脱氢酶活性测定实验报告.docx
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1、脱氢酶活性测定实验报告TTC标准曲线的绘制:320.312400. 456TTC 浓度(ug/mL) 81624吸光值 A 0.0410. 1860.298TTC标准曲线吸光值A 一线性(吸光值A) y = 0.的 56x3.0282R” = 0.9521163240 TTC谎度(ug/nL)土壤脱氢酶的吸光值记录:编号123平均吸光值A0.1450.1670.1860.166由标准曲线可得相应TTC浓度为:2.0314 ug/mL则土壤脱氢酶活性=ABC= 2.0314*18*1=36.5652式中:A为查出的TTC浓度(ug/mL); B为培养时间校正值(18h);C为比色时稀释 倍数。思
2、考题:1 .影响脱氢酶活性的因素有哪些?答:pH:每种酶都有最适pH,在此pH下,酶活性最大;温度:酶活性随着温度的升高而增加,在最适温度时达到最高值,然后开始下降;激活剂:可以促进酶活性;抑制剂:会使酶活性降低;还有内因如底物浓度和酶浓度。2已知乳酸脱氢酶(LDH)在NAD+的递氢作用下,使乳酸脱氢生成丙酮酸。丙 酮酸在碱性溶液中与2,4-二硝基苯肌生成2,4-二硝基苯踪使溶液呈蓝色。颜色的 深浅与丙酮酸浓度成正比。请设计一个测定动物肝脏乳酸脱氢酶活性的实验。答:1,校正曲线的制作:(1)按下表操作:加入物(ml)B12345丙酮酸标准液00.0250.050.10.150.2底物缓冲液0.
3、50.4750.450.40.350.3去离子水0.110.110.110.110.110.11二硝基苯肺0.50.50.50.50.50.5NaOH5.05.05.05.05.05.0相当于金氏单位01252505007501000(2) 37度水浴15分钟,室温放置5min后,于440nm波长处比色,比色杯光径为 1.0cm,用B管调零,读取各管吸光度。以吸光度值为纵坐标,相应的酶活性单位 为横坐标绘制校正曲线。2,酶活性的测定:(1)加入物(ml)血清NAD+底物缓冲液(37度水浴5min)NAD+溶液(37度水浴15min)2,4二硝基苯肺NAD+溶液(37度水浴15分钟)0.4mol/L 溶液测定管 对照管0.010.010.50.50.1-0.50.5-0.15.05.0(2)比色杯光径为1.0cm,用蒸镭水调混匀,室温放置5min后,于440nm波长处比色, 零,读取各管吸光度。以测定管与对照管吸光度之差值查校正曲线,得酶活性。单位定义:以100ml血清,37度,作用底物15min,产生lumol丙酮酸为一个金氏单位。
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