治疗肿瘤中药的药效学研究课件.ppt

治疗肿瘤中药的药效学研究的设计和方法实验设计的中医学基础 恶性肿瘤属中医“积聚” 、 “恶肿”、 “癌”、“岩”等范畴。 病因系正气虚弱、气滞血瘀、客邪留滞、邪毒积聚、蕴郁成块所致。 肿瘤是基因病，长期、多因素造成的分阶段的过程。 外界致病因素：致癌物质亚硝酸铵、黄曲霉素、烷化剂（溴乙啶，EB，该试剂具有强烈致癌作用，用时要小心） 内在因素机体对肿瘤的反应（肿瘤免疫） 肿瘤患者随着病程的发展和病情的恶化，往往伴有免疫功能的下降。 由于邪气可踞于脏腑、经脉、肌肤等不同部位，而有茧唇、翻花、伏梁等称谓；由于邪正相搏消长，又呈现不同的证型变化。因此，中医治疗恶性肿瘤的治则，有扶正培本法、活血化瘀法、软坚散结法、化痰祛湿法、清热解毒法、疏肝理气法、通经活络法、以毒攻毒法等。 目前，抗癌中药大体上有四方面的作用： （1）抑杀肿瘤细胞的祛邪作用； （2）调整机体免疫功能等抗癌潜能的扶正作用； （3）提高手术、放疗、化疗等效果的增敏作用； （4）降低其他治疗方法（放疗、化疗）毒副反应的减毒作用 凡具有显著祛邪作用的，可称为抗癌药；若祛邪作用较弱或不明显，但具有（2）、（3）、或（4）等方面作用的，可称为抗癌辅助药。 抗癌药-具有明显抑杀肿瘤细胞作用； 抗癌辅助药-抑杀肿瘤细胞作用较弱或作用不明显，但具有免疫调整作用，或增效作用，或减毒作用。主要药效学研究 1、祛邪作用 2、扶正作用 3、增效作用 4、减毒作用祛邪作用（1）对动物移植性肿瘤的抑制作用（2）对肿瘤细胞体外生长的抑制作用（3）人体肿瘤的裸鼠移植试验（4）对动物自发性肿瘤或诱发性肿瘤的抑制试验。 新药的祛邪作用应在上述四项试验之一中得到确认。1、对动物移植性肿瘤的抑制作用p选择二种或二种以上的小鼠、大鼠或兔的移植性肿瘤，作实验治疗。p以实体型肿瘤观察瘤重生长抑制率，以腹水型肿瘤或白血病观察生命延长率。p观察瘤重抑制率，要求对照组瘤重均值在小鼠不得低于1克；实验治疗组动物平均体重下降（给药前后自身比较）不得超过15；动物死亡数不得超过20；瘤重抑制率在30以上，与对照组有显著性差异。p观察生命延长率，同途径给药（腹水型肿瘤腹腔给药）应在75以上；异途径给药应在50以上；对照组20动物存活时间不得超过4周。p癌株选择应尽量考虑与临床拟治肿瘤的性质、部位等相近似，如拟治肝癌，可首选用肝癌瘤株等，p给药途径应与临床一致，并设二个或二个以上剂量组。p对每一种癌株的实验治疗应重复三批。2、对肿瘤细胞体外生长的抑制作用 选择二种以上肿瘤细胞株作体外培养，用五个或五个以上不同浓度，观察药物对细胞形态、细胞膜功能、集落形成能力、瘤细胞代谢或核酸蛋白质前体掺入的影响。进行本试验时，（1）加入培养液中的所试药物应是在临床试验中直接与肿瘤组织接触的药物；（2）培养液中的药物浓度应是人体血液或肿瘤组织间液中能达到的浓度；（3）连续重复三次试验有效。化合物体外抗肿瘤活性的研究 采用MTT法、光学显微镜、透射电子显微镜及流式细胞仪等方法，观察了化合物,对Hela细胞的活力、形态学及生长周期等方面影响3、人体肿瘤的裸鼠移植试验 裸鼠需放置在水平式空气层流净化室内繁殖饲养，室温（252），相对湿度40%60%，一般为BABLB/C裸小鼠，鼠龄6 8周。 实验用裸鼠放置在带有过滤笼罩的透明笼内饲养。供裸鼠使用的笼具、饮水及饲料均需高压消毒处理，全部实验过程应达到SPF(specific pathage free,无特定病原体)级 裸鼠尤其适合于肿瘤转移的研究 肿瘤加荧光标记，可时时跟踪肿瘤的转移情况。4、对动物自发性肿瘤或诱发性肿瘤的抑制试验 实验动物种群中不经有意识的人工实验处置而自然发生的一类肿瘤称之为自发性肿瘤。 自发性肿瘤发生的类型和发病率可随实验动物的种属、品系及类型的不同而各有差异。 肿瘤实验研究中，一般应当选用高发病率的实验动物肿瘤模型作为研究对象，否则就无法进行研究。当然，低发病率的肿瘤模型也有一定用处，可以用它作为对照。肿瘤实验研究中选用自发性肿瘤型为对象进行研究有一定优点：u首先是自发性肿瘤通常比用实验方法诱发的肿瘤与人类所患的肿瘤更为相似，有利于将动物实验结果推用到人;u其次是这一类肿瘤发生的条件比较自然，有可能通过细致观察和统计分析而发现原来没有发现的环境的或其它的致癌因素，可以着重观察遗传因素在肿瘤发生上的作用。 自发肿瘤多数为病毒性，如C3H小鼠出生后有高的乳腺癌发生率，A系小鼠出生18个月内有90%的肺癌发生率，AK和C57小鼠有高的白血病发生率等等，这些肿瘤多发生于体表部位或易为目前体检新发现的部位。 当前新药研究中自发瘤模型应用最多的小鼠自发乳癌，常用高自发率的C3H小鼠或BALB/C雌鼠与DBA/2雄鼠杂交的第一代CD2F小鼠（自发乳癌），它们于生后10个半月可摸到肿瘤，而后生存2035天死亡，大量繁殖此类小鼠，自发瘤可高达70%。一般于摸到肿瘤块后分组给药，观察其平均生存时间的延长率来评价药物的疗效。 但应用自发性肿瘤模型也存在一些缺点：u肿瘤的发生情况可能参差不齐，不可能在短时间内获得大量肿瘤学材料，观察时间可能较长，实验耗费较大。 诱发性肿瘤模型:用化学致癌物、射线或病毒均可在各类动物中诱发不同类型的肿瘤。强扶正作用（1）对荷瘤动物免疫功能的影响（2）对荷瘤动物生物调节因子的影响（3）对荷瘤动物和正常动物一般状况的影响（4）对荷瘤动物的抗癌作用1、对荷瘤动物免疫功能的影响根据肿瘤生长过程中机体免疫功能受损的情况，选择其细胞免疫或体液免疫的二种或二种以上指标，观察药物对荷瘤动物的保护作用。2、对荷瘤动物生物调节因子的影响选择干扰素、白细胞介素或肿瘤坏死因子等与肿瘤生长有关的生物调节因子作指标。在荷瘤动物中观察药物对它们的影响。3、对荷瘤动物和正常动物一般状况的影响在荷瘤动物和正常动物中，观察药物对动物一般状态、体重、食欲、应激能力（如耐疲劳、耐缺氧、耐寒、耐高温或抗细菌毒素等）等影响。4、对荷瘤动物的抗癌作用选择一种或一种以上的实体型或腹水型移植性动物肿瘤，观察药物对瘤重或荷瘤生存时间的影响，经重复试验，取得可信的结果。扶正药不应促进肿瘤生长，而应延长带瘤生存时间，并在（l）、（2）、（3）等方面具有确切作用者。增效作用 （1）对荷瘤动物放疗的增效作用 （2）对荷瘤动物化疗的增效作用1、对荷瘤动物放疗的增效作用 选用临床使用的放疗原如Co60或X光，与中药合用，以观察有无协同增效作用。试验至少应设空白对照、单纯放疗及放疗加中药二个以上剂量组。2、对荷瘤动物化疗的增效作用 选用烷化剂、代谢拮抗剂或抗癌抗菌素等三类有代表性的抗癌药，与中药合用，观察有无协同增效作用，试验时，空白对照、化疗药及化疗药加中药二个以上剂量组，进行对比观察。减毒作用 （1）对荷瘤动物化疗或放疗毒副反应的减毒作用; （2）对正常动物化疗或放疗毒副反应的减毒作用。要求如上; （3）对荷瘤动物的抗癌作用. 减毒的抗癌辅助药，应是： （1）对肿瘤生长无明显影响或有一定抗癌作用； （2）能对特定的化、放疗的毒副作用有肯定的防治作用； （3）不影响化、放疗的疗效； （4）对荷瘤机体的正常功能无明显损伤作用。注意事项 1、祛邪的抑瘤试验，应参照国内统一规定的抗癌药筛选规程的基本原则进行；扶正、增效、减毒的抗癌辅助药应根据明确的适应症进行主要药效学试验，不宜笼统、泛指。 2、鉴于实验性肿瘤虽有不同的组织学类型，但在生物学行为上尚缺乏显著的组织特异性，因此在选择研制治疗肺、肝、胃等肿瘤的药物时，除注意挑选相应组织学类型的实验性肿瘤模型外，也可用其他组织学类型的实验肿瘤模型。 3、有的中药可以防治肿瘤转移或复发，有的可以预防肿瘤的发生，则应选择相应的动物实验模型进行。有的中药针对肿瘤患者的某个中医证型进行治疗的，除对肿瘤的作用外，应另行设计合适的指标。 4、抗癌药往往具有一定毒性，应重视其毒理学研究，进行多指标观察。 5、各类抗癌新药和抗癌辅助新药的药效学具体要求是； （1）抗癌药：一二类新药可在所列祛邪作用中进行对动物移植性肿瘤的抑制作用研究，并在其它三项试验中选做一项；三、四、五类新药可在祛邪作用的四项试验之一中得到确认。 （2）抗癌扶正药：一二类新药应在所列扶正作用中进行荷瘤动物的抗癌试验、对动物一般状态的试验，以及在其它试验中选做一项；三、五类新药应进行荷瘤动物的抗癌试验，并在其他试验中再选做一项；四类新药应根据原剂型的适应症，在扶正作用诸指标中选做一项，并与原剂型进行比较。对荷瘤动物生物调节因子的影响，对于本类药物更为重要，选择指标时一般宜优先考虑。 （3）抗癌增效减毒药：一、二类新药应作对动物移植性肿瘤的抑制作用、在正常动物以及荷瘤动物中的增效或减毒作用研究；三、五类新药应作抗癌作用和在荷瘤动物中的增效或减毒作用研究；四类新药应根据原剂型的适应症，在增效或减毒作用诸指标中选做一项，并与原剂型进行比较。常用动物模型抗癌药实验动物模型（1）人癌异种抑制瘤模型（2）动物移植性肿瘤模型（3）肿瘤细胞体外培养生长的离体模型（4）诱发或自发动物肿瘤模型肿瘤辅助药试验荷瘤动物免疫功能调节作用的实验模型（扶正作用实验）荷瘤动物放疗增效模型（增效作用）对动物化疗毒副作用的减毒模型（减毒作用）人癌异种抑制瘤模型细胞株：人胃癌SGC-7901（腺癌）、QGY-770肝癌（细胞癌）、A-549肺癌细胞（细胞癌）动物：裸鼠或免疫抑制鼠方法：皮下注射学期作业论文1、选择下列4种方剂中的一种药复方制剂，请根据处方和功能主治设计制备工艺、质量标准、药理研究（任选其一项）的研究方案2、可选择的方剂如下（选其中一种）处方：鱼腥草100g 毛冬青100g 大青叶100g，板蓝根100g， 功能主治:清热解毒,活血祛邪.用于风热感冒，咳嗽,咽喉肿痛，急慢性支气管炎，单纯性肺炎等。处方:天花粉100g、葛根150g、人参40g、麦冬100g、五味子100g。 功能主治: 养阴益气，生津止渴。主治气阴不足，口渴多饮，消食善饥，糖尿病属上述证候者处方:白花蛇舌草30g，鱼腥草30g，生苡仁5g,南沙参12g，北沙参12g, 天冬9g，麦冬9g 黄芪30g, 黄芩30g功能主治:养阴生津,益气消肿.用于肺癌的辅助治疗.处方:金铁锁100g、透骨香90g、汉桃叶80g、大血藤100g、八角枫30g 功能主治:祛风除湿，消肿止痛。用于风湿痹阻所致的关节肿痛、曲伸不利等