食用菌组织分离制母种.ppt

实训三实训三组织分离制母种组织分离制母种实训第一大部分实训第一大部分n n讲解及演示讲解及演示n n指导老师王德芝指导老师王德芝食用菌味道鲜美 风味独特l下面请同学们欣赏几道下面请同学们欣赏几道l美味的菜肴美味的菜肴菇香美味迎客来花好月圆蘑菇香香菇招来蝶恋花金针系珠相思豆团团圆圆蘑菇圈龙凤呈祥猴头宴银耳黑耳齐争艳蘑菇全席大师宴味道鲜美君品尝食用菌保健酒及饮料系列食用及药用菌的药用提取物l好树结好果好树结好果,好种出好菇好种出好菇!l美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种!组织分离制母种组织分离制母种你了解吗?噢 菌种很重要！母种 原种 栽培种食用菌的栽培食用菌的栽培子实体(菇体)实训内容实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种n（一）实（一）实训训目的目的n（二）实（二）实训训原理原理n（三）实（三）实训设计思路训设计思路n（四）实（四）实训训器材器材n（五）实（五）实训训步骤步骤n（六）注意事项（六）注意事项n（七）实验作业（七）实验作业（一）实（一）实训训目的目的n1.1.掌握母种培养基的配制掌握母种培养基的配制操作及操作及高压灭菌方法高压灭菌方法;n2.2.理解组织分离法制母种的原理理解组织分离法制母种的原理;n3.3.掌握组织分离接种技术掌握组织分离接种技术;n4.4.会使用超净工作台和培养箱会使用超净工作台和培养箱.（二）实（二）实训训原理原理n组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。菌丝的方法。n组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体组织分离系一种无性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。能使遗传特性稳定下来。n该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快，该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快，比较常用。比较常用。实训设计思路实训设计思路n1.1.母种培养基的成分不同对母种培养基的成分不同对菌丝生长有什么影响；菌丝生长有什么影响；n2.2.组织分离选用的材料及分组织分离选用的材料及分离的部位不同有什么影响；离的部位不同有什么影响；n3.3.培养温度不同有什么影响；培养温度不同有什么影响；n4.4.杂菌污染的原因杂菌污染的原因（三）实训器材（三）实训器材n新鲜菇新鲜菇(耳耳)体、刀片、镊子或接种针体、刀片、镊子或接种针n试管斜面培养基试管斜面培养基n接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、75%酒精及酒精棉球等酒精及酒精棉球等n培养箱等。培养箱等。复习上一节母种培养基的配制步骤1.按配方称量：见下面的配方2.煮制3.分装4.灭菌5.排斜面母种培养基配方：母种培养基配方：1.1.土豆土豆200g200g、糖、糖20g20g、琼脂、琼脂20g20g、水、水1000ml1000ml2 2.去去皮皮马马铃铃薯薯200g200g、葡葡萄萄糖糖20g20g、琼琼脂脂20g20g、水水1000ml1000ml、PHPH值值自自然然，另另外外添添加加：麸麸皮皮20g20g、玉玉米米面面5g5g或或黄黄豆豆粉粉5g5g、磷磷酸酸二二氢氢钾钾2g2g，硫硫酸酸镁镁2g2g，V VB1B11 1片（片（10mg10mg）。）。此此配配方方适适用用于于大大多多数数菌菌种种，金金针针菇菇、黑黑木木耳耳、灵芝生长尤其茁壮。灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。培养基的高压灭菌培养基的高压灭菌n使用使用高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？应注意的事项？n（提问同学）（提问同学）n(1)锅内装物品不应过紧；锅内装物品不应过紧；n(2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果；注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果；n(3)加热排冷气后，使温度达到加热排冷气后，使温度达到121.3，压，压力在力在0.10.15MPa之间维持之间维持30min；n(4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。（四）组织分离操作的主要（四）组织分离操作的主要步骤：步骤：n挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中，挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中，无病虫害，具有本品种优良性状的菇体无病虫害，具有本品种优良性状的菇体或组织作为种菇。或组织作为种菇。n环境、用具严格消毒：环境、用具严格消毒：即超净工作台即超净工作台或无菌室的使用，形成无菌的环境。或无菌室的使用，形成无菌的环境。超净工作台的使用超净工作台的使用n超净台可将空气通过由特制的微孔的超净台可将空气通过由特制的微孔的“超级滤清器超级滤清器”后吹送出来，形成连续不后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气高效的特殊空气”，它除去了大于，它除去了大于0.3m的尘埃、真菌和细菌孢子等等。的尘埃、真菌和细菌孢子等等。n工作人员就在这样的无菌条件下操作，工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。染。超净工作台超净工作台n 使用注意事项（提问同学）使用注意事项（提问同学）n提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30分钟后关闭杀菌灯；分钟后关闭杀菌灯；n然后开启日光灯、风机，然后开启日光灯、风机，20分钟后方可分钟后方可进行操作。进行操作。组组织织分分离离操操作作n菇体消毒：将子实体菌柄基部切菇体消毒：将子实体菌柄基部切除，置接种箱内，在无菌箱内以除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1的升汞水浸几分钟，再用无菌水的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干，冲洗并揩干，或用或用75酒精棉球擦酒精棉球擦拭菌盖与菌柄拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。次，进行表面消毒。组织分离部位的选择组织分离部位的选择n菌肉组织如图菌肉组织如图n菌核组织如图菌核组织如图 示 范 操 作n组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小方块。方块。n接种：在无菌条件下，随后挑取一组接种：在无菌条件下，随后挑取一组织小块，迅速移接到织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上，斜面培养基上，并塞好棉塞。并塞好棉塞。示 范 操 作n贴标签培养：试管从接种箱取出之前，贴标签培养：试管从接种箱取出之前，应逐支试管正面的上方贴上标签，写明应逐支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管放入菌种编号、接种日期，随后把试管放入培养箱（室）中，置适宜温度（平菇培养箱（室）中，置适宜温度（平菇22，香菇，香菇25）下培养，待组织块长）下培养，待组织块长出菌丝无污染即为纯种。出菌丝无污染即为纯种。培培养养n置于适宜温度下培养置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、草菇、猴头菌等多采用此方法。草菇、猴头菌等多采用此方法。n附：数显式恒附：数显式恒温温 培养箱的使培养箱的使用用数显式恒温培养箱的使用数显式恒温培养箱的使用n培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞、组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件 n调节适宜温度，并使温度稳定，再放培养物;n培养过程中要观察温度稳定性和生长状态，并注意培养时间；注 意n培养终止，关掉电源，取出培养物；n培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风；保持培养箱内空气干净，并定期消毒；实训第二大部分实训第二大部分n n学学 生生 分分 组组 操操 作作分 组 操 作n每班同学可分为二大组每班同学可分为二大组6小组；小组；n第一大组第一大组3台双人超净工作台，每次可台双人超净工作台，每次可6人操作；人操作；n第二大组可在无菌室内操作；第二大组可在无菌室内操作；n第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。进行组织分离，作对比观察。分 组 辅 导n注意同学们的操作；注意同学们的操作；n及时纠正不规范动作。及时纠正不规范动作。n接种操作完毕，收集试管进行培养。接种操作完毕，收集试管进行培养。数显式恒温培养箱的使用数显式恒温培养箱的使用n注意事项（提问同学）注意事项（提问同学）实训第三大部分实训第三大部分l l结果观察母种培养生长状态观察母种培养生长状态观察n母种培养生长状态可分母种培养生长状态可分4种情况种情况.n1.菌丝已萌发，生长旺，无污染菌丝已萌发，生长旺，无污染(如图所示如图所示)；n2.菌丝已萌发，但有杂菌污染；菌丝已萌发，但有杂菌污染；n3.菌丝未萌发，无污染；菌丝未萌发，无污染；n4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重；菌丝未萌发，且杂菌污染严重；原因分析原因分析n1.菌丝未萌发：菌丝未萌发：组织块太小组织块太小烫伤严烫伤严重重培养条件如温度不适宜。培养条件如温度不适宜。n2.有杂菌污染：有杂菌污染：培养基灭菌不彻底；培养基灭菌不彻底；培养基成分适宜杂菌生长；培养基成分适宜杂菌生长；环境、用具消毒不严格；环境、用具消毒不严格；菇体耳体消毒不严格；菇体耳体消毒不严格；接种操作控制不当，要无菌操作。接种操作控制不当，要无菌操作。常见的杂菌观察常见的杂菌观察n常见的杂菌主要有细菌、放线菌；常见的杂菌主要有细菌、放线菌；常见的杂菌观察常见的杂菌观察n细菌、霉菌等。细菌、霉菌等。常见的杂菌观察常见的杂菌观察n青霉、黑曲霉青霉、黑曲霉（五）组织分离制母种应注意的事项（五）组织分离制母种应注意的事项（提问同学）（提问同学）n环境用具严格消毒；环境用具严格消毒；n组织小块大小要适宜组织小块大小要适宜(黄豆粒大小黄豆粒大小)；n接种时要严格无菌操作；接种时要严格无菌操作；n培养时调节到该菌的适宜温度。培养时调节到该菌的适宜温度。（六）实训作业（六）实训作业n1.组织分离法制母种过程中的注意事项组织分离法制母种过程中的注意事项有哪些？有哪些？n2.记录你制作的母种的生长状态记录你制作的母种的生长状态;n3.是否有杂菌污染是否有杂菌污染,如有分析其原因如有分析其原因.再 见 !