改善缺铁性贫血功能评价方法.doc

46附件 5： 改善改善缺铁性贫血缺铁性贫血功能评价方法功能评价方法试验项目、试验原则及结果判定试验项目、试验原则及结果判定 Items, Principles and Result Assessment1 试验项目试验项目1.1 动物实验1.1.1 体重 1.1.2 血红蛋白1.1.3 红细胞比积/红细胞游离原卟啉1.2 人体试食试验1.2.1 血红蛋白1.2.2 血清铁蛋白1.2.3 红细胞游离原卟啉/红细胞运铁蛋白饱和度2 试验原则试验原则2.1 动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。2.2 针对儿童的人体试食试验，只测血红蛋白和红细胞内游离原卟啉。2.3 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。3 结果判定结果判定3.1 动物实验：血红蛋白指标阳性，红细胞游离原卟啉/红细胞压积二项指标一项指标阳性，可判定该受试样品改善缺铁性贫血功能动物实验结果为阳性。3.2 人体试食试验3.2.1 针对改善儿童缺铁性贫血功能的，血红蛋白和红细胞内游离原卟啉二项指标阳性，可判定该受试样品具有改善缺铁性贫血功能作用。3.2.2 针对改善成人缺铁性贫血功能的，血红蛋白指标阳性，血清铁蛋白、红细胞内游离原卟啉/血清运铁蛋白饱和度二项指标一项指标阳性，可判定该受试样品具有改善缺铁性贫血功能作用。47改善缺铁性贫血功能检验方法改善缺铁性贫血功能检验方法 Method for the Assessment of Improving Nutritional Anaemia Function1.动物实验动物实验1.1 原理原理用低铁饲料喂饲动物可形成实验性缺铁性贫血模型，再给予受试样品，观察其对血液细胞学、血液生化学等指标的影响，可判定该受试样品对改善动物缺铁性贫血的作用。1.2 实验动物实验动物健康初断乳大鼠，单一性别，每组大鼠812只。1.3 低铁饲料低铁饲料配方：配方：成 分添加量 g/kg玉米淀粉529.5 蛋清蛋白*200.0 蔗糖100.0 玉米油（无添加剂）70.0 纤维素50.0 混合矿物盐(AIN-93G-MX)35.0 混合维生素(AIN-93G-VX)10.0 L-胱氨酸 氯化胆碱3.0 2.5* 亦可使用EDTA处理的酪蛋白AIN-93G混合矿物盐配方混合矿物盐配方 矿物质添加量 g or mg/kg mixCalcium carbonate anhydrous357.00 Potassium phosphate monobasic196.00 Potassium citrate, tripotassium monohydrate70.78 Sodium chloride74.00 Potassium sulfate46.60 Magnesium oxide24.00 Zinc carbonate1.65 Sodium meta-silicater9H2O1.4548Manganous carbonate0.63 Cupric carbonate0.30 Chromium potassium sulfater12H2O0.275 Boric acid (17.5% B), mg81.50 Sodium fluoride (45.24% F), mg63.50 Nickel carbonate (45% Ni), mg31.80 Lithium chloride (16.38% Li), mg17.40 Sodium selenate anhydrous(41.79% Se), mg10.25AIN-93G混合维生素配方混合维生素配方 维生素添加量 g/kg mixNicotinic acid3.000 Ca pantothenate1.600 Pyridoxine-HCl0.700 Thiamin-HCl0.600 Riboflavin0.600 Folic acid0.200 Biotin0.020 Vitamin B-12 (cyanocobalamin) (0.1% in mannitol)2.500 Vitamin E (all-rac-a-tocopheryl acetate)2 (500 IU/g)15.000 Vitamin A (all-trans-retinyl palmitate)2 (500,000 IU/g)0.800 Vitamin D-3 (cholecalciferol) (400,000 IU/g)0.250 Vitamin K-1 (phylloquinone)0.075 Powdered sucrose974.6551.4 剂量分组及受试样品给予时间剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个低铁对照组，以人体推荐量的 5 倍为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，必要时设阳性对照组（硫酸亚铁或乳酸亚铁，剂量为2 ppm 或2 mg/(kgbw)，以Fe 元素计） 。受试样品给予时间 30 天，必要时可延长至 45 天。1.5 实验步骤实验步骤1.5.1 建立缺铁性贫血大鼠模型建立缺铁性贫血大鼠模型选用健康断乳大鼠在实验环境下适应 35 天后饲予低铁饲料及去离子水（或双蒸水） ，采用不锈钢笼及食罐，同时，采用剪尾取血法放血，5 天一次，每次 0.30.5ml。实验过程中避免铁污染。自第 3 周开始每周选取部分大鼠采尾血测 Hb，如多数动物 Hb 低于100g/L 时，测定全部大鼠的体重及 Hb。1.5.2 恢复实验恢复实验49选取 Hb50）的资料应用秩和检验。结果判定：结果判定：改善儿童缺铁性贫血：试验前后自身比较和试验后组间比较，血红蛋白、红细胞内游离原卟啉二项指标差异有显著性；同时，试食组自身前后比较，血红蛋白平均升高幅度10g/L，可判定受试样品具有改善缺铁性贫血功能的作用。改善成人缺铁性贫血：试验前后自身比较和试验后组间比较，血红蛋白指标差异有显著性；同时，试食组自身前后比较，血红蛋白平均升高幅度10g/L，血清铁蛋白、红细胞内游离原卟啉/血清运铁蛋白饱和度二项指标中一项指标阳性，可判定该受试样品具有改善缺铁性贫血功能。