基层培训免疫学技术 (2)讲稿.ppt

基层培训免疫学技术第一页，讲稿共一百页哦临临床床免免疫疫检检验验是是运运用用免免疫疫学学基基本本的的基基本本原原理理和和技技术术，检检查查临临床床标标本本中中的的微微生生物物抗抗原原、肿肿瘤瘤抗抗原原以以及及相相应应的的微微生生物物抗抗体体、自自身身抗抗体体，为为感感染染性性性性疾疾病病、肿肿瘤瘤、自自身身免免疫疫病病以及免疫缺陷提供诊断依据。以及免疫缺陷提供诊断依据。第二页，讲稿共一百页哦免免疫疫检检验验分分为为两两个个部部分分，一一部部分分为为利利用用免免疫疫检检测测原原理理检检测测免免疫疫活活性性细细胞胞、抗抗原原、抗抗体体、补补体体、细细胞胞因因子子、细细胞胞粘粘附附分分子子等等免免疫疫相相关关物物质质，另另一一部部分分是是利利用用免免疫疫检检测测原原理理检检测测体体液液中中微微量量物物质质如如激激素素、酶酶、血血浆浆微微量量蛋蛋白白、血血液液药药物物浓浓度度、微微量量元元素素等等。这这些些检检测测结结果果为为临临床床上上确确定定诊诊断断、分分析析病病情情、调调整整治治疗疗方方案案和和判判断断预预后后等等提提供供了了有有效效的的实实验依据。验依据。第三页，讲稿共一百页哦第一节第一节免疫学检验原理、特点和方法免疫学检验原理、特点和方法第四页，讲稿共一百页哦一、免疫学检验原理一、免疫学检验原理（一一）抗抗原原抗抗体体反反应应是是抗抗原原与与相相应应抗抗体体之之间间的的特特异异性性结结合合反反应应。它它既既可可发发生生在在体体内内，也也可可发发生生在在体体外外。在在体体内内发发生生的的抗抗原原抗抗体体反反应应即即为为体体液液免免疫疫应应答答的的效效应应作作用用。体体外外的的抗抗原原抗抗体体结结合合反反应应，根根据据参参与与反反应应的的抗抗原原的的物物理理性性状状（可可溶溶性性或或颗颗粒粒性性）以以及及参参与与反反应应的的条条件件（电电解解质质、补补体体等等）不不同同，表表现现出出不不同同的的现现象象，如如沉沉淀淀、凝凝集集、细细胞胞溶溶解解、补补体体结结合合和和毒毒素素中中和和等等。一一般般将将检检查查血血清清中中病病原原微生物抗原和抗体的试验称为血清学试验。微生物抗原和抗体的试验称为血清学试验。第五页，讲稿共一百页哦抗抗原原抗抗体体反反应应可可分分为为两两个个阶阶段段。第第一一阶阶段段为为特特异异性性结结合合阶阶段段，此此阶阶段段仅仅需需数数秒秒至至数数分分钟钟，但但并并不不出出现现可可见见的的反反应应；第第二二阶阶段段为为可可见见反反应应阶阶段段，这这一一阶阶段段抗抗原原抗抗体体复复合合物物在在适适当当的的电电解解质质、pH、温温度度和和补补体体等等的的影影响响下下，进进一一步步交交联联聚聚集集，出出现现凝凝集集、沉沉淀淀、溶溶解解和和补补体体结结合合介介导导的的生生物物现现象象等等肉肉眼眼可可见见的的反反应应。第第二二阶阶段段反反应应较较慢慢，往往往往需需要要数数分分钟钟至至数数小小时时。这这两两个个阶段不能严格划分，所需的时间也受多种因素的影响。阶段不能严格划分，所需的时间也受多种因素的影响。第六页，讲稿共一百页哦（二）抗原抗体反应的特点：（二）抗原抗体反应的特点：1、特异性、特异性抗抗原原抗抗体体反反应应的的特特异异性性（specificity）是是指指抗抗原原分分子子上上的的抗抗原原决决定定簇簇和和抗抗体体分分子子超超变变区区结结合合的的特特异异性性，由由这这两两个个分分子子之之间间空空间间结结构构的的互互补补性性决决定定的的。形形同同钥钥匙匙与与锁锁一一样样，所所以以抗抗原原抗抗体体的的结结合合是是有有高高度度特特异异性性的的。例例如如白白喉喉抗抗抗抗毒毒素素只只能能与与相相应应的的外外毒毒素素结结合合，而而不不能能与与破破伤伤风风外外毒毒素素结结合合。因因此此，在在抗抗原原抗抗体体反反应应的的免免疫疫学学实实验验中中，可可以以用用已已知知的的抗抗原原或或抗抗体体来来检测特定的相对应的抗体或抗原。检测特定的相对应的抗体或抗原。第七页，讲稿共一百页哦2、比例性、比例性比比例例性性（proportionality）是是指指抗抗原原与与抗抗体体特特异异性性结结合合反反应应时时，生生成成肉肉眼眼可可见见结结合合物物的的量量与与反反应应物物浓浓度度的的关关系系，只只有有当当二二者者浓浓度度比比例例适适当当时时，才才出出现现可可见见反反应应。抗抗原原抗抗体体分分子子比比例例合合适适的的范范围围，称称为为抗抗原原抗抗体体反反应应的的等等价价带带。在在此此范范围围抗抗原原抗抗体体结结合合充充分分，沉淀物形成得快而多。沉淀物形成得快而多。第八页，讲稿共一百页哦在在等等价价带带的的前前后后，由由于于抗抗体体和和抗抗原原的的过过量量，上上清清液液中中可可测测出出游游离离的的抗抗体体或或抗抗原原，形形成成的的沉沉淀淀物物少少。当当抗抗体体过过量量时时，称称为为前前带带，抗抗原原过过量量时时称称为为后后带带。因因此此，在在抗抗原原抗抗体体反反应应的的试试验验中中，如如果果没没有有产产生生肉肉眼眼可可见见的的抗抗原原抗抗体体复复合合物物出出现现，一一方方面面要要考考虑虑是是否否有有抗抗原原与与相相应应的的抗抗体体存存在在，另另一一方方面面还还必必须须注注意意到到两两者反应的比例是否适当。者反应的比例是否适当。第九页，讲稿共一百页哦3、可逆性、可逆性抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合成成复复合合物物后后，在在一一定定条条件件下下又又可可解解离离为为游游离离抗抗原原与与抗抗体体的的特特性性称称为为抗抗原原抗抗体体结结合合的的可可逆逆性性（reversibility）。由由于于抗抗原原抗抗体体的的结结合合是是分分子子表表面面的的非非共共价价键键结结合合，故故形形成成的的复复合合物物是是不不牢牢固固的的，在在一一定定的的条条件件下下可可以以解解离离，所所以以说说抗抗原原抗抗体体结结合合形形成成抗抗原抗体复合物的过程是一动态平衡过程。原抗体复合物的过程是一动态平衡过程。第十页，讲稿共一百页哦抗抗原原抗抗体体复复合合物物解解离离取取决决于于两两方方面面的的因因素素：一一是是抗抗体体对对相相应应抗抗原原的的亲亲和和力力；二二是是环环境境因因素素对对复复合合物物的的影影响响。亲亲和和力力高高的的抗抗体体与与抗抗原原表表位位在在空空间间构构型型上上非非常常适适合合，两两者者结结合合牢牢固固，不不容容易易解解离离，反反之之，亲亲和和力力低低的的抗抗体体与与抗抗原原形形成成的的复复合合物物较较易易解解离离。环环境境因因素素中中的的过过高高或或过过低低均均可可破破坏坏离离子子间间的的静静电电引引力力，使使抗抗原原抗抗体体的的结结合合力力下下降降。增增加加离离子子强强度度，也也可可使使静静电电引引力力消消失失，降降低低抗抗原原抗抗体体的的结结合合力力，促促使使其其解解离离。解解离离后后的的抗抗原原和和抗抗体体仍仍然然保保持持游游离离抗抗原原、抗抗体体的的生生物物活性。活性。第十一页，讲稿共一百页哦（三）影响抗原抗体反应的因素（三）影响抗原抗体反应的因素影影响响抗抗原原抗抗体体反反应应的的因因素素较较多多，主主要要有有两两方方面面：一一是是反反应应物物自自身身的的因因素素，另另一一方方面面是是反应环境的因素。反应环境的因素。第十二页，讲稿共一百页哦1、反应物自身因素、反应物自身因素（1）抗原）抗原抗抗原原的的理理化化性性状状、表表面面抗抗原原决决定定簇簇的的种种类类和和数数目目均均可可影影响响抗抗原原抗抗体体反反应应的的结结果果。如如颗颗粒粒性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合后后产产生生凝凝集集现现象象；可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合后后产产生生沉沉淀淀现现象象；单单价价抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合后后不出现沉淀现象。不出现沉淀现象。第十三页，讲稿共一百页哦（2）抗体）抗体来来源源来来源源于于不不同同动动物物的的免免疫疫血血清清，其其反反应应性性有有差差异异。家家兔兔等等大大多多数数动动物物的的免免疫疫血血清清，由由于于具具有有较较宽宽的的等等价价带带，与与相相应应抗抗原原结结合合易易出出现现可可见见的的抗抗原原抗抗体体复复合合物物。马马、人人的的免免疫疫血血清清等等价价带带窄窄，抗抗原原不不足足或或过过剩剩，均均易易形形成成可可溶溶性性复复合合物物。单单克克隆隆抗抗体体一一般般不不适适合合用用于于凝集和沉淀反应。凝集和沉淀反应。第十四页，讲稿共一百页哦浓浓度度抗抗体体的的浓浓度度往往往往是是与与抗抗原原相相对对而而言言，二二者者合合适适的浓度才易出现可见的反应结果。的浓度才易出现可见的反应结果。特异性和亲和力特异性和亲和力特异性与亲和力是影响抗原抗特异性与亲和力是影响抗原抗体反应的关键因素，它们共同影响试验结果的准确体反应的关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。诊断试剂应尽可能选高特异性、高亲和力的程度。诊断试剂应尽可能选高特异性、高亲和力的抗体，才能提高试验的可靠性。抗体，才能提高试验的可靠性。第十五页，讲稿共一百页哦2、反应的环境条件、反应的环境条件（1）电解质）电解质抗抗原原抗抗体体结结合合后后，由由亲亲水水性性向向疏疏水水性性转转换换过过程程中中必必须须要要有有电电解解质质参参与与才才能能进进一一步步使使抗抗原原抗抗体体复复合合物物表表面面失失去去电电荷荷，破破坏坏水水化化层层，使使复复合合物物相相互互靠靠拢拢聚聚集集，形形成成大大块块凝凝集集、沉沉淀淀。若若无无电电解解质质存存在在，则则不不出出现现可可见见反反应应。在在抗抗原原抗抗体体反反应应中中，通通常常使使用用0.85%NaCl溶溶液液或或各各种种缓缓冲冲液液作作抗抗原原抗抗体体的稀释液及反应液。的稀释液及反应液。第十六页，讲稿共一百页哦（2）酸碱度）酸碱度抗抗原原抗抗体体反反应应必必须须在在合合适适的的pH环环境境中中进进行行，pH过过低低或或过过高高都都会会影影响响抗抗原原抗抗体体的的反反应应。抗抗原原抗抗体体反反应应中中一一般般以以pH69为为宜宜。有有补补体体参参与与的的反反应应pH为为7.27.4，超过这个范围会降低补体的酶活性而影响反应。，超过这个范围会降低补体的酶活性而影响反应。第十七页，讲稿共一百页哦（3）温度）温度抗抗原原抗抗体体反反应应需需要要合合适适的的温温度度才才有有利利于于二二者者结结合合。一一般般以以1540为为宜宜，最最适适温温度度为为37。在在此此范范围围内内，温温度度越越高高，抗抗原原抗抗体体分分子子运运动动越越快快，碰碰撞撞接接触触机机会会越越多多，两两者者结结合合反反应应速速度度越越快快。但但是是如如果果温温度度高高于于56，会会导导致致抗抗原原抗抗体体复复合合物物解解离离，甚甚至至分分子子变变性性。温温度度越越低低，反反应应速速度度越越缓缓慢慢，但但抗抗原原抗抗体结合越牢固，易于观察。体结合越牢固，易于观察。第十八页，讲稿共一百页哦（4）振荡）振荡在在抗抗原原抗抗体体反反应应中中，适适当当的的振振摇摇可可促促使使抗抗原抗体分子的接触，原抗体分子的接触，加速其反应加速其反应。第十九页，讲稿共一百页哦（四）抗原抗体反应的类型（四）抗原抗体反应的类型随随着着免免疫疫学学技技术术的的飞飞速速发发展展，在在原原有有经经典典免免疫疫学学实实验验方方法法基基础础上上，新新的的免免疫疫学学测测定定方方法法不不断断出出现现，使使免免疫疫学学实实验验技技术术更更特特异异、更更敏敏感感和和更更稳稳定定。目目前前根根据据抗抗原原和和抗抗体体的的性性质质不不同同，反反应应出出现现的的现现象象和和结结果果的的不不同同，以以及及反反应应时时参参与与的的其其他他条条件件不不同同，将将抗抗原原抗体反应分为五种类型。抗体反应分为五种类型。第二十页，讲稿共一百页哦（1）可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合产产生生的的沉沉淀淀反反应应；（2）颗颗粒粒抗抗原原与与相相应应抗抗体体结结合合发发生生的的凝凝集集反反应应；（3）抗抗原原抗抗体体结结合合后后激激活活补补体体所所产产生生的的溶溶细细胞胞反反应应；（4）细细菌菌外外毒毒素素或或病病毒毒与与相相应应抗抗体体结结合合所所致致的的中中和和反反应应；（5）标标记记免免疫疫的的抗抗原原抗抗体体反反应应。每每种种反反应应类类型型都都包包括括若若干干实实验验技技术术。（见见抗抗原原抗抗体体反列应表反列应表1）第二十一页，讲稿共一百页哦表表1抗原抗体反应的类型和试验方法抗原抗体反应的类型和试验方法-反应类型反应类型实验方法实验方法结果判断结果判断-沉淀反应沉淀反应液相沉淀实验液相沉淀实验观察沉淀、检测浊度观察沉淀、检测浊度琼脂凝胶扩散琼脂凝胶扩散观察和测定扫描沉淀线或环观察和测定扫描沉淀线或环凝胶电泳技术凝胶电泳技术观察和测定扫描沉淀峰弧等观察和测定扫描沉淀峰弧等凝集反应凝集反应直接凝集实验直接凝集实验 用裸眼、放大镜或显微镜观察红用裸眼、放大镜或显微镜观察红细胞或胶乳颗粒的凝集现象细胞或胶乳颗粒的凝集现象间接凝集实验间接凝集实验 同上同上凝集抑制实验凝集抑制实验同上同上协同凝集实验协同凝集实验同上同上抗球蛋白实验抗球蛋白实验同上同上-第二十二页，讲稿共一百页哦-补体参与反应补体参与反应 补体溶血实验补体溶血实验以裸眼或光电比色仪观察以裸眼或光电比色仪观察测定溶血现象测定溶血现象补体结合实验补体结合实验 同上同上中和反应中和反应病毒中和实验病毒中和实验 病毒感染性丧失病毒感染性丧失毒素中和实验毒素中和实验 外毒素毒性丢失外毒素毒性丢失标记免疫标记免疫荧光免疫技术荧光免疫技术检测荧光检测荧光放射免疫技术放射免疫技术 检测放射性检测放射性酶标免疫酶标免疫检测酶底物显色、发光、荧光检测酶底物显色、发光、荧光发光免疫技术发光免疫技术检测发光检测发光金标免疫技术金标免疫技术观察金颗沉淀线观察金颗沉淀线-第二十三页，讲稿共一百页哦二、免疫学检验方法和应用二、免疫学检验方法和应用（一）凝集反应（一）凝集反应颗颗粒粒性性抗抗原原或或可可溶溶性性抗抗原原（或或抗抗体体）与与载载体体颗颗粒粒结结合合成成致致敏敏颗颗粒粒后后，与与相相应应抗抗体体（或或抗抗原原）发发生生特特异异性性反反应应，在在适适当当电电解解质质存存在在下下，形形成成肉肉眼眼可可见见的的凝凝集集现现象象，称称为为凝凝集集反反应应。凝凝集集试试验验应应用用广广而而且且敏敏感感度度高高，方方法法简简便便，迄迄今今已已成成为为通通用用的的免免疫疫学学技技术术之之一一，广广泛泛用用于于细细菌菌的的鉴鉴定定和和分分型型、抗抗原原分分析析、测测定定抗抗体体和和诊诊断断疾疾病病等等临临床床检检验验。在在免免疫疫检检验验技技术术中中，根根据据参参与与反反应应的的颗颗粒粒的的不不同同，把把凝凝集集反反应应分分为为直直接接凝凝集集反反应应和和间间接接凝凝集集反反应应。而而自自身身红红细细胞胞凝凝集集反反应应试验和抗球蛋白参与的凝集试验是两种特殊的凝集反应。试验和抗球蛋白参与的凝集试验是两种特殊的凝集反应。第二十四页，讲稿共一百页哦1、直接凝集反应：、直接凝集反应：细细菌菌、螺螺旋旋体体和和红红细细胞胞等等颗颗粒粒性性抗抗原原，在在适适当当电电解解质质参参与与下下可可直直接接与与相相应应抗抗体体反反应应，当当二二者者比比例例适适当当时时，出出现现凝凝集集，称称为为直直接接凝凝集集反反应应。反反应应中中的的抗抗原原称称为为凝凝集集原原，参参与与反反应应的的抗抗体体称称为为凝凝集集素素。常常用用的的凝凝集集试试验验有有玻玻片片法法、试试管管法法和和微微量量血血凝凝反反应板法。应板法。第二十五页，讲稿共一百页哦（1）玻玻片片凝凝集集试试验验：多多用用于于定定性性。用用以以知知抗抗体体诊诊断断血血清清与与受受检检菌菌液液在在玻玻片片上上混混匀匀，放放置置数数分分钟钟后后如如抗抗体体与与相相应应抗抗原原反反应即出现肉眼可见的凝集反应。如沙门菌玻片凝集试验。应即出现肉眼可见的凝集反应。如沙门菌玻片凝集试验。（2）试试管管凝凝集集试试验验：多多用用于于半半定定量量和和定定量量试试验验，常常用用已已知知一一定定量量的的抗抗原原（细细菌菌、细细胞胞等等）与与一一系系列列稀稀释释的的病病人人血血清清混混合合，在在保保温温放放置置后后观观察察结结果果，判判定定受受检检血血清清有有无无相应抗体以及效价，如肥达反应。相应抗体以及效价，如肥达反应。第二十六页，讲稿共一百页哦2、间间接接凝凝集集反反应应：将将可可溶溶性性抗抗原原（或或抗抗体体）先先吸吸附附或或偶偶联联与与免免疫疫无无关关大大小小适适当当的的颗颗粒粒表表面面，使使之之成成为为致致敏敏载载体体颗颗粒粒，然然后后与与相相应应抗抗体体（或或抗抗原原）作作用用，在在适适宜宜的的电电解解质质存存在在条条件件下下，出出现现特特异异性性的的凝凝集集现现象象，称称为为间间接接凝凝集集反反应应。其其敏敏感感度度比比直直接接凝凝集集反反应应高高28倍倍，亦亦明明显显高高于于沉沉淀淀反反应应。在在临临床床上上广广泛泛用用于于各各种种抗抗体体和和可可溶溶性性抗抗原原的的检检测测。间接凝集反应试验可分为：间接凝集反应试验可分为：第二十七页，讲稿共一百页哦（1）间间接接凝凝集集试试验验：用用抗抗原原致致敏敏载载体体以以检检测测标标本本中中的的相相应应抗抗体体。将将可可溶溶性性抗抗原原与与载载体体颗颗粒粒结结合合，再再与与样样品品中中的的抗抗体体反反应应，形形成成肉肉眼眼可可见见的的凝凝集集颗颗粒粒或或凝集块者为阳性。凝集块者为阳性。第二十八页，讲稿共一百页哦（2）反反向向间间接接凝凝集集试试验验：用用已已知知特特异异性性抗抗体体致致敏敏载载体体以以检检测测标标本本中中的的相相应应抗抗原原。临临床床上上用用于于检测检测HbsAg、AFP等。等。第二十九页，讲稿共一百页哦（3）间接抑制试验：试剂为已知抗原致敏的颗粒）间接抑制试验：试剂为已知抗原致敏的颗粒载体和相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原载体和相应的抗体，用于检测标本中与致敏抗原相同的抗原。检测方法是将标本与抗体试剂混合相同的抗原。检测方法是将标本与抗体试剂混合反应，然后加入致敏载体，若出现凝集，说明标反应，然后加入致敏载体，若出现凝集，说明标本中不存在相应抗原，抗体试剂未被结合，仍与本中不存在相应抗原，抗体试剂未被结合，仍与载体上的抗原反应；如未出现凝集，则说明标本载体上的抗原反应；如未出现凝集，则说明标本中含有相应抗原，凝集反应被抑制。中含有相应抗原，凝集反应被抑制。第三十页，讲稿共一百页哦（4）协同凝集试验：其原理同反向间接凝集试验，）协同凝集试验：其原理同反向间接凝集试验，但所用的载体是金黄色葡萄球菌，其细胞壁中有但所用的载体是金黄色葡萄球菌，其细胞壁中有A蛋蛋白（白（SPA），），SPA具有能与特异性抗体具有能与特异性抗体IgG的的Fc段段结合的特性。当这种结合的特性。当这种葡萄球菌与葡萄球菌与IgG抗体连接时，就抗体连接时，就成为抗体致敏的颗粒载体，若与相应抗原接触，就会成为抗体致敏的颗粒载体，若与相应抗原接触，就会出现反向间接凝集反应，常用于细菌、病毒、毒素及出现反向间接凝集反应，常用于细菌、病毒、毒素及可溶性抗原的快速检测。可溶性抗原的快速检测。第三十一页，讲稿共一百页哦间间接接血血凝凝试试验验：是是以以红红细细胞胞作作为为载载体体的的间间接接凝凝集集试试验验。可可根根据据红红细细胞胞凝凝集集的的程程度度判判断断阳阳性性反反应应的的强强弱弱。在在临临床床检检测中应用广泛，是经典的抗原抗体反应之一。测中应用广泛，是经典的抗原抗体反应之一。胶胶乳乳凝凝集集试试验验：是是以以聚聚苯苯乙乙烯烯胶胶乳乳微微粒粒为为载载体体的的间间接接凝凝集集试试验。验。明明胶胶凝凝集集试试验验：即即以以明明胶胶颗颗粒粒为为载载体体的的间间接接凝凝集集试试验验。常常用用于血清中抗病毒抗体的检测。于血清中抗病毒抗体的检测。第三十二页，讲稿共一百页哦间接凝集试验的应用间接凝集试验的应用间间接接凝凝集集试试验验具具有有敏敏感感、快快速速、操操作作简简便便和和不不需需要要特特殊殊仪仪器器等等优优点点，既既可可以以检检测测抗抗原原，又又可可以以检检测测抗抗体体。已已广广泛泛应应用用于于医医学学检检验验。特特别别是是对对某某些些疾疾病病的的诊诊断断治治疗疗和和效效果果的的观观察察有有着着重重要要的参考价值。的参考价值。第三十三页，讲稿共一百页哦（1）抗抗体体的的检检测测用用于于检检测测微微生生物物、寄寄生生虫虫等等感感染染所所产产生生的的抗抗体体及及自自身身抗抗体体和和药药物物抗抗体体。如如检检测测沙沙门门菌菌抗抗体体和和类类风风湿湿因因子等。子等。（2）抗抗原原的的检检测测用用于于在在临临床床上上用用反反向向间间接接凝凝集集试试验验检检测测甲甲胎胎蛋蛋白白抗抗原原和和乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒流流行行病病学学调调查查。在在妇妇产产科科常常用用胶胶乳乳凝凝集集试试验验检检测测孕孕妇妇尿尿中中的的绒绒毛毛膜膜促促性性腺腺激激素素（HCG）抗抗原原。以诊断早期妊娠。以诊断早期妊娠。第三十四页，讲稿共一百页哦（二）沉淀反应（二）沉淀反应沉沉淀淀反反应应是是可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体在在适适当当的的条条件件下下发发生生特特异异性性结结合合而而产产生生沉沉淀淀的的现现象象。沉沉淀淀反反应应中中的的抗抗原原多多为为蛋蛋白白质质、多多糖糖等等可可溶溶性性物物质质。抗抗原原与与相相应应抗抗体体再再介介质质中中或或固固相相表表面面发发生生特特异异性性结结合合，可可分分为为两两个个阶阶段段，第第一一阶阶段段为为抗抗原原抗抗体体特特异异性性结结合合反反应应，在在几几秒秒或或几几十十秒秒内内就就可可完完成成，出出现现可可溶溶性性小小附附和和物物，十十分分快快速速，但但肉肉眼眼不不可可见见。在在免免疫疫比比浊浊法法中中可可以以测测定定免免疫疫复复合合物物形形成成的的速速率率，称称为为速速率率比比浊浊法法。第第二二阶阶段段则则形形成成大大的的可可见见的的免免疫疫复复合合物物，需需要要几几十十分分钟钟到到数数小小时时才才能能完完成成。如如沉沉淀淀线或沉淀环。沉淀反应的常用试验方法有：线或沉淀环。沉淀反应的常用试验方法有：第三十五页，讲稿共一百页哦1、液体内沉淀试验、液体内沉淀试验（1）絮絮状状沉沉淀淀试试验验：将将抗抗原原和和抗抗体体溶溶液液混混合合在在一一起起，在在电电解解质质存存在在下下，抗抗原原与与抗抗体体结结合合形形成成絮絮状状沉沉淀物。淀物。（2）免免疫疫浊浊度度测测定定：是是将将光光学学测测量量仪仪器器与与分分析析检检测测系系统统相相结结合合应应用用于于沉沉淀淀反反应应，对对各各种种液液体体介介质质中中的的微微量量抗抗原原、抗抗体体和和药药物物及及其其它它小小分分子子半半抗抗原原物物质质进进行行定定量量测定的方法。测定的方法。第三十六页，讲稿共一百页哦其其原原理理是是：当当可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体在在适适当当比比例例结结合合时时，在在特特殊殊缓缓冲冲液液中中快快速速形形成成一一定定大大小小的的抗抗原原抗抗体体复复合合物物，使使反反应应液液出出现现浊浊度度。采采用用透透射射比比浊浊或或散散射射比比浊浊的的方方法法，根根据据所所测测的的吸吸光光度度值值可可推推算算出出待待测测抗抗原原的的量量。免免疫疫浊浊度度测测定定又又可可分分为为速速率率比比浊浊法法和和终终点点比比浊浊法法。其其优优点点是是可可以以准准确确定定量量，校校正正曲曲线线比比较较稳稳定定，简简便便快快捷捷，无无污污染染，易易于于自自动动化化，也也适适合合于于大大批批量量标标本本的的检检测测，在临床检验中得到了广泛应用。在临床检验中得到了广泛应用。第三十七页，讲稿共一百页哦2、凝凝胶胶内内沉沉淀淀试试验验：利利用用可可溶溶性性抗抗原原与与相相应应抗抗体体在在凝凝胶胶中中扩扩散散，形形成成浓浓度度梯梯度度，在在抗抗原原抗抗体体浓浓度度比比例例适适当当的的位位置置形形成成肉肉眼眼可可见见的的沉沉淀淀线线或或沉沉淀淀环环。根根据据抗抗原原抗抗体体反反应应的的方方式式和和特特性性，发发展展为为以以下下几几种种实实验验技术：技术：（1）单单向向扩扩散散试试验验：在在琼琼脂脂凝凝胶胶中中混混入入一一定定量量的的抗抗体体，使使待待测测抗抗原原溶溶液液从从局局部部向向琼琼脂脂内内自自由由扩扩散散，在一定区域内形成可见的沉淀环。在一定区域内形成可见的沉淀环。第三十八页，讲稿共一百页哦（2）双双向向扩扩散散试试验验：在在琼琼脂脂内内抗抗原原和和抗抗体体各各自自向向对对方方扩扩散散，在在最最适适当当的的比比例例处处形形成成抗抗原原抗抗体体沉沉淀淀线线，观观察察沉沉淀淀线线的的位位置置、形形状状及及对对比比关关系系，可可作作抗抗原原和和抗抗体体的的定性分析。定性分析。（3）免免疫疫电电泳泳技技术术：是是将将琼琼脂脂内内电电泳泳与与免免疫疫扩扩散散相相结结合合的的一一种种常常用用的的一一种种免免疫疫学学实实验验方方法法。有有对对流流免免疫疫电电泳泳、火火箭箭电电泳泳、交交叉叉免免疫疫电电泳泳、免免疫疫电电泳、固相免疫电泳等实验技术。泳、固相免疫电泳等实验技术。第三十九页，讲稿共一百页哦（三）补体结合试验：（三）补体结合试验：是是经经典典途途径径的的抗抗原原抗抗体体反反应应之之一一，应应用用绵绵羊羊红红细细胞胞和和溶溶血血剂剂作作指指示示剂剂，建建立立了了检检测测抗抗原原抗抗体体与与补补体体结结合合的的方方法法，如如检检测测梅梅毒毒的的华华氏氏试试验验（现现已已被被淘淘汰汰）。凡凡是是能能激激活活补补体体的的IgG、IgM类类抗抗体体与与相相应应抗抗原原结结合合的的反反应应都都可可以以用用本本法法检检测测。目目前前主主要要用用于于病病毒毒性性传传染染病病诊诊断断、流流行行病病学学调调查查以以及及一一些些自自身身抗抗体体、肿肿瘤瘤相相关关抗原等的检测。抗原等的检测。第四十页，讲稿共一百页哦（四）免疫标记技术（四）免疫标记技术免免疫疫标标记记技技术术是是将将多多种种可可以以微微量量或或超超微微量量检检测测的的示示踪踪物物（如如荧荧光光素素、放放射射性性核核素素、酶酶、化化学学或或生生物物发发光光剂剂）对对抗抗原原或或抗抗体体进进行行标标记记，制制成成标标记记物物，加加入入抗抗原原抗抗体体反反应应体体系系中中与与相相应应未未标标记记抗抗体体或或抗抗原原进进行行反反应应，使使免免疫疫反反应应结结果果可可被被灵灵敏敏地地进进行行分分析析测测定定。可可以以不不测测定定免免疫疫复复合合物物本本身身，仅仅对对其其中中的的标标记记物物进进行行测测定定就就可可确确定定待待测测物物质质的的含含量量。因因此此，免免疫疫标标记记技技术术具具有有高高度度特特异异性性和和高高度度敏敏感感性性，由由于于它它具具有有重重复复性性好好、准准确确性性高高、操操作作简简便便、易易于于商商品品化化和和自自动动化化的的特特点点，现现已已发发展展成成为为生生物物活活性性物物质质分分析重要的方法之一。析重要的方法之一。第四十一页，讲稿共一百页哦1、放射免疫技术、放射免疫技术放放射射免免疫疫技技术术是是利利用用放放射射性性核核素素的的灵灵敏敏性性和和精精确确性性与与抗抗原原抗抗体体反反应应的的特特异异性性相相结结合合而而创创建建的的一一类类免免疫疫测测定定技技术术。常常用用的的放放射射性性核核素素有有125I和和131I等等，主主要要有有两两种种基基本本类类型型：（1）放放射射免免疫疫分分析析：是是最最经经典典的的模模式式，是是以以放放射射性性核核素素标标记记的的抗抗原原与与反反应应系系统统中中未未标标记记的的抗抗原原竞竞争争特特异异性性抗抗体体为为基基本本原原理理来来测测定定抗抗原原含含量量的的分分析析方方法法。（2）免免疫疫放放射射分分析析：是是用用放放射射性性核核素素标标记记的的过过量量抗抗体体方方法法。抗抗体体与与待待测测抗抗原原直直接接结结合合，采采用用固固相相免免疫疫吸吸附附载载体体分分离离结结合合与与游游离离标标记记抗体的非竞争放射免疫分析。抗体的非竞争放射免疫分析。第四十二页，讲稿共一百页哦放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强、放射免疫技术由于其测定的灵敏度高，特异性强、精密度好，而且可对抗原和半抗原进行测定，对精密度好，而且可对抗原和半抗原进行测定，对仪器设备条件要求不高，所以广泛应用于医学检仪器设备条件要求不高，所以广泛应用于医学检验。常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物验。常用于各种激素、微量蛋白质、肿瘤标志物和药物等微量物质的测定。其缺点是：放射性污和药物等微量物质的测定。其缺点是：放射性污染和危害；常用核素半衰期短，试剂盒稳定期短、染和危害；常用核素半衰期短，试剂盒稳定期短、不易快速及自动化检验等，已逐步被其它标记免不易快速及自动化检验等，已逐步被其它标记免疫分析方法所取代。疫分析方法所取代。第四十三页，讲稿共一百页哦2、荧光免疫技术、荧光免疫技术荧荧光光免免疫疫技技术术是是将将免免疫疫学学反反应应的的特特异异性性与与荧荧光光技技术术的的敏敏感感性性结结合合起起来来的的一一种种方方法法，是是最最早早发发展展的的一一种种免免疫疫标标记记技技术术。其其原原理理是是利利用用荧荧光光素素标标记记抗抗体体，使使之之在在涂涂片片上上或或组组织织切切片片上上与与标标本本的的待待测测抗抗原原特特异异性性地地结结合合，采采用用高高发发光光效效率率的的点点光光源源，透透过过滤滤光光板板发发出出一一定定波波长长的的光光，使使结结合合在在标标本本上上的的荧荧光光素素被被激激发发而而产产生生荧荧光光，然然后后借借助助荧荧光光显显微微镜镜观观察察底底物物片片上上的的荧荧光光染色形态，判断待测抗原或抗体。染色形态，判断待测抗原或抗体。第四十四页，讲稿共一百页哦荧光免疫技术在临床检验上常用作细菌、病毒和寄生荧光免疫技术在临床检验上常用作细菌、病毒和寄生虫的检验以及自身抗体的检测。免疫荧光间接染色法虫的检验以及自身抗体的检测。免疫荧光间接染色法可用于测定血清中的抗体，如免疫荧光用于梅毒螺旋可用于测定血清中的抗体，如免疫荧光用于梅毒螺旋体抗体的检测是梅毒特异性诊断方法之一。间接免疫体抗体的检测是梅毒特异性诊断方法之一。间接免疫荧光试验是当前公认的最有效的检测疟疾抗体的方法。荧光试验是当前公认的最有效的检测疟疾抗体的方法。第四十五页，讲稿共一百页哦3、酶免疫技术、酶免疫技术酶酶免免疫疫技技术术是是经经典典标标记记免免疫疫技技术术之之一一，是是以以酶酶标标记记抗抗体体或或抗抗原原为为主主要要试试剂剂的的一一种种标标记记免免疫疫分分析析技技术术。酶酶免免疫疫技技术术是是利利用用酶酶催催化化底底物物反反应应的的生生物物放放大大作作用用，提提高高特特异异性性抗抗原原-抗抗体体免免疫疫学学反反应应检检测测敏敏感感性性的的一一种种标标记记免免疫疫技技术术。临临床床常用的酶免疫技术是酶联免疫吸附试验（见第三章第常用的酶免疫技术是酶联免疫吸附试验（见第三章第3节）节）第四十六页，讲稿共一百页哦酶酶免免疫疫测测定定除除具具有有高高度度的的敏敏感感性性和和特特异异性性，酶酶标标记记试试剂剂比比较较稳稳定定，而而且且易易与与其其他他相相关关技技术术偶偶联联，因因此此发发展展迅迅速速。市市场场上上各各种种符符合合质质量量要要求求的的商商品品试试剂剂盒盒（提提供供有有包包被被好好的的的的固固相相载载体体、酶酶标标记记物物及及其其底底物物和和洗洗涤涤液液等等全全套套试试剂剂成成分分）和和自自动动或或半半自自动动检检测测仪仪上上不不断断研研究究发发明明问问世世，极极大大地地促促进进了了酶酶免免疫疫测测定定技技术术的的普普及及。特特别别是是固固相相载载体体酶酶免免疫疫技技术术与与胶胶体体金金技技术术等等的的结结合合，使使市市场场上上出出现现了了一一大大批批适适用用于于家家庭庭及及床床旁旁检检测测的的快快速速试试剂剂盒盒，大大大大方方便便了了人人群群的的自自我我保保健健和和临临床床的的快快速速诊诊断断。ELISA则则应应用用更更为为广泛，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。广泛，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。第四十七页，讲稿共一百页哦该该技技术术的的检检测测灵灵敏敏度度高高、特特异异性性强强、准准确确性性好好，酶酶标标记记试试剂剂能能够够较较长长时时间间保保持持稳稳定定，检检测测方方法法简简便便安安全全易易行行，而而且且容容易易与与其其他他技技术术偶偶联联衍衍生生出出适适用用范范围围更更广广的的新新方方法法等等。因因此此，酶酶免免疫疫技技术术在在方方法法学学上上的的研研究究重重点点除除与与其其他他标标记记免免疫疫技技术术一一样样需需制制备备高高纯纯度度抗抗原原和和高高亲亲和和力力的的特特异异性性抗抗体体外外，还还包包括括：选选择择高高活活性性的的纯纯化化标标记记用用酶酶；试试验验有有效效的的交交联联试试剂剂和和交交联联反反应应，制制备备高高质质量量的的酶酶标标记记物物；选选用用适适宜宜的的酶酶作作用用底底物物系系统统；确确定定有有效效的的分分离离结结合合/游游离离反反应应物物的的方方法法；筛筛选操作步骤以及研究自动化测定技术等。选操作步骤以及研究自动化测定技术等。第四十八页，讲稿共一百页哦4、金金标标免免疫疫技技术术是是以以胶胶体体金金为为标标记记物物的的免免疫标记技术。（见第三章第疫标记技术。（见第三章第4节）节）第四十九页，讲稿共一百页哦第二节第二节免疫胶乳试验及应用免疫胶乳试验及应用第五十页，讲稿共一百页哦一、胶乳凝集试验原理及方法一、胶乳凝集试验原理及方法（一一）原原理理：胶胶乳乳凝凝集集试试验验是是以以聚聚苯苯乙乙烯烯胶胶乳乳颗颗粒粒为为载载体体的的间间接接凝凝集集试试验验。使使用用抗抗原原或或抗抗体体致致敏敏胶胶乳乳颗颗粒粒，再再用用此此致致敏敏胶胶乳乳检检测测相相应应的的抗抗体体或或抗抗原原。胶胶乳乳凝凝集集试试验验所所用用的的胶胶乳乳颗颗粒粒是是人人工工合合成成的的载载体体，均均一一性性较较好好，性性能能比比红红细细胞胞稳稳定定，但但与与蛋蛋白白质质的的结结合合能能力力及及凝凝集集性性能能不不如如红红细细胞胞，因因此此胶胶乳凝集试验敏感性不如血凝试验。乳凝集试验敏感性不如血凝试验。第五十一页，讲稿共一百页哦（二）（二）试验方法：试验方法：1、胶胶乳乳凝凝集集试试验验：在在反反应应板板的的一一格格中中，先先加加受受检检标标本本一一滴滴，再再加加致致敏敏胶胶乳乳一一滴滴，连连续续摇摇动动23min观观察察结结果果。胶胶乳乳凝凝集集者为阳性。不凝集者为阴性。同时作阴、阳性对照。者为阳性。不凝集者为阴性。同时作阴、阳性对照。2、胶胶乳乳凝凝集集抑抑制制试试验验：先先加加受受检检标标本本一一滴滴，再再加加一一滴滴相相应应抗抗血血清清混混匀匀，再再加加一一滴滴致致敏敏胶胶乳乳抗抗原原，连连续续摇摇动动23min观观察结果。胶乳凝集者为阴性，不凝集者为阳性。察结果。胶乳凝集者为阴性，不凝集者为阳性。第五十二页，讲稿共一百页哦（三）（三）注意事项：注意事项：1、受受检检标标本本和和试试剂剂的的加加入入顺顺序序应应遵遵照照规规定定的的步步骤骤，否否则则无法判定结果。无法判定结果。2、试试剂剂一一般般保保存存在在46较较为为适适宜宜，胶胶乳乳试试剂剂不不能能冷冷冻冻，试试验前取出待接近室温时的温度再使用。验前取出待接近室温时的温度再使用。3、此此试试验验一一般般作作定定性性检检测测，严严格格的的操操作作也也能能达达到到半半定定量量的的要要求求。滴滴加加标标本本和和试试剂剂时时，液液滴滴大大小小应应均均匀匀一一致致，每每滴约滴约50l。第五十三页，讲稿共一百页哦二、抗链球菌溶血素二、抗链球菌溶血素“O”的测定的测定（一一）试试验验原原理理：在在受受检检者者血血清清标标本本中中，加加入入适适量量的的溶溶血血素素“O”。如如标标本本中中含含有有高高单单位位抗抗体体，中中和和后后则则有有多多余余的的抗抗体体存存在在，与与溶溶血血素素“O”致致敏敏的的胶胶乳乳试试剂剂反应，可出现清晰而均匀的凝集颗粒。反应，可出现清晰而均匀的凝集颗粒。第五十四页，讲稿共一百页哦（二）（二）试验步骤：试验步骤：1、将将溶溶血血素素“O”贮贮存存液液用用生生理理盐盐水水稀稀释释到到每每ml含含5和和2.5