糖的组织化学 PPT课件.ppt
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1、组织化学组织化学 histochemistry特殊染色特殊染色,通过应用某些能与组织通过应用某些能与组织细胞化学成分特异性结合的显色细胞化学成分特异性结合的显色试剂试剂,定位地显示病变组织细胞的定位地显示病变组织细胞的特殊化学成分特殊化学成分,同时又能保存原有同时又能保存原有的形态改变的形态改变,达到形态与代谢的结达到形态与代谢的结合合.可用于检测细胞内的酶类、糖类、可用于检测细胞内的酶类、糖类、脂类、核酸、某些金属元素等。脂类、核酸、某些金属元素等。糖糖 的的 组组 织织 化化 学学糖的分类糖的分类1.单糖和双糖单糖和双糖2.多糖:淀粉、纤维素、糖原多糖:淀粉、纤维素、糖原3.粘液物质(粘多
2、糖)粘液物质(粘多糖)中性粘多糖中性粘多糖 酸性粘多糖酸性粘多糖4.糖蛋白糖蛋白 粘蛋白粘蛋白 氨基己糖氨基己糖4%糖蛋白糖蛋白 氨基己糖氨基己糖4%5.糖脂糖脂 含有半乳糖含有半乳糖,脂肪酸脂肪酸,神经氨基醇神经氨基醇糖糖 原原一一.糖原的概念糖原的概念l 由多糖衍化而来,是天然存在于动物组由多糖衍化而来,是天然存在于动物组织内的多糖织内的多糖l 分布:胞浆内分布:胞浆内 肝、心肌、骨骼肌肝、心肌、骨骼肌l 同种葡萄糖的聚合物同种葡萄糖的聚合物l 作为糖原染色的切片,必须冰冻或经特作为糖原染色的切片,必须冰冻或经特殊固定液固定后进行切片殊固定液固定后进行切片二二.固定剂的选用固定剂的选用1.
3、Carnoy(冷冷4)无水乙醇无水乙醇 60ml 防止糖原溶于水防止糖原溶于水 氯氯 仿仿 30ml 增加渗透力增加渗透力 冰冰 醋醋 酸酸 10ml 抵消乙醇对组织的抵消乙醇对组织的 收缩、硬脆作用收缩、硬脆作用 *优点:固定迅速,保存肝糖原优点:固定迅速,保存肝糖原 2.Gendre(冷冷4)苦味酸无水乙醇饱和液苦味酸无水乙醇饱和液 80ml 甲醛甲醛 15ml 冰醋酸冰醋酸 5ml临用前混合配制临用前混合配制3.Lillie固定液(固定液(AAF)无水乙醇无水乙醇 85ml 冰醋酸冰醋酸 5ml 甲醛甲醛 10ml 固定液预冷固定液预冷4,固定,固定24h后,后,95%乙乙醇脱水,包埋醇
4、脱水,包埋三三.固定中注意事项固定中注意事项1.尽可能取小块新鲜组织及时固定,不用尽可能取小块新鲜组织及时固定,不用水溶性固定液水溶性固定液2.应用含酒精的溶液作为固定液,但最好应用含酒精的溶液作为固定液,但最好不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的不单独使用乙醇固定,以乙醇为溶剂的混合固定液固定为佳混合固定液固定为佳3.固定原理:使糖原与固定液之间相结合固定原理:使糖原与固定液之间相结合的蛋白质凝固,糖原被周围凝固的蛋白的蛋白质凝固,糖原被周围凝固的蛋白质膜保护起来,质膜保护起来,四四.显示糖原的方法显示糖原的方法 1.碘染色碘染色 2.胭脂红染色胭脂红染色*3.过碘酸过碘酸-Schiff 反应
5、反应 4.银浸染法银浸染法过碘酸过碘酸-Schiff 反应反应Periodicacid-Schiff,PAS(一)染色原理一)染色原理过碘酸是一种强氧化剂,能氧化糖分子,过碘酸是一种强氧化剂,能氧化糖分子,使相邻二个碳原子上的羟基(使相邻二个碳原子上的羟基(-OH)变变为醛基(为醛基(-COOH)Schiff氏试剂是付品红(碱性品红)经氏试剂是付品红(碱性品红)经SO2作用后,形成的无色溶液作用后,形成的无色溶液付品红付品红Schiff试剂试剂当当Schiff氏试剂与醛基作用后,形成含有氏试剂与醛基作用后,形成含有发色基团的化合物,呈现紫红色沉淀发色基团的化合物,呈现紫红色沉淀*PAS反应的基
6、本原理反应的基本原理 1.通过过碘酸的氧化作用,将糖分通过过碘酸的氧化作用,将糖分子中的碳键打断,游离出醛基子中的碳键打断,游离出醛基 2.醛基与醛基与Schiff试剂反应显出红色试剂反应显出红色沉淀沉淀(二二)染色步骤染色步骤1.切片脱蜡至水切片脱蜡至水2.1%过碘酸溶液内氧化过碘酸溶液内氧化5-10min3.流水洗流水洗5min,再用蒸馏水洗再用蒸馏水洗4.用用Schiff试剂处理试剂处理10-20min5.流水洗流水洗10min6.复染复染(可用可用Mayer明矾苏木素或甲基绿衬染细明矾苏木素或甲基绿衬染细胞核胞核)7.脱水、透明、封片脱水、透明、封片切片经二甲苯和各级酒精复水后,入0.
7、5%的过碘酸溶液中作用15分钟,取出后水洗。切片充分洗净后入Schiffs试剂中进行显色。作用15分钟左右,将切片取出水洗,为洗去非特异性着色,将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗,取出后水洗,镜检。肝糖原肝糖原-PAS染色染色 X200 肝糖原肝糖原-PAS+苏木素复染苏木素复染 X200【结果】【结果】胞浆内胞浆内PAS阳性物质呈紫红色,颗粒状阳性物质呈紫红色,颗粒状或均质团块状,胞核呈蓝色或绿色或均质团块状,胞核呈蓝色或绿色 红色深浅反应含糖原量的多少红色深浅反应含糖原量的多少【对照】【对照】采用淀粉酶或唾液酶消化切片采用淀粉酶或唾液酶消化切片 对照片对照片PAS(-),),未处理片
8、(未处理片(+)PAS反应阳性物质反应阳性物质物质类别物质类别举例举例染色强度染色强度多糖多糖糖原糖原强强中性粘液物质中性粘液物质结肠杯状细胞结肠杯状细胞强强某些酸性粘液物质某些酸性粘液物质酸性非硫酸性含酸性非硫酸性含唾液粘多糖唾液粘多糖中中基底膜基底膜肾小球基底膜肾小球基底膜中中色素色素脂褐素脂褐素中中脂质脂质脑苷脂脑苷脂中中淀粉样物淀粉样物淀粉样物淀粉样物弱弱软骨软骨软骨软骨弱弱真菌真菌曲菌曲菌强强脑垂体脑垂体粘液样细胞粘液样细胞强强This normal glomerulus is stained with PAS to highlight basement membranes.The
9、capillary loops of the glomerulus are well-defined and thin.A888 kidney 11-PASA888 kidney 14-PAS(三)(三)PAS反应的应用反应的应用证明与鉴别细胞内空泡样变性证明与鉴别细胞内空泡样变性 (水变性、脂肪变性、糖原)(水变性、脂肪变性、糖原)心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究心肌病变及其它心血管疾病的诊断和研究糖原累积病的诊断及研究糖原累积病的诊断及研究糖尿病的诊断及研究糖尿病的诊断及研究某些肿瘤的诊断与鉴别某些肿瘤的诊断与鉴别肝细胞水变性肝细胞水变性肝脂肪变性肝脂肪变性(石蜡切片石蜡切片)肝脂肪变
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