:Ti质粒质粒目的基因目的基因构建构建表达表达载体载体导入导入植植物物细细胞胞插入插入植物细胞植物细胞染色染色DNA表达表达新新性性状状转入转入农农杆杆菌菌2 2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细
13、胞(1 1)方法:)方法:显微注射法显微注射法(2 2)程序:)程序:3 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞(1 1)原核生物特点:繁殖快、单细胞、遗传物质少)原核生物特点:繁殖快、单细胞、遗传物质少(2 2)方法:)方法:目的基因表达载体提纯目的基因表达载体提纯 取卵(受精卵)取卵(受精卵)显微注射显微注射 受精卵受精卵 新性状动物新性状动物用用CaCa2+2+处理细胞处理细胞 感受态细胞感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收感受态细胞吸收DNADNA分子分子(四四)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定检测检测鉴定鉴定检测染色体的
14、检测染色体的DNADNA上是否插入目的基因上是否插入目的基因检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAmRNA检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等DNADNA探针和目的基因单链杂交探针和目的基因单链杂交方法:方法:DNADNA分子杂交分子杂交方法方法:分子杂交分子杂交方法:抗原抗体杂交方法:抗原抗体杂交DNADNA探针和目的基因的探针和目的基因的mRNAmRNA杂交杂交检查是否成功检查是否成功DNADNA分子杂交示意图分子杂交示意图 采用一定的技术手段,将两种生物的采用一定的技术手段,将两种生物的DN
15、ADNA分子的单分子的单链放在一起,如果这两个单链具有互补的碱基序列,链放在一起,如果这两个单链具有互补的碱基序列,那么,互补的碱基序列就会结合在一起,形成杂合双那么,互补的碱基序列就会结合在一起,形成杂合双链区;在没有互补碱基序列的部位,仍然是两条游离链区;在没有互补碱基序列的部位,仍然是两条游离的单链。的单链。三、基因工程的应用三、基因工程的应用抗虫、抗病、抗逆、改变品质抗虫、抗病、抗逆、改变品质(一)植物基因工程(一)植物基因工程1 1、加快生长、改善品质、加快生长、改善品质(二)动物基因工程(二)动物基因工程2 2、生产药物(乳腺反应器)、生产药物(乳腺反应器)3 3、器官移植(供体)
16、、器官移植(供体)(三)基因工程药品(三)基因工程药品(工程菌:外源基因高效表达的菌系)(工程菌:外源基因高效表达的菌系)(四)基因诊断和基因治疗(四)基因诊断和基因治疗基因诊断:基因诊断:用标记探针通过用标记探针通过DNADNA分子杂交,鉴定遗传信息分子杂交,鉴定遗传信息基因治疗:基因治疗:把正常基因导入病人体内表达,发挥正常功能把正常基因导入病人体内表达,发挥正常功能体外基因治疗、体内基因治疗体外基因治疗、体内基因治疗(五)基因工程与环境保护(五)基因工程与环境保护环境监测环境监测(DNADNA探针检测微生物)探针检测微生物)污染治理污染治理(超级细菌)(超级细菌)抗虫基因抗虫基因BtBt
17、毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等抗病毒基因抗病毒基因病毒外壳蛋白(病毒外壳蛋白(coat proteincoat protein,CPCP)基因;病毒的复制酶基因)基因;病毒的复制酶基因抗真菌基因抗真菌基因几丁质酶基因和抗毒素合成基因几丁质酶基因和抗毒素合成基因 抗逆基因抗逆基因调节细胞渗透压的基因、调节细胞渗透压的基因、抗冻蛋白基因抗冻蛋白基因、抗除草剂基因抗除草剂基因优良性状基因优良性状基因提高必需氨基酸含量的蛋白质编码基因、提高必需氨基酸含量的蛋白质编码基因、控制番茄果实成熟的基因控制番茄果实
18、成熟的基因、与植物花青素代谢有关的基因与植物花青素代谢有关的基因转基因植物转基因植物肠乳糖酶基因肠乳糖酶基因外源生长激素基因外源生长激素基因提高动物生长速度提高动物生长速度改善畜产品的品质改善畜产品的品质生产药物生产药物药用蛋白质基因药用蛋白质基因+乳腺蛋白基因的启动因子乳腺蛋白基因的启动因子作器官移植的供体作器官移植的供体导入外源的抗原决定基因表达的调节因子,抑制或除去供体的抗原决导入外源的抗原决定基因表达的调节因子,抑制或除去供体的抗原决定基因定基因转基因动物转基因动物用基因工程方法,使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系。用基因工程方法,使外源基因得到高效率表达的菌类细胞株系。基因工程药
19、品包括:细胞因子(即淋巴因子如白细胞介素基因工程药品包括:细胞因子(即淋巴因子如白细胞介素22、干扰素)、抗体、疫苗、激素等干扰素)、抗体、疫苗、激素等工程菌工程菌:获取目的基因(例如血清白蛋白基因)获取目的基因(例如血清白蛋白基因)构建基因表达载体(在血清白蛋白基因前加构建基因表达载体(在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子)特异表达的启动子)显微注射导入哺乳动物受精卵中显微注射导入哺乳动物受精卵中形成胚胎形成胚胎将胚胎送入母体动物将胚胎送入母体动物发育成转基因动物(只有在产下的雌性个体发育成转基因动物(只有在产下的雌性个体中,转入的基因才能表达)。中,转入的基因才能表达)。实例实例:基因工程
20、实现动物基因工程实现动物乳腺生物反应器乳腺生物反应器的操作步骤的操作步骤 将将将将目的基因目的基因目的基因目的基因导入到动物的受精卵里,目的基因若导入到动物的受精卵里,目的基因若导入到动物的受精卵里,目的基因若导入到动物的受精卵里,目的基因若与受精卵染色体与受精卵染色体与受精卵染色体与受精卵染色体DNADNADNADNA整合,细胞分裂时,该基因随整合,细胞分裂时,该基因随整合,细胞分裂时,该基因随整合,细胞分裂时,该基因随染色体的倍增而倍增,使每个细胞中都带有目的染色体的倍增而倍增,使每个细胞中都带有目的染色体的倍增而倍增,使每个细胞中都带有目的染色体的倍增而倍增,使每个细胞中都带有目的基因,
21、使基因,使基因,使基因,使性状得以表达性状得以表达性状得以表达性状得以表达,并稳定地遗传给后代,并稳定地遗传给后代,并稳定地遗传给后代,并稳定地遗传给后代,从而获得基因产品。这样一种新的个体,称为转从而获得基因产品。这样一种新的个体,称为转从而获得基因产品。这样一种新的个体,称为转从而获得基因产品。这样一种新的个体,称为转基因动物。基因动物。基因动物。基因动物。总结:转基因动物总结:转基因动物基因工程在畜牧养殖业上的应用主要是什么?基因工程在畜牧养殖业上的应用主要是什么?繁殖具有抗病能力、高产仔率、高产奶率和高质繁殖具有抗病能力、高产仔率、高产奶率和高质繁殖具有抗病能力、高产仔率、高产奶率和高
22、质繁殖具有抗病能力、高产仔率、高产奶率和高质量的皮毛等优良品质的转基因动物。量的皮毛等优良品质的转基因动物。量的皮毛等优良品质的转基因动物。量的皮毛等优良品质的转基因动物。该过程的重要步骤是通过该过程的重要步骤是通过该过程的重要步骤是通过该过程的重要步骤是通过感染或显微注射技术感染或显微注射技术感染或显微注射技术感染或显微注射技术将将将将重组重组重组重组DNADNADNADNA转移到动物受精卵中。转移到动物受精卵中。转移到动物受精卵中。转移到动物受精卵中。1.1.基因治疗是把健康的外源基因治疗是把健康的外源基因导入有基因缺陷的细胞基因导入有基因缺陷的细胞中,达到治疗疾病的目的。中,达到治疗疾病
23、的目的。取患者骨髓分离干细胞病毒正常基因并入正常基因的干细胞注入患者体内基因治疗曙光初照基因治疗曙光初照2.2.实例:实例:将将腺苷酸脱氨酶基因腺苷酸脱氨酶基因转入取自患者的淋巴细胞中,再将这种转入取自患者的淋巴细胞中,再将这种淋巴细胞转入患者体内。淋巴细胞转入患者体内。(1)(1)治疗严重复合型免疫缺陷症治疗严重复合型免疫缺陷症利用修饰的腺病毒作载体,将治疗遗传性囊性纤维化病的正常基因转入患利用修饰的腺病毒作载体,将治疗遗传性囊性纤维化病的正常基因转入患者组织中者组织中(2)(2)治疗遗传性囊性纤维化病治疗遗传性囊性纤维化病3 3、基因治疗的类型、基因治疗的类型体外基因治疗体外基因治疗:先从
24、病人体内获得某种细:先从病人体内获得某种细胞,进行培养,然后在胞,进行培养,然后在体外完成基因转移体外完成基因转移,再筛选成功转移的细胞扩增培养,最后重再筛选成功转移的细胞扩增培养,最后重新输入患者体内。新输入患者体内。体内基因治疗体内基因治疗:直接向人体组织细胞中转移:直接向人体组织细胞中转移的治病方法。(如将治疗囊性纤维病的正常的治病方法。(如将治疗囊性纤维病的正常基因转入患者肺组织)基因转入患者肺组织)4 4、基因治疗的发展现状:、基因治疗的发展现状:处于初期的临床处于初期的临床试验阶段试验阶段五、基因芯片五、基因芯片 从正常人的基因组中分离出从正常人的基因组中分离出DNADNA与与DN
25、ADNA芯片杂交就芯片杂交就可以得出标准图谱;从病人的基因组中分离出可以得出标准图谱;从病人的基因组中分离出DNADNA与与DNADNA芯片杂交就可以得出病变图谱。芯片杂交就可以得出病变图谱。通过比较、分析这两种图谱,就可以得出病变的通过比较、分析这两种图谱,就可以得出病变的DNADNA信息。信息。基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、基因芯片诊断技术以其快速、高效、敏感、经济、平行化、自动化等特点,将成为一项现代化诊断新平行化、自动化等特点,将成为一项现代化诊断新技术。技术。一、蛋白质工程崛起的缘由一、蛋白质工程崛起的缘由满足人类满足人类生产和生生产和生活的需要活的需要例如:例如:改造
26、改造干扰素(半胱氨酸)干扰素(半胱氨酸)体外很难保存体外很难保存干扰素(丝氨酸)干扰素(丝氨酸)体外可以保存半年体外可以保存半年玉米中赖氨酸含量比较低玉米中赖氨酸含量比较低天冬氨酸激酶天冬氨酸激酶(352352位的苏氨酸)位的苏氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(104104位的天冬酰胺)位的天冬酰胺)改造改造改造改造天冬氨酸激酶(异亮氨酸)天冬氨酸激酶(异亮氨酸)二氢吡啶二羧酸合成酶二氢吡啶二羧酸合成酶(异亮氨酸)(异亮氨酸)玉米中赖氨酸含量可提高数倍玉米中赖氨酸含量可提高数倍四、蛋白质工程四、蛋白质工程1 1、基因工程的不足:、基因工程的不足:只能生产天然蛋白质只能生产天然蛋白
27、质2 2、天然蛋白质不足:、天然蛋白质不足:不完全符合人类需要不完全符合人类需要提高酶的热稳定性、延长药用蛋白的保存期提高酶的热稳定性、延长药用蛋白的保存期基因基因表达(转录和翻译)表达(转录和翻译)多肽(氨基酸序列)多肽(氨基酸序列)蛋白质(空间结构)蛋白质(空间结构)行使功能行使功能天天然然蛋蛋白白质质的的合合成成预期蛋白质功能预期蛋白质功能设计蛋白质结构设计蛋白质结构推测氨基酸序列推测氨基酸序列找到核苷酸序列找到核苷酸序列蛋蛋白白质质工工程程途途径径3 3、原理:、原理:预期蛋白质功能、找到相应预期蛋白质功能、找到相应DNADNA序列序列(第二代基因工程)(第二代基因工程)2.对天然蛋白
28、质进行改造,你认为应该直接对蛋白质对天然蛋白质进行改造,你认为应该直接对蛋白质分子进行操作,还是通过对基因的操作来实现?分子进行操作,还是通过对基因的操作来实现?答:毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改答:毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造,主要原因如下:造,主要原因如下:(1)任何一种天然蛋白质都是由基因编码的,改造了基因)任何一种天然蛋白质都是由基因编码的,改造了基因即对蛋白质进行了改造,而且改造过的蛋白质可以遗传下即对蛋白质进行了改造,而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造,即使改造成功,被改造过的去。如果对蛋白质直接改造,即使改造成功,被改造过的蛋
29、白质分子还是无法遗传的。蛋白质分子还是无法遗传的。(2)对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作,难)对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作,难度要小得多。度要小得多。旁栏思考题旁栏思考题 蛋白质工程流程图蛋白质工程流程图找到相应找到相应的核苷酸的核苷酸序列序列推测氨基推测氨基酸序列酸序列设计预期蛋白设计预期蛋白质三维结构质三维结构预期蛋白预期蛋白质功能质功能DNA合成合成蛋白质工程的概念:蛋白质工程的概念:是指以蛋白质分子的是指以蛋白质分子的结构规律结构规律及其与及其与生物功能生物功能的关系作为基础,通过的关系作为基础,通过基因修饰或基因合成基因修饰或基因合成,对现,对现有蛋白质进行改
30、造一种有蛋白质进行改造一种新的蛋白质新的蛋白质,以满足人类的,以满足人类的生产和生活的需求。生产和生活的需求。(第二代基因工程)(第二代基因工程)蛋白质工程的基本原理蛋白质工程的基本原理蛋白质工程的内容主要有两方面:蛋白质工程的内容主要有两方面:一是一是根据需要设计具有根据需要设计具有特定氨基酸序列和空间结构特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质的蛋白质二是二是确定蛋白质的化学组及空间结构与生物功能之间的关系,确定蛋白质的化学组及空间结构与生物功能之间的关系,在此基础上,实现从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生在此基础上,实现从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生理功能,设计合成具有特定生物功能的全新
31、蛋白质,而氨基理功能,设计合成具有特定生物功能的全新蛋白质,而氨基酸排序由基因决定,所以还需要酸排序由基因决定,所以还需要改造改造控制蛋白质合成的相应控制蛋白质合成的相应基因中脱氧核苷酸序列或人工合成基因中脱氧核苷酸序列或人工合成所需要的自然界原本所需要的自然界原本不存不存在的基因片段在的基因片段,用与蛋白质工程。,用与蛋白质工程。蛋白质工程的进展与前景蛋白质工程的进展与前景蛋白质工程目前的现状:成功的例子不多,蛋白质工程目前的现状:成功的例子不多,主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于正确的空间结构,而科学家目前对大多数正确的空间结构,而科学家目前对大多数蛋
32、白质的空间结构了解很少。蛋白质的空间结构了解很少。作业作业:蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同?蛋白质工程与基因工程相比蛋白质工程与基因工程相比,合成的蛋白质有何特点合成的蛋白质有何特点?实实例:利用基因工程技例:利用基因工程技术术生生产产人胰人胰岛岛素素人胰人胰岛细岛细胞胞大大肠肠杆菌杆菌胰胰岛岛素素mRNAA人胰人胰岛岛素素人胰人胰岛岛素素大量的大量的A重复重复进进行行BCD2.2.过程过程必需的酶是必需的酶是 酶,过程酶,过程一一般用般用 方法是氢键断裂,也可以用方法是氢键断裂,也可以用 酶处理。酶处理。4.4.为使过程为使过
33、程更易进行,可用更易进行,可用 (药剂)处理(药剂)处理D D。3.3.在利用在利用A A、B B获得获得C C的过程中,必须用的过程中,必须用 切割切割A A和和B B,使它们产生使它们产生 ,再加入,再加入DNADNA连接酶,才可形成连接酶,才可形成C C。皮肤细胞中的胰岛素基因未表达(或未转录),不能形成胰岛素皮肤细胞中的胰岛素基因未表达(或未转录),不能形成胰岛素mRNAmRNA 逆转录酶、逆转录酶、DNADNA聚合酶聚合酶 高温高温 解旋解旋 同一种限制性内切酶同一种限制性内切酶 相同的黏性末端相同的黏性末端 Ca+Ca+预期的蛋白质功能预期的蛋白质功能设计预期的蛋白质结构设计预期的蛋白质结构推测应用的氨基推测应用的氨基酸序列酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列1.1.能否利用人的皮肤细胞来完成能否利用人的皮肤细胞来完成过程:过程:(能、不能),为什么?(能、不能),为什么?。5.5.采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造,使之起效时间缩短,保证餐后血采用蛋白质工程可以对胰岛素进行改造,使之起效时间缩短,保证餐后血糖高峰和血胰岛素高峰的一致。如果您是科研工作者,请写出研制速效胰岛糖高峰和血胰岛素高峰的一致。如果您是科研工作者,请写出研制速效胰岛素的思路:素的思路:
限制150内