赤潮毒素检测作业指导书.doc

赤潮毒素检测作业指导书赤潮毒素检测作业指导书1.1.贝类样品的采集贝类样品的采集a)样品应采于赤潮发生区的水域或滩涂，选择人工养殖品种和野生经济食用种类；b)采样量应足以提供制取 100g 以上的组织匀浆量。此外，另采集 10 个个体，用 70%酒精溶液或 5%的甲醛溶液固定，以供分析胃内含物；c)依采集地点和品种，分别将样品置于冰柜中，投入注明采集地点、时间和品种的标签；d）采得的样品应尽快带回实验室及时处理，否则应放入冰箱保存。2.2.试样的制备试样的制备a)打开贝壳，将软组织和体液取出，用剪刀减碎，取100g 以上的量置于组织匀浆器中匀浆；b）称取 100.0g 匀浆样，置于 500ml 烧杯中，加入100ml 盐酸溶液，充分搅拌。然后用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调 PH 为 34；c）将此烧杯置水浴中煮沸 5min，冷却至室温，再调节PH 为 24，后用盐酸溶液定容至 200ml；d）若组织样品不足 100g，可按 1g 组织得 2ml 的上述处理样进行制备；e）将处理的样品离心，离心速度 3000r/min，离心时间 5min。之后，小心倾取上清液，即是贝毒的抽提液，置冰箱备用。3.3.检测步骤检测步骤3.1 空白试验取 23 只小白鼠，在其腹腔处分别注入 1ml 盐酸溶液，若 1h 内无死亡，即可进行毒性试验。3.2 毒性试验：a)先进行预实验，以判断提取液毒性强弱。取 23 只小白鼠，在每只的腹腔内注射提取液 1ml，若小白鼠在4min 内死亡，可依死亡时间查出相应的鼠单位；b）按预实验得出的鼠单位数据，用盐酸溶液稀释提取液，使每毫升稀释液的毒性约含 1.60 个鼠单位，以便把小白鼠的致死时间基本控制在 48min 之间。若预实验时，小白鼠死亡时间大于 4min，提取液不必稀释；c）取 810 只小白鼠，于每只腹腔注射 1ml 抽取液，注意观察、记录每只死亡时间，死亡判定以最后一次喘息为准。死亡时间力求控制在 48min 之间。3.3 胃含物的分析与鉴定a)将野外固定的贝类样品外壳撬开，用吸管吸水冲洗其软体部分，剖开微囊，滴入少许清水，稍加搅动，吸出胃含物，按浮游植物计数法计数；b）认真鉴定胃含物种的藻种，确定胃内是否含有海区的赤潮生物，并计算其在饵料中的比例。4.4.记录与计算记录与计算将毒性试验检测记入表中。样品的毒素含量以 100g 组织含有的鼠单位 Mu 表示。1个鼠单位的定义是 15min 杀死一只 20g 重小白鼠的腹腔注射剂量。按式（19）计算 100g 贝类软组织中毒素含量：=200ABD.(19)式中：A每实验组小白鼠平均死亡时间查得的相应鼠单位；B每试验组小白鼠平均体重对应的鼠单位校正系数；D抽提液的稀释倍数。若死亡时间（T）为 240s480s，则 A 与 T 有如下的关系式：lgA=（145/T）-0.2.(20)