血清丙氨酸氨基转移酶测定.doc

血清丙氨酸氨基转移酶测定血清丙氨酸氨基转移酶测定 1 1 检验目的检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果 的准确。 2 2 实验原理实验原理 本试剂以国际临床化学会(IFCC)推荐方法为基础，所采 用的反应原理与反应式如下。 样本中的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化丙氨酸的氨 基转换至 -氧代戊二酸，生成丙酮酸和 L 谷氨酸。 丙酮酸被试剂中的乳酸脱氢酶（LDH）还原为 L-乳酸 的同时还原型辅酶 I（NADH+ H+）被氧化为辅酶 I（NAD+） ， 而使波长 340nm 处的吸光度值下降。通过对波长 340nm 处 吸光度值的下降速率进行监测，即可测得样本中丙氨酸氨 基转移酶（ALT）的活性。 (3)样本中内源性丙酮酸的干扰，可由试剂中的乳酸脱 氢酶（LDH）在测定的延迟时间内快速、完全地消除，不会 对测定产生干扰。 ALT L-丙氨酸 + -酮戊二酸 丙酮酸 + L- 谷氨酸 丙酮酸+ NADH + H+ L-乳酸 + NAD+ + H2O 3 3 标本标本 3.13.1 病人准备：病人准备：12 小时禁食。 3.23.2 类型：类型：血清。 3.3.3.3. 标本存放：标本存放：3 天内的活性损失：28保存： <10%；1525保存：<17%；标本稳定性：-20保存至少 可稳定 4 周。 3.43.4 标本运输：标本运输：常温条件下保存运输。 3.53.5 标本拒收标准：标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 4 4 实验材料实验材料 4.14.1 试剂：试剂：上海复星长征医学科学有限公司 ALT 试剂盒 （沪食药监械（准）字 2014 第 2400166 号 YZB/沪 1546- 40-2014） 4.1.14.1.1 试剂组成试剂组成 LDH（乳酸脱氢酶） 试剂 1（R1）： L 丙氨酸 600mmol/L 乳酸脱氢酶 1820U/L NADH0.26mmol/ L Tris 缓冲液 80mmol/L 试剂 2（R2）： Tris 缓冲 液 80mmol/L 氧代戊二 酸 36mmol/L EDTA 5.0mmol/ 4.1.24.1.2 试剂准备：试剂准备：试剂为即用式。 4.1.34.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂稳定性与贮存：在 28避光、密封的储存条 件下，试剂盒自生产之日起有效期为 12 个月。 4.1.44.1.4 变质指示：变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度， 或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续 使用。 4.1.54.1.5 注意事项：注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺 激作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。一旦接触，即 用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.24.2 校准品：校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的 ALT 校准品对自动分析仪进行校准。 4.34.3 质控品：质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 5 仪器仪器 AU2700 生化分析仪，罗氏 P800 生化分析仪，西门子 ADVIA-2400 生化分析仪，东芝 TBA-120 生化分析仪 6 6 操作步骤操作步骤 6.16.1 样品的准备：样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的 位置。 6.26.2 试剂的检测：试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体 积等确认无误后方可进行测定。 6.36.3 项目基本参数：项目基本参数：参见生化检验 AU2700 生化分析仪，罗 氏 P800 生化分析仪，西门子 ADVIA-2400 生化分析仪，东 芝 TBA-120 生化分析仪项目测定参数。 6.46.4 仪器操作步骤：仪器操作步骤：参见生化检验 AU2700 生化分析仪，罗 氏 P800 生化分析仪，西门子 ADVIA-2400 生化分析仪，东 芝 TBA-120 生化分析仪操作规程。 7 7 质量控制质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平 I 与 II 质控做 为未知标本进行分析，以 2S 为质控警告限，3S 为失控限， 绘制质控图，判断是否在控。 8 8 计算方法计算方法 以 ALT 复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围 内，仪器直接报告可靠的检测结果，以 U/L 报告。 9 9 参考值范围参考值范围 男性：40U/L（0.67kat/L） 女性： 31U/L（0.52kat/L） 我室的参考值:7-50U/L 1010 临床意义临床意义 丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT） ，天 门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT） 。它们 是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基 酸转移给-酮酸的反应。ALT 是肝脏的特异性酶，仅在肝胆 疾病时显著升高。而 AST 水平的升高和心肌或骨骼肌损伤， 以及肝组织损害等都有关。因此同时进行 ALT 和 AST 的检 测，可用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT 比率 用于肝病的鉴别诊断。比率1 和严重肝病有关，常见慢性肝病。 ALT 活性在下列疾病可见增多：（1）肝胆疾病：传染 性肝炎、肝硬化活动期，中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和 胆囊水等。 （2）心血管疾病：心肌梗塞、心肌炎、心力衰 竭时的肝脏瘀血、脑血出等。 （3）骨骼肌疾病、多发性肌 炎、肌营养不良等。 一些药物和毒物可引起 ALT 活性升高：如氯丙嗪、异 菸奎宁、水扬酸制剂及酒精，铅泵、四氯化碳或有机磷等。 1111 操作性能操作性能 11.111.1 线性范围：线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖5500 U/L。 a) 线性相关系数（r）应不小于 0.990。 b) 550U/L 范围内，线性偏差应不超过 3.0U/L；51500 U/L 范围内，线性偏差应不超过 10。 11.211.2 精密度：精密度：(1)重复性：变异系数（CV%）5%；(2)批 间差：相对极差（%）5%。 11.311.3 准确度：准确度：相对偏差（B）应不大于10% 11.411.4 灵敏度：灵敏度：10.0U/L 样本的吸光度变化率（A/min）应 不小于 0.003 1212 超出范围结果处理超出范围结果处理 本试剂的线性范围为 5450U/L。当测定样本中丙氨酸 氨基转移酶活性高于 450U/L 时，应对样本进行稀释后再进 行测。应将样品用 9g/L 氯化钠溶液作 1：9 稀释，重新测 定，结果乘以 10。 1313 病危报警值的处理病危报警值的处理 无警告/危急值。 1414 方法局限性方法局限性 14.114.1 测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测 定温度和测定时间的控制。 14.214.2 试剂中含有的乳酸脱氢酶（LDH）可以在测定延迟孵 育时间内消除样本中内源性丙酮酸的干扰达 1mmol/L，血清 丙酮酸的正常水平为 0.0340.102mmol/L。 14.314.3 高脂血或黄疸样本在波长 340nm 处有较高的吸光度。 这类样本如含有高活性的丙氨酸氨基转移酶，在测定过程 中可能导致底物耗尽但在 340nm 仍维持有较高吸光度的现 象，此时应对样进行稀释后再进行测定。 14.414.4 试剂启用后，在 210避光的条件下可稳定 30 天。 若试剂混浊，或以水为空白在波长 340nm 处的吸光度值低 于 1.0A，则不能使用。 1515 补救措施补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。 1616 参考文献参考文献 16.116.1 叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规 程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版) 16.216.2 钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导. 人民卫生出版社，2012 年第 5 版 16.316.3 府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫 生出版社,2012 年第 5 版 16.416.4 试剂说明书