TGXAS-薯类支链直链淀粉含量的测定双波长比色法.docx

ICS 65. 020. 01CCS B 22T/GXAS体标准T/GXAS XXXXXXXX薯类支链直链淀粉含量的测定双波长比色法Determi nat i onofamyIaseandamyIopect i ncontent i npotato DuaI-QaveIengthcolor imetry（征求意见稿）XXXX - XX - XX 实施XXXX - XX - XX 实施XXXX - XX - XX 发布广西标准化协会发布T/GXAS XXXX-XXXX本文件按照GB/T 1. 1-2020标准化工作导那么 第1局部：标准化文件的结构和起草规那么的规定 起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承当识别专利的责任。本文件由广西壮族自治区农业科学院农产品质量平安与检测技术研究所提出。本文件起草单位：广西壮族自治区农业科学院农产品质量平安与检测技术研究所。本文件主要起草人：T/GXAS XXXXXXXX薯类支链直链淀粉含量的测定双波长比色法1范围本文件描述了双波长比色法测定薯类中直链淀粉和支链淀粉含量的方法。本文件适用于薯类中直链淀粉和支链淀粉含量的测定。2规范性引用文件以下文件中的内容通过文中的规范性引用而构本钱文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义以下术语和定义适用于本文件。3. 1薯类Tubers薯类作物的简称，又称根茎类作物，主要包括甘薯、马铃薯、山药、芋类等。4原理根据双波长比色原理，假设试样溶液在两个波长处均有吸收，那么两个波长的吸光差值，与溶液中待测 物质的浓度成正比。从待测样品液中的支链淀粉，直链淀粉分别与碘生成络合物的吸收图谱中，可以确 定测定波长和参比波长。淀粉与碘能形成螺旋状结构的碘-淀粉复:合物，具有特效的颜色反响，其中支 链淀粉与碘依其分枝程度生成棕红色复合物，直链淀粉与碘生成深蓝色复合物。因此两种淀粉与碘作用 时会产生不同的光学特性，从而表现出特定的吸收谱及吸收峰，通过标准物质建立标准曲线，而确定样 品支链淀粉、直链淀粉的含量。5试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂，水为GB/T 6682中规定的三级水。3.1 乙醇（CHELOH） ：95%。3.2 冰乙酸（CHCOOH） o氢氧化钾（KOH）。3.3 碘（I2） o碘化钾（KI）。3.4 支链淀粉标准品。3.5 直链淀粉标准品。T/GXAS XXXXXXXX5. 9氢氧化钾溶液c (KOH) =1 mol/L：称取56. 1 g氢氧化钾加水溶解并定容至1 000 mL05. 10氢氧化钾工作液c (KOH) =0.09 mol/L：称取5. 05 g氢氯化钾加水溶解并定容至1 000 mJ11 乙酸溶液c (CH3COOH) =1 mol/L：量取 57. 8 mL 冰乙酸,定容至 1 000 mL。5.12碘试剂:称取2. 0 g碘化钾,溶于少量蒸储水，再加0.2 g碘,待溶解后用蒸储水定容至100 mJ 现配现用，避光保存。6仪器和设备实验室用粉碎机：可将样品粉碎，并过0.15 mm筛。6.1 鼓风干燥箱。6.2 双光束分光光度计：带波段扫描。6.3 分析天平：感量为0.0001 g。6.4 索氏抽提器。6.5 恒温水浴锅。6.6 容量瓶：50 mL、100 mL 和 1 000 mL<)移液器。7分析步骤试样制备取萼类成熟样品洗净切片(丝)，置于105 c鼓风干燥箱中杀青，再置于65 c鼓风干燥箱中烘干至 恒重。将干燥后的样品粉碎后过0.15 mm试样筛，储存于密封样品袋中，备用。7.1 样品溶液制备称取0. 1000 g样品于100mL烧杯，加入1mL无水乙醇湿润样品，再加入9 mU mol/L氢氧化钾溶液至 于沸水浴中加热10 min,冷却后用蒸储水定容至100 mL容量瓶，混匀备用。7.2 标准曲线绘制称取直链淀粉、支链淀粉标准物质各0. 1000 g于2个100 mL烧杯，分别加入1 mL无水乙静湿润样品， 再加入9 mLi mol/L氢氧化钾溶液至于沸水浴中加热10 min,冷却后用蒸储水定容至10() mL容量瓶，分别 得到hng/ml的直链淀粉标准溶液、支链淀粉标准溶液。吸取24矶支链淀粉标准溶液和 6mL(lmg/mg)直链淀粉标准溶液，混合均匀，形成4:1的混合标准溶液。分别吸取混合标准溶液0矶、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、8.0 mL,置于50 mL容量瓶中，分别加入0. 09 moL/L氢氯化钾溶液8. 0 mL、 7.5mL、7.0mL、6.0 mL、4.0mL、0mL及1 mol/L乙酸溶液2mL,碘试剂1mL,用蒸储水定容至50mL,配 制成支链淀粉标准溶液浓度:0%/矶、8|4g/mL> 16Mg/mL. 32Pg/mL> 64ng/mL 128gg/mL；直链淀粉标 准溶液浓度：Ogg/mL. 2pg/mL、4pg/mL、8Pg/mL. 16gg/mL. 32pig/mL,静置30 min。紫外分光光度计以 试剂空白调零,在波长427nm( X J、535nm(入2)、630nm( 3), 757nm(处测定混合标准溶液的吸光值，分别记为A”、Ax2、A”、A w即得AAqAxz-Am、AAtt=A.k3-Amo分别以 Az和 Ari为纵坐标，支链淀 粉和直链淀粉标准溶液浓度(卜唱/mL)为横坐标，分别绘制双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线，并计 算出支链淀粉、直链淀粉回归方程。T/GXAS XXXXXXXX显色和吸光度测定吸取样品溶液2 mL,置于50 mL容量瓶中，加入0. 09 nioL/LKOII溶液6mL,及1 moL/L乙酸溶液2 mL,碘 试剂1mL,用蒸储水定容至50mL,静置30min。紫外分光光度计以蒸储水为空白调零，在波长427nm（人）、 535nm（L）、630nm （人3）, 757nm （ 3）处测定样品溶液的吸光值,分别记为A”、An、2 Au,即得A A 支二Ax2 - Ar、A A产A- A”。将AB支和AAr（分别代入支链淀粉、直链淀粉标准曲线回归方程中，得出样 品溶液支链淀粉、直链淀粉的浓度。8计算及结果表示8.1试样中支链淀粉、直链淀粉和总淀粉含量分别按式（1）、式（2）和式（3）计算:Y _ Cx50xD1 - mxi oooY _ C2X5OXD Xo -, mxl 0002 （3）式中：X.一一试样中支链淀粉的量，单位为百分比（）；X2一一试样中直链淀粉的量，单位为百分比（）；x试样中总淀粉的量，单位为百分比（）；C,一一查双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线得样品中支链淀粉的浓度，单位为微克每亳升（阳/矶）； C2查双波长支链淀粉、直链淀粉标准曲线得样品中直链淀粉的浓度，单位为微克每亳升（jig/mL）； D 分取倍数；m称取的样品质量，单位为克（g）;50一一混合标准溶液定容体积，单位为亳升（mL）；1000（）单位微克每克（Mg/g）转化为单位百分比（）的换算系数。8.2计算结果保存至小数点后2位。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。