第五章黄酮类化合物.ppt

第五章黄第五章黄酮类化合物化合物2第一节第一节 概述概述 化合物数目多，存在于高等植物及蕨化合物数目多，存在于高等植物及蕨类植物，类植物，20032003年统计的该类化合物已超过年统计的该类化合物已超过90009000个；多数黄酮类化合物是个；多数黄酮类化合物是羟基或甲氧羟基或甲氧基取代基取代衍生物。衍生物。多与糖结合成多与糖结合成苷苷，少部分以游离形式，少部分以游离形式存在。存在。3第一节第一节 黄酮类化合物的结构类型黄酮类化合物的结构类型 以以前前，黄黄酮酮类类化化合合物物主主要要是是指指基基本本母母核核为为2-2-苯苯基基色原酮色原酮的一系列化合物。的一系列化合物。色原酮色原酮 2-2-苯基色原酮（黄酮）苯基色原酮（黄酮）一、黄酮类化合物的结构类型一、黄酮类化合物的结构类型 现在泛指两个具有酚羟基的苯环（现在泛指两个具有酚羟基的苯环（A A与与B B环）通过中环）通过中央三碳链相互连接而成的一系列化合物。央三碳链相互连接而成的一系列化合物。分类依据：分类依据：三碳链氧化程度三碳链氧化程度 B B环（苯基）连接位置（环（苯基）连接位置（2-2-或或3-3-位）位）三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状C6-C3-C6ABc6 由由葡葡萄萄糖糖分分别别经经桂桂皮皮酸酸途途径径和和醋醋酸酸-丙丙二二酸酸途途径径分分别别生生成成桂桂皮皮酰酰辅辅酶酶A A和和三三分分子子丙丙二二酰酰辅辅酶酶A A，合合成成查查耳耳酮酮，再再经经过过查查耳耳酮酮异异构构酶酶的的作作用用形形成成二二氢氢黄黄酮酮。二二氢氢黄黄酮酮再再在在各各种种酶酶的的作作用下衍变为各类黄酮。用下衍变为各类黄酮。生物合成途径生物合成途径 基本结构类型基本结构类型 n结构新颖的黄酮类母核 鱼藤酮类，紫檀素类n双黄酮类(biflavonoids)2分子黄酮 2分子二氢黄酮 1分子黄酮+1分子二氢黄酮 通过C-O-C、C-C相连n黄酮木脂素(flavonolignan)1分子黄酮+1分子木脂素n生物碱型黄酮 黄酮骨架上连有生物碱其他黄酮类化合物其他黄酮类化合物黄酮苷黄酮苷n多与糖成结合成苷，可成O-苷，也有C-苷 n单糖 D-Glc、D-Gal、D-Xyl、L-Rha、L-Ara、D-Glu An 双糖类 槐糖：Glc 12 glc 龙胆二糖 Glc 16 glc 芸香糖 Rha 16 glc 新陈皮糖 Rha 12 glcn三糖类 龙胆三糖 Glc 16 glc 12 fru 槐三糖 Glc 12 glc 12 glc 木犀草素木犀草素，多以，多以糖苷糖苷的形式存在于辣椒、野菊花、的形式存在于辣椒、野菊花、金银花（忍冬）中，具有具有镇咳和祛痰作用。金银花（忍冬）中，具有具有镇咳和祛痰作用。黄酮类（黄酮类（flavonesflavones）黄酮醇类（黄酮醇类（flavonolsflavonols）槲皮素槲皮素(quercetin)(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。降低具有抗炎、止咳祛痰等作用。降低血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；芦丁芦丁(rutin)(rutin)是槲皮素的是槲皮素的O O芸香糖苷。用于治疗毛细芸香糖苷。用于治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压及动脉硬化的辅助治疗。管脆弱引起的出血病，并用作高血压及动脉硬化的辅助治疗。黄酮醇类（黄酮醇类（flavonolsflavonols）头花蓼槐米金丝桃二氢黄酮类二氢黄酮类(flavanones)(flavanones)4 4二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类(flavanonols)(flavanonols)水飞蓟素水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。代谢中毒性肝损伤。5 5查尔酮类（查尔酮类（chalconeschalcones）查尔酮为苯甲醛缩苯乙查尔酮为苯甲醛缩苯乙酮类化合物，其邻羟基衍生酮类化合物，其邻羟基衍生物可视为二氢黄酮的异构体，物可视为二氢黄酮的异构体，二者可相互转化。二者可相互转化。二氢黄酮的吡喃酮环芳二氢黄酮的吡喃酮环芳香性低，在碱的作用下易开香性低，在碱的作用下易开环生成环生成6-6-羟基查耳酮，由羟基查耳酮，由无色转为无色转为深黄色深黄色，后者经酸，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄化又能转化为原来的二氢黄酮。酮。红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。第一个发现的查耳酮类植物成分5 5查尔酮类（查尔酮类（chalconeschalcones）6 6异黄酮类异黄酮类 (isoflavones)(isoflavones)主要存在于豆科、鸢尾科等植物中。如葛根主要含有下列几种异黄酮类成分。葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类似罂粟碱的解痉作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解高血压患者的头痛等症状。7 7花色素类花色素类(anthocyanidins)(anthocyanidins)使花、叶、果、使花、叶、果、茎等呈现、紫、红等茎等呈现、紫、红等颜色的色素。以苷的颜色的色素。以苷的形式存在于细胞液中，形式存在于细胞液中，经水解可生成苷元经水解可生成苷元花色素及糖。花色素及糖。小测试来啦小测试来啦以下化合物属于什么类？以下化合物属于什么类？二、黄酮类化合物的生物活性二、黄酮类化合物的生物活性1.1.对心血管系统的作用对心血管系统的作用n VpVp样样作作用用：芦芦丁丁、橙橙皮皮苷苷等等有有VpVp样样作作用用，能能降降低低血血管管脆脆性性及及异异常常通通透透性性，可可用用作作防防治治高高血血压压及及动动脉脉硬化的辅助治疗剂。硬化的辅助治疗剂。n 扩扩冠冠作作用用：芦芦丁丁、槲槲皮皮素素、葛葛根根素素、人人工工合合成成的的力可定。力可定。n 降血脂及胆固醇：木樨草素降血脂及胆固醇：木樨草素 2.抗肝脏毒作用抗肝脏毒作用从从水水飞飞蓟蓟种种子子中中得得到到的的水水飞飞蓟蓟素素具具有有保保肝肝作作用用，用用于于治治疗疗急急、慢慢性性肝肝炎炎、肝肝硬硬化化及及多多种种中中毒毒性性肝肝损损伤。伤。（+）-儿儿茶茶素素(catergen)也也可可抗抗肝肝脏脏毒毒作作用用，治治疗疗脂脂肪肪肝肝及及因因半半乳乳糖糖胺胺或或四四氯氯化化碳碳等等引引起起的的中中毒毒性性肝肝损伤。损伤。24 3.3.抗炎抗炎芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具抗炎作用。芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具抗炎作用。4.4.抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用如木樨草素、黄芩苷、黄芩素如木樨草素、黄芩苷、黄芩素 5.5.解痉作用解痉作用异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患者的头痛等症状；大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患者的头痛等症状；杜杜鹃鹃素素、川川陈陈皮皮素素、槲槲皮皮素素、山山奈奈酚酚、芫芫花花素素、羟羟基基芫芫花花素素：止止咳祛痰。咳祛痰。25 6.6.雌性激素样作用雌性激素样作用 大大豆豆素素(daidzein)(daidzein)等等异异黄黄酮酮具具有有雌雌性性激激素素样样作作用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。用，可能与它们与己烯雌酚结构类似。267.7.清除人体自由基作用清除人体自由基作用 黄黄酮酮类类化化合合物物多多具具有有酚酚羟羟基基，易易氧氧化化成成醌醌类类而而 提提 供供 氢氢 离离 子子，故故 有有 显显 著著 的的 抗抗 氧氧 化化 特特 点点。8.8.其他活性其他活性 另另外外还还有有降降血血脂脂、血血糖糖，抗抗动动脉脉粥粥样样硬硬化化及及抗癌抗突变等作用。抗癌抗突变等作用。27第二节第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应黄酮类化合物的理化性质及显色反应28 1.1.多多为为结结晶晶性性固固体体，少少为为（如如黄黄酮酮苷苷类类）无无定定形形粉末。粉末。2.2.旋光性旋光性 游游离离苷苷元元中中，除除二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇、黄黄烷烷、黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋光性。黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋光性。苷苷类类由由于于结结构构中中引引入入糖糖的的分分子子，均均有有旋旋光光性性，且且多为左旋。多为左旋。一、性状一、性状 3.3.颜色：与颜色：与分子中是否存在交叉共轭体系分子中是否存在交叉共轭体系 助色团的数目助色团的数目 取代基的位置取代基的位置 有关。有关。色色原原酮酮部部分分原原本本无无色色，但但在在2 2位位引引入入苯苯环环后后，即即形形成成交交叉叉共共轭轭体系体系，且通过电子的转移，重排，使，且通过电子的转移，重排，使共轭链延长共轭链延长，而表现出颜色。，而表现出颜色。30黄酮、黄酮醇及苷类黄酮、黄酮醇及苷类 灰黄灰黄-黄色黄色查耳酮查耳酮 黄黄-橙黄色橙黄色二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇 无色无色异黄酮异黄酮 微黄色微黄色 其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子中存在其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子中存在交交叉共轭体系叉共轭体系，在，在7,47,4位引入位引入-OH,OCH3-OH,OCH3等等助色团助色团则促进电子则促进电子移位、重排，使化合物颜色加深。移位、重排，使化合物颜色加深。花色苷及其苷元花色苷及其苷元的颜色随的颜色随pHpH的不同而改变：的不同而改变：呈现呈现红红（pH7pH8.5pH8.5）31二、溶解度二、溶解度 游离苷元难溶或不溶于水，易溶于游离苷元难溶或不溶于水，易溶于MeOH,EtOH,EtOAc,EtMeOH,EtOH,EtOAc,Et2 2O O 黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及查查耳耳酮酮是是平平面面型型分分子子，分分子子堆堆砌砌紧紧密密，分分子子间间引引力力较较大大，更难溶于水。更难溶于水。二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇是是非非平平面面型型分分子子，分分子子排排列列不不紧紧密密，分分子子间间引引力力降低，对水的溶解度较大。降低，对水的溶解度较大。花花色色苷苷元元（花花青青素素）类类虽虽系系平平面面型型分分子子，但但因因以以离离子子形形式式存存在在，具具有有盐盐的通性，故亲水性较强，水溶度较大。的通性，故亲水性较强，水溶度较大。32黄黄酮酮苷苷元元引引入入羟羟基基越越多多，水水溶溶性性越越强强，羟羟基基甲甲基基化化后后，则，则增加在有机溶剂中的溶解度增加在有机溶剂中的溶解度。如如一一般般黄黄酮酮类类化化合合物物不不溶溶于于石石油油醚醚中中，可可与与脂脂溶溶性性杂杂质质分分开开，但但川川陈陈皮皮素素（5,6,7,8,3,4-5,6,7,8,3,4-六六甲甲氧氧基基黄黄酮酮）却可溶于石油醚。却可溶于石油醚。33 黄黄酮酮类类化化合合物物的的羟羟基基苷苷化化后后，水水溶溶性性相相应应增增大大，而而在在有有机机溶溶剂剂中中的的溶溶解解度度相应减小。相应减小。黄黄酮酮苷苷一一般般易易溶溶于于H H2 2O,O,MeOH,MeOH,EtOHEtOH等，难溶或不溶于苯，氯仿等。等，难溶或不溶于苯，氯仿等。34三、酸碱性三、酸碱性 1.1.酸性酸性 黄黄酮酮类类化化合合物物多多具具有有酚酚羟羟基基而而呈呈酸酸性性，可可 溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。酸酸性性强强弱弱顺顺序序：7,7,4-4-二二羟羟基基 7,7,或或44羟羟基基 一般酚羟基一般酚羟基5-5-羟基羟基3-3-羟基羟基 此性质可用于提取、分离及鉴定工作。此性质可用于提取、分离及鉴定工作。352.碱性碱性-吡吡喃喃酮酮上上的的1-位位氧氧原原子子上上有有未未共共用用电电子子对对，表表现现微微弱弱的的碱碱性性，可可与与强强无无机机酸酸如如浓浓硫硫酸酸，盐盐酸酸生生成佯盐，但极不稳定，加水即可分解。成佯盐，但极不稳定，加水即可分解。黄黄酮酮类类化化合合物物溶溶于于浓浓硫硫酸酸中中生生成成的的佯佯盐盐常常表表现现出特殊的颜色，可用于鉴别。出特殊的颜色，可用于鉴别。36四、显色反应四、显色反应 (一一)还原反应还原反应1.1.盐酸盐酸-镁粉（盐酸镁粉（盐酸-锌粉）锌粉）反应反应 黄黄酮酮、黄黄酮酮醇醇及及二二氢氢黄黄酮酮、二二氢氢黄黄酮酮醇醇类类在在盐盐酸酸-镁镁粉粉作作用下，易被氢化还原，迅速生成用下，易被氢化还原，迅速生成红红-紫红紫红（个别有（个别有绿绿-蓝色）。蓝色）。将将样样品品溶溶于于甲甲醇醇或或乙乙醇醇，加加少少量量镁镁粉粉振振摇摇，滴滴加加几几滴滴浓浓盐盐酸酸，1-21-2分分钟钟内内（必必要要时时微微热热）即即可可出出现现颜颜色色。多多显显橙橙红红-紫紫红红色色，少少数数兰兰-紫紫色色，B B环环有有-OH-OH或或OCH3OCH3取取代代时时，颜颜色色随随之之加加深深，查耳酮、橙酮、儿茶素类则不反应。查耳酮、橙酮、儿茶素类则不反应。花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发生色变，故须先做一对照。生色变，故须先做一对照。37 2 2.四氢硼钠反应四氢硼钠反应 与二氢黄酮类化合物产生红与二氢黄酮类化合物产生红-紫色。紫色。取取0.1ml0.1ml样样品品溶溶液液，加加等等量量2%2%NaBHNaBH4 4甲甲醇醇溶溶液液，1min1min后后再再滴滴加加数数滴滴浓浓盐盐酸酸或或浓浓硫硫酸酸，呈呈紫紫-紫红紫红色。色。38（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应 黄黄酮酮类类化化合合物物分分子子结结构构中中多多有有3-OH,4=O;5-OH,4=O;邻邻二二酚酚羟羟基基，常常可可与与铝铝盐盐、铅铅盐盐、锆锆盐盐、镁盐等试剂镁盐等试剂生成有色络合物生成有色络合物。1.1.铝盐铝盐 1%AlCl3或或 Al(NO3)3：生生 成成 络络 合合 物物 为为 黄黄 色色(max=415nm)，并有并有荧光，荧光，可做定性或定量分析可做定性或定量分析。(二二)络合反应络合反应392.2.铅盐铅盐1%PbAc1%PbAc2 2或碱式醋酸铅水液。生成或碱式醋酸铅水液。生成黄黄-红红色沉淀。色沉淀。醋醋酸酸铅铅可可沉沉淀淀具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基或或兼兼有有3-OH,3-OH,4=O4=O或或5-OH,4=O5-OH,4=O者。者。碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。403.3.锆盐锆盐:2%:2%二氯氧化锆甲醇溶液二氯氧化锆甲醇溶液414.4.镁盐镁盐 醋醋酸酸镁镁甲甲醇醇液液作作显显色色剂剂，可可在在纸纸上上进进行行。二二氢氢黄黄酮酮（醇醇）类类显显天天蓝蓝色色荧荧光光，若若具具有有C5-OHC5-OH，色色泽泽更更明明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄黄-橙黄橙黄-褐色褐色。5.5.氯化锶氯化锶(SrCl(SrCl2 2)使使具具有有邻邻二二酚酚羟羟基基的的黄黄酮酮显显绿绿-棕棕色色-黑黑色色沉沉淀淀。6.6.氯化铁氯化铁(FeCl(FeCl3 3)：检查酚羟基。检查酚羟基。多多数数黄黄酮酮类类化化合合物物具具有有酚酚羟羟基基，可可产产生生正正反反应应，生成生成绿绿、蓝蓝、黑、黑、紫紫等颜色。等颜色。42 (三三)硼酸显色反应硼酸显色反应 条件：条件：1.1.具有下列结构（具有下列结构（5-5-羟基黄酮，羟基黄酮，2-2-羟基查耳酮）羟基查耳酮）2.2.有无机酸或有机酸存在有无机酸或有机酸存在 在草酸存在下，显在草酸存在下，显黄色黄色并带并带绿色荧光绿色荧光。在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。43日日光光及及紫紫外外光光下下，通通过过纸纸斑斑反反应应，观观察察样样品品用用碱碱性试剂处理后的色变情况。性试剂处理后的色变情况。1.1.二二氢氢黄黄酮酮类类易易在在碱碱液液中中开开环环，转转变变成成相相应应异异构体构体查耳酮类化合物，显查耳酮类化合物，显橙橙-黄黄色。色。2.2.黄黄酮酮醇醇类类在在碱碱液液中中先先呈呈黄黄色色，通通入入空空气气后后变变为棕色，据此可与黄酮类区别。为棕色，据此可与黄酮类区别。3.3.黄黄酮酮类类化化合合物物当当分分子子中中有有邻邻二二酚酚羟羟基基取取代代或或 3,4-3,4-二二羟羟基基取取代代时时，在在碱碱液液中中不不稳稳定定，很很快快氧氧化化，生成生成黄色黄色深红色深红色绿棕色绿棕色沉淀。沉淀。(四四)碱性试剂显色反应碱性试剂显色反应44五、五、Wessely-MoserWessely-Moser重排重排黄酮类6-C-糖苷及8-C-糖苷在常规酸水解条件下不能被水解，但可发生互变（Wessely-Moser重排反应），成为两者的混合物。45第三节第三节 黄酮类化合物的提取分离黄酮类化合物的提取分离一、提取一、提取 黄黄酮酮类类化化合合物物在在花花、液液、果果等等组组织织中中，多多以以苷苷的形式存在；的形式存在；在木部坚硬组织中，多以游离在木部坚硬组织中，多以游离苷元苷元形式存在；形式存在；根根据据化化合合物物极极性性不不同同，溶溶解解性性不不同同，采采用用不不同同溶剂提取。溶剂提取。461.1.苷元苷元 多用多用CHClCHCl3 3、EtEt2 2O O、EtOAcEtOAc等极性较小溶剂提取；等极性较小溶剂提取；对于多对于多OCHOCH3 3化的成分，用苯、石油醚提取；化的成分，用苯、石油醚提取；对对于于极极性性大大的的成成分分，如如查查耳耳酮酮、橙橙酮酮、双双黄黄酮酮、羟羟基基黄黄酮酮等，用等，用EtOAcEtOAc、EtOHEtOH、MeMe2 2COCO、MeOHMeOH-H H2 2O(1O(1:1)1)等溶剂提取。等溶剂提取。2.2.苷类苷类 水水或或热热水水提提取取，（多多糖糖苷苷在在热热水水中中溶溶解解度度较较大大，在在冷冷水水中中溶解度较小）；溶解度较小）；也可用也可用EtOHEtOH、MeOHMeOH、EtOAcEtOAc提取。提取。3.3.含羟基的苷或苷元：含羟基的苷或苷元：可用可用碱水碱水提取。提取。4.4.花青素类：花青素类：可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则应避免。可加入少量酸，但一般黄酮类化合物则应避免。47提取提取粗提物的精制处理粗提物的精制处理1 1溶剂萃取法溶剂萃取法去杂质去杂质 石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水水溶溶醇醇沉沉：除除去去蛋蛋白白质质、多多糖糖、大大分分子子水水溶溶性性物质物质 逆流分配：水逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇乙酸乙酯，正丁醇-石油醚石油醚 在在萃萃取取除除杂杂的的同同时时，可可使使不不同同极极性性或或极极性性相相差差较较大大者者分分离离，如如极极性性不不同同的的苷苷和和苷苷元元，极极性性苷苷元元和和非极性苷元。非极性苷元。2 2碱提酸沉法碱提酸沉法适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。注意事项：注意事项：酸碱度不宜过大酸碱度不宜过大 邻邻二二酚酚羟羟基基的的保保护护：碱碱性性条条件件下下，邻邻二二酚酚羟羟基基易被氧化，加硼砂保护易被氧化，加硼砂保护 石石灰灰乳乳的的加加入入可可除除去去果果胶胶、粘粘液液等等水水溶溶性性酸酸性性杂质杂质493 3炭粉吸附法炭粉吸附法：适用于苷类的精制工作。：适用于苷类的精制工作。植植物物的的甲甲醇醇提提取取液液加加活活性性炭炭至至吸吸附附完完全全，过过滤滤得得吸吸附附苷苷的的活活性性炭炭粉粉末末。依依次次用用沸沸甲甲醇醇、沸沸水水、7%7%酚酚/水水、15%15%酚酚/醇醇洗洗脱脱，分分步步收收集集、检检查查、合合并。并。大大部部分分苷苷类类可可用用7%7%酚酚/水水洗洗下下，经经减减压压浓浓缩缩至至小小体体积积，乙乙醚醚除除酚酚，余余下下水水层层经经减减压压浓浓缩缩得得较较纯黄酮苷。纯黄酮苷。50二、分离二、分离1.1.柱色谱法柱色谱法 根根据据极极性性大大小小不不同同，利利用用吸吸附附或或分分配配原原理理进进行行分离。分离。常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。51柱色谱法柱色谱法硅胶层析硅胶层析酚羟基少的黄酮类，如异黄酮、二氢黄酮、高度酚羟基少的黄酮类，如异黄酮、二氢黄酮、高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类。对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及其苷类，对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及其苷类，硅胶加水去活化使用。硅胶加水去活化使用。52柱色谱法柱色谱法聚酰胺层析聚酰胺层析 主主要要有有聚聚己己内内酰酰胺胺型型(Perlon)(Perlon)、六六次次甲甲基基二二胺胺已已二二酸酸盐盐(Nylon)(Nylon)型型、聚聚乙乙烯烯吡吡咯咯烷烷酮酮(Polyclar)(Polyclar)型型三三种。种。其其原原理理是是酰酰胺胺羰羰基基与与黄黄酮酮酚酚羟羟基基形形成成氢氢键键缔缔合合而而吸吸附附，吸吸附附能能力力与与酚酚羟羟基基多多少少、位位置置及及氢氢键键缔缔合合力力大小有关大小有关。各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：水水，甲甲醇醇，丙丙酮酮，氢氢氧氧化化钠钠水水溶溶液液，甲甲酰酰胺胺，二二甲基甲酰胺，脲素水溶液。甲基甲酰胺，脲素水溶液。53n黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：柱色谱法柱色谱法聚酰胺层析聚酰胺层析苷元相同，洗脱先后顺序一般为：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟羟基基位位置置的的影影响响：具具有有邻邻位位羟羟基基黄黄酮酮 具具有有对位（或间位）羟基黄酮对位（或间位）羟基黄酮不不同同类类型型的的黄黄酮酮类类化化合合物物，先先后后流流出出顺顺序序一一般般是：是：异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇分分子子中中芳芳香香核核、共共轭轭双双键键多多者者吸吸附附力力强强，故故查查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。54柱色谱法柱色谱法葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 主要用两种型号的凝胶主要用两种型号的凝胶 Sephadex-GSephadex-G型和型和Sephadex-LH20Sephadex-LH20型型 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小先洗脱。先洗脱。分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大先先洗脱。洗脱。总的洗脱顺序：糖多的苷总的洗脱顺序：糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元游离苷元（极性小（极性小大）大）常用洗脱剂：常用洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿 552.2.梯度梯度pHpH萃取法萃取法56第四节第四节黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定目前主要采用的方法有：目前主要采用的方法有：与标准品或与文献对照与标准品或与文献对照PC或或TLC得到的得到的Rf值值分分析析对对比比样样品品在在甲甲醇醇溶溶液液中中及及加加入入酸酸、碱碱或或金金属属盐类试剂后得到的盐类试剂后得到的UV光谱光谱1H-NMR13C-NMRMS第四节第四节 黄酮类化合物的检识与结构测定黄酮类化合物的检识与结构测定一、色谱法在黄酮类化合物鉴定中的应用一、色谱法在黄酮类化合物鉴定中的应用1.1.纸色谱（纸色谱（PCPC）分分离离各各种种天天然然黄黄酮酮化化合合物物及及苷苷类类的的混混合合物物。一一般般采采用用双双向向色谱法色谱法。2.2.硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱 分离鉴定分离鉴定弱极性弱极性黄酮类化合物。黄酮类化合物。3.3.聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 适适合合分分离离含含游游离离酚酚羟羟基基的的黄黄酮酮及及苷苷类类。展展开开剂剂需需要要较较强强的的极性。极性。58二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用二、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用可用于确定可用于确定黄酮母核类型黄酮母核类型及确定某些位置及确定某些位置是否含有羟基。是否含有羟基。一般程序：一般程序：测定样品在测定样品在甲醇中的甲醇中的UVUV谱谱以了解母核类型；以了解母核类型；在在甲甲醇醇溶溶液液中中分分别别加加入入各各种种诊诊断断试试剂剂后后测测UVUV谱谱和和可可见光谱以了解见光谱以了解3,5,7,3,43,5,7,3,4有无羟基及邻二酚羟基；有无羟基及邻二酚羟基；苷苷类类可可水水解解后后（或或先先甲甲基基化化再再水水解解），再再用用上上法法测测苷元的苷元的UVUV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。59（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带带I I在在300-400nm300-400nm区区间间，由由B B环环桂桂皮皮酰酰系系统统的的电电子跃迁所引起；子跃迁所引起；带带IIII在在220-280nm220-280nm区间，由区间，由A A环苯甲酰系统环苯甲酰系统的的电子跃迁所引起。电子跃迁所引起。根据带根据带I I、带、带IIII的峰位及形状（或强度），推的峰位及形状（或强度），推测黄酮类化合物结构类型。测黄酮类化合物结构类型。（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（教材（教材164164页表页表5-5-4 4）不不同同类类型型黄黄酮酮类类化化合合物物的的紫紫外外光光谱谱（二）加入诊断试剂后引起的位移及结（二）加入诊断试剂后引起的位移及结构测定构测定（见教材（见教材164164页表页表5-5-5 5）形成络合物的能力：形成络合物的能力：黄酮醇黄酮醇3-OH 3-OH 黄酮黄酮5-OH5-OH（二氢黄酮（二氢黄酮5-OH5-OH）邻二酚羟基邻二酚羟基 二氢黄酮醇二氢黄酮醇5-OH5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH5-OH在在酸性条件下不与酸性条件下不与AlClAlCl3 3络合络合；但不在酸性条件下，皆与但不在酸性条件下，皆与AlAl3+3+络合；络合；形成形成络合物越稳定，红移越多络合物越稳定，红移越多。AlCl3诊断试剂对紫外吸收的影响课堂练习课堂练习1.黄酮类化合物的基本碳架是()A.C6-C6-C3 B.C6-C6-C6 C.C6-C3-C6 D.C6-C3 E.C3-C6-C32.与2-羟基查耳酮互为异构体的是()A.二氢黄酮 B.花色素 C.黄酮醇 D.黄酮 E.异黄酮3.黄酮类化合物呈黄色时结构的特点是()A.具有助色团 B.具有色原酮 C.具有2-苯基色原酮和助色团 D.具有黄烷醇和助色团 E.具有色原酮和助色团4.水溶性最大的黄酮类化合物是()A.黄酮 B.花色素 C.二氢黄酮 D.查耳酮 E.异黄酮5.不属于平面型结构的黄酮类化合物是()A.黄酮醇 B.黄酮 C.花色素 D.查耳酮 E.二氢黄酮6.酸性最弱的黄酮类化合物是()A.5-羟基黄酮 B.7-羟基黄酮 C.4-羟基黄酮 D.3-羟基黄酮 E.6-羟基黄酮7.一般不发生盐酸-镁粉反应的是()A.二氢黄酮 B.二氢黄酮醇 C.黄酮醇 D.黄酮 E.异黄酮8.如某样品液不加镁粉而仅加盐酸显红色，则该样品中含有()A.二氢黄酮醇 B.花色素 C.二氢黄酮 D.黄酮 E.异黄酮9.在聚酰胺柱上洗脱能力最弱的溶剂是()A.水 B.30%甲醇 C.70%甲醇 D.尿素水溶液 E.氢氧化钠10.从槐米中提取芦丁时，常用碱溶酸沉法，加石灰乳调pH应调至()A.pH 6-7 B.pH 7-8 C.pH 8-9 D.pH l0-12 E.pH 12以上课后作业课后作业：指出下列化合物属于何种黄酮类型？：指出下列化合物属于何种黄酮类型？洗脱剂一定时，下列化合物在不同层析中洗脱顺序如何？洗脱剂一定时，下列化合物在不同层析中洗脱顺序如何？（1）硅胶柱（CHCl3：MeOH 9：1洗脱）（2）聚酰胺柱（用乙醇洗脱）（3）葡聚糖凝胶柱（用甲醇洗脱）谢谢大家！结结 语语