BJS201712食用油脂中脂肪酸的综合检测法.doc

1附件 3食用油脂中脂肪酸的综合检测法BJS 2017121 范围本方法适用于食用植物油（花生油、大豆油、玉米油、植物调和油、橄榄油、葵花籽油、芥花油、菜籽油、香油、棕榈油等）是否存在异常的检测及识别。2 方法原理将样品甲酯化，采用气相色谱-串联质谱内标法定量测定13种脂肪酸甲酯含量，再根据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，对异常样品进一步排查确认。3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.3 无水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯。3.1.4 氢氧化钠（NaOH）：分析纯。3.1.5 三氟化硼甲醇溶液：50%。3.2 溶液配制3.2.1 含2%氢氧化钠的甲醇溶液：准确称取2 g氢氧化钠（3.1.4）于烧杯中，加入甲醇（3.1.2），超声至氢氧化钠完全溶解，移入100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。3.2.2 15%的三氟化硼甲醇溶液：取 50%三氟化硼甲醇溶液（3.1.5）30 mL，缓慢加入到装有 70 mL 甲醇（3.1.2）的烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。3.3 标准物质3.3.1 十一碳酸甘油三酯（C36 H68O6，CAS：13552-80-2）标准品，纯度>98%。3.3.2 十一碳酸甲酯（C12H24O2，CAS：1731-86-8）标准品，纯度>99%。3.3.3 37 种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品，各组分浓度参考附录 A。3.4 标准溶液配制3.4.1 十一碳酸甘油三酯内标溶液（1000 mg/L）称取 0.10 g（精确至 0.0001 g）十一碳酸甘油三酯，加入 50 mL 甲醇溶解，移入 100 mL 容量瓶中，以甲醇定容，制成储备液。储备液于-20 可冷藏保存三个月。使用时以甲醇稀释成 50 mg/L 的中间液，现用现配。3.4.2 十一碳酸甲酯内标溶液（1000 mg/L）称取 0.10 g（精确至 0.0001 g）十一碳酸甲酯，加入 50 mL 正己烷溶解，移入 100 mL 容量2瓶中，以正己烷定容，制成储备液。储备液于-20可冷藏保存三个月。使用时以正己烷稀释成50 mg/L 的中间液，现用现配。3.4.337 种脂肪酸甲酯标准溶液将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移至 10 mL 容量瓶中，用正己烷定容，于-20 冷藏可保存一周。根据需要稀释成适当浓度的含 5.00 mg/L 十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液，现用现配。4 仪器与设备4.1 气相色谱-质谱联用仪（GC/MS）。4.2 恒温水浴：（40 100 ）±1 。4.3 分析天平：感量 0.1 mg。4.4 涡旋振荡器。4.5 烘箱。5 分析步骤5.1 样品前处理称取样品 0.1 g（精确至 0.1 mg）于 250 mL 烧瓶中，加入 50 mg/L 十一碳酸甘油三酯内标1mL（相当于 50 g），加入含 2%氢氧化钠的甲醇溶液（3.2.1）8 mL，混合摇匀，连接回流冷凝器并在 80 水浴上回流，直至油滴消失；从回流冷凝器上端加入 15%三氟化硼甲醇溶液（3.2.2）7 mL，继续回流 2 min；用去离子水冲洗回流冷凝器，继续加热 1 min；从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温，准确加入 10 mL 正己烷，振摇 2 min，吸取上层正己烷相，使其通过无水硫酸钠吸水后，过 0.22 m 的有机相滤膜，待 GC/MS 检测。5.2 仪器条件a.色谱柱：毛细管色谱柱（DB-23，60 m×0.25 mm×0.25 m），或性能相当者。b.载气：高纯氦气。c.载气流量：1.0 mL/min。d.进样口温度：270。e.程序升温：初始温度 60 持续 3.0 min；60 160 ，升温速率 15 /min；保持 0 min；160 210 ，升温速率 8 /min；保持 0 min；210 230 ，升温速率 3.15 /min；保持 10 min。f.进样方式：分流进样，分流比 51。g.进样体积：1.0 L。h.离子源：EI，70 eV。i.离子源温度：230 。j.四极杆温度：150 。k.接口温度：270 。l.定量分析为选择离子扫描（SIM），14 种脂肪酸甲酯的保留时间、定性及定量离子见表 1。3表 1 14 种脂肪酸甲酯的保留时间、定性离子和定量离子序号脂肪酸甲酯定量离子(m/z)定性离子(m/z)保留时间(min)1C6:07487、99、59 8.342C8:07487、127、59 10.443C10:07487、143 12.234C11:0（内标）7487、200、143 13.085C12:07487、143、183 13.946C13:07487、143、185 14.797C14:07487、143、199 15.668C14:1n57487、166、208 16.069C15:07487、143、213 16.5310C16:1n77487、194、236 17.8111C17:07487、143、284 18.4212C18:2n6t6781、95、294 20.0313C20:3n67967、95 20.7914C20:4n67991、67、105 23.625.3 结果计算按下式（1）计算样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计）：(1)mVcX式中：X样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计），单位为毫克每千克（mg/kg）c样品溶液中脂肪酸甲酯的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）V样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）m样品称取的质量，单位为克（g）计算结果保留三位有效数字。6 结果判定依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，判定异常时提示油脂中可能存在反复高温处理并经高度精炼获得的异常油脂。判定依据见表2。表2 依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否异常4化合物判定依据（mg/kg）C6:0x>30，油脂可能存在异常，若确认不是棕榈油(1)，可判定为异常油脂样品 C8:0x>120，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(4)，且确认不是葵花籽油(1)，可判定为异常油脂样品 C10:0x>100，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，且确认不是芥花油和菜籽油(1)，可判定为异常油脂样品 C12:0400>x>130，油脂可能存在异常，若排除棕榈油和菜籽油干扰(2)，且确认不是芥花油和香油(1)，可判定为异常油脂样品 x>400，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品C13:0x>10，可判定为异常油脂样品C14:0x>1200，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品 C14:1n5 x>10，可判定为异常油脂样品C15:0600>x>240，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，且确认不是芥花油和菜籽油(1)，可判定为异常油脂样品 x>600，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品C16:1n7x>2000， 油脂可能存在异常，若排除芥花油、菜籽油、橄榄油和棕榈油干扰(12)，可判定为异常油脂样品C17:0x>1800，油脂可能存在异常， 若排除橄榄油干扰(1)，可判定为异常油脂样品 C18:2n6tx>800，可判定为异常油脂样品C20:3n6450>x>220，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰(2)，可判定为异常油脂样品x>450，可判定为异常油脂样品C20:4n6120>x>36，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰(2)，可判定为异常油脂样品 x>120，可判定为异常油脂样品注：(1) 确认不是干扰油的方法：采用气相色谱法测定样品中 37 种脂肪酸含量，根据 37 种脂肪酸含量分布结合附录 C 进行确认，检测方法参考 GB 5009.168-2016。(2) 排除棕榈油、菜籽油干扰的方法：参考表 3。表 3 排除干扰油的方法化合物 方法说明（mg/kg）C8:0x>(样品中肉豆蔻酸 C14:0的含量×0.04)，可排除棕榈油干扰C10:0x>(样品中肉豆蔻酸 C14:0的含量×0.072)，可排除棕榈油干扰 C12:0x>(样品中肉豆蔻酸 C14:0的含量×1.00)，可排除棕榈油干扰 x>(样品中芥酸 C22:1n9的含量×0.08)，可排除菜籽油干扰 5C15:0x>(样品中肉豆蔻酸 C14:0的含量×0.12)，可排除棕榈油干扰C20:3n6x>(样品中芥酸 C22:1n9的含量×0.15)，可排除菜籽油干扰 C20:4n6x>(样品中芥酸 C22:1n9的含量×0.04)，可排除菜籽油干扰 C14:0/C12:0比值x>20，可排除棕榈油干扰7 质量控制7.1 方法空白以十一碳酸甘油三酯为空白，进行脂肪酸过程空白对照。7.2 质控样品7.2.1 以正常食用植物油（纯大豆油、菜籽油、花生油）做对照，每批样品处理过程均以这三种作为阴性对照。7.2.2 以已确定为“异常油脂”的样品作阳性对照，同时以不同稀释度进行对照。7.3 质谱仪的质量数校正采用仪器自动调谐PFTBA进行质量数校正。6附录 A 脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度表表 A 脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度序号序号组分中文名称组分中文名称组分英文名称组分英文名称CAS No.简称简称纯度纯度浓度浓度/(mg/mL)1丁酸甲酯Methyl butyrate623-42-7C4:099.90.402 2己酸甲酯Methyl hexanoate106-70-7C6:099.70.399 3辛酸甲酯Methyl octanoate111-11-5C8:099.90.399 4癸酸甲酯Methyl decanoate ( caprate )110-42-9C10:099.90.399 5十一碳酸甲酯Methyl undecanoate1731-86-8C11:099.50.199 6十二碳酸甲酯Methyl laurate111-82-0C12:099.80.398 7十三碳酸甲酯Methyl tridecanoate1731-88-0C13:099.40.199 8十四碳酸甲酯Methyl myristate124-10-7C14:099.70.400 9顺-9-十四碳一烯酸甲酯Myristoleic acid methyl ester56219-06-8C14:1n599.9 0.202 10十五酸甲酯Methyl pentadecanoate7132-64-1C15:099.60.200 711顺-10-十五烯酸甲酯Cis-10-pentadecenoic acid methyl ester90176-52-6C15:1n599.0 0.197 12十六碳酸甲酯Methyl palmitate112-39-0C16:099.90.598 13顺-9-十六碳一烯酸甲酯Methyl palmitoleate1120-25-8C16:1n799.70.199 14十七碳酸甲酯Methyl heptadecanoate1731-92-6C17:099.90.201 15顺-10-十一烯酸甲酯Cis-10-heptadecenoic acid methyl ester75190-82-8C17:1n799.90.200 16十八碳酸甲酯Methyl stearate112-61-8C18:099.90.399 17反-9-十八碳一烯酸甲酯Trans-9-elaidic methyl ester1937-62-8C18:1n9t96.90.194 18顺-9-十八碳一烯酸甲酯Cis-9-oleic methyl ester112-62-9C18:1n9c99.90.399 19反，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯Linolelaidic acid methyl ester2566-97-4C18:2n6t99.90.200 20顺，顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯Methyl linoleate112-63-0C18:2n6c99.90.200 21二十碳酸甲酯Methyl arachidate1120-28-1C20:099.90.401 22顺，顺，顺-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯GAMMA-linolenic acid methyl ester16326-32-2C18:3n699.50.198 23顺-11-二十碳一烯酸甲酯Methyl eicosenoate2390-09-2C20:1n999.90.201 24顺，顺，顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯Alpha-Methyl linolenate301-00-8C18:3n399.60.200 825二十一碳酸甲酯Methyl heneicosanoate6064-90-0C21:099.50.201 26顺，顺-11,14-花生二烯酸甲酯Cis-11,14-eicosadienoic acid methyl ester2463-02-7C20:2n699.90.199 27二十二碳酸甲酯Methyl behenate929-77-1C22:099.80.398 28顺，顺，顺8,11,14花生三烯酸甲酯Cis-8,11,14-eicosatrienoic acid methyl ester21061-10-9C20:3n699.10.197 29顺-13-二十二碳一烯酸甲酯Methyl erucate (cis-13-docosenoic acid methyl ester)1120-34-9C22:1n999.70.199 30顺-11,14,17-花生三烯酸甲酯Cis-11,14,17-eicosatrienoic acid methyl ester55682-88-7C20:3n399.20.198 31顺-5,8,11,14-花生四烯酸甲酯Methyl cis-5,8,11,14-eicosatet2566-89-4C20:4n699.30.200 32二十三碳酸甲酯Methyl tricosanoate2433-97-8C23:099.90.201 33顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯Cis-13,16-docosadienoic acid methyl ester61012-47-3C22:2n699.90.200 34二十四碳酸甲酯Methyl lignocerate2442-49-1C24:099.80.399 35顺-5,8,11,14,17-花生五烯酸甲酯Methyl cis-5,8,11,14,17-eicosatet2734-47-6C20:5n399.90.199 36顺-15-二十四一烯酸甲酯Methyl nervonate2733-88-2C24:1n999.90.200 37顺-4,7,10,13,16,19 -二十二碳六烯酸甲酯 cis-4,7,10,13,16,19-Docosahexaenoic acid methyl ester2566-90-7C22:6n399.70.198 9附录 B各类典型食用植物油及“异常油脂”参考谱图图 B.1 37 种脂肪酸甲酯标准物质 SIM 图10图 B.2 典型菜籽油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.3 典型大豆油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.4 典型花生油中脂肪酸甲酯 SIM 图11图 B.5 典型玉米油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.6 典型棕榈油中脂肪酸甲酯 SIM 图图 B.7 典型植物调和油中脂肪酸甲酯 SIM 图12图 B.8 典型“异常油脂”中脂肪酸甲酯 SIM 图13附录 C棕榈油、菜籽油、芥花油、葵花籽油 37 种脂肪酸含量分布图 C.1 实验室普查 6 个棕榈油样本结果14图 C.2 实验室普查 7 个菜籽油样本结果15图 C.3 实验室普查 12 个葵花籽油样本结果16图 C.4 实验室普查 8 个芥花油样本结果17本方法负责起草单位：中国检验检疫科学研究院、浙江九安检测科技有限公司本方法参与验证单位：中国食品药品检定研究院主要起草人：仲维科、李礼、许秀丽、张峰、任荷玲、黄传峰