鸭源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测_刘加圣.docx
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1、DOI: 10.16372/j.issn. 1004-6364.2012.10.019 罄篆貪 2012 年第 34卷第 10期 China Poultry Vol.34, No. 10.2012 鸭源沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测 刘加圣,龚建森 (江苏省家禽科学研究所,江苏扬州 225125) 沙门氏菌病是家禽的一种常见病与高发病, 给家禽养殖业造成了较大的危害。沙门氏菌感染 不仅引起家禽发病死亡造成严重的经济损失,且 易污染家禽产品并作为沙门氏菌的携带者。目 前,从家禽和禽产品中分离出沙门氏菌的报道明 显多于其它动物,造成这一结果的主要原因是由 于沙门氏菌在被感染的家禽中能通过水平传播和
2、 垂直传播造成广泛流行,同时也反映出家禽的饲 养数量十分庞大。目前全球已知的沙门氏菌血清 型有近 2 500种,分属不同的血清群,不同血清型 沙门氏菌的鉴定具有流行病学意义。长期以来, 该病的预防和治疗主要依赖于抗生素,但由于抗 生素在临床的不合理使用导致耐药菌株的不断增 多,使得此病防治较为困难。因此 ,在临床实践中 对沙门氏菌分离菌株的耐药情况进行监测,具有 非常重要的意义。 1发病情况 2011年 9月在江苏省徐州市某鸭场饲养的商 品代樱桃谷肉鸭于 25日龄开始陆续出现发病和死 亡 ,用几种药物给予治疗,疫情有所好转但未能根 治,平均死亡率达 15%。发病鸭主要表现为精祌 萎顿、羽毛松乱
3、、吃料减少或食欲废绝、排淡黄色 至绿色稀粪、粘污肛门周围的羽毛。剖检病变主 要表现为心包炎、肝脾肿大、胆囊充盈等。 2分离菌的鉴定 2.1分离菌培养特性 现场采取发病鸭场病死鸭的心血、肝脏、脾 脏、胆囊、胰腺等病料,无菌操作取待检病料分别 接种麦康凯琼脂平板、 SS琼脂平板和营养琼脂平 板,37 培养 12 24 h, 结果从其中 1只病死鸭胆 囊中分离到 1株细菌。该分离菌在麦康凯平板上 生长出无色透明菌落,在 SS平板上生长出淡红色 收稿日期: 2012-02-10 菌落,在营养琼脂上生长出无色透明菌落 ,初步判 断为沙门氏菌。 2.2显微镜观察 将可疑沙门氏菌单菌落经涂片固定后,置高 倍
4、显微镜下观察,显示分离菌为长短不一、两端 钝圆、两极着色、呈直线形的革兰氏阴性细小杆 菌,取单菌落接种到 LB液体培养基中, 37尤培养 12 20 h培养后保存备用。 2.3生化试验 取分离菌的 24 h纯培养物分别进行糖发酵试 验 ( 葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖)、甲基红 试验、枸橼酸盐利用试验与硫化氢试验等,结果表 明分离菌株能分解葡萄糖、甘露醇、麦芽糖,产酸 产气,不利用乳糖和蔗糖,能利用枸橼酸盐,不分 解尿素,甲基红试验阳性,硫化氢试验产生H2S,符 合沙门氏菌的生化特征。 2.4血清学鉴定 在洁净的玻片上滴加少量沙门氏菌属诊断血 清,将分离菌加入少量灭菌生理盐水中制成浓菌
5、液,然后取少量菌液滴到血清中,混合均匀 2 min 内判定结果。同时设生理盐水的对照。结果表 明,分离菌与沙门氏菌 09与 012因子血清凝集, 与其他因子血清不凝集,可以判定该分离菌株 属于沙门氏菌 D1群。 2.5耐药性检测 挑取纯化好的菌落,均匀涂布在普通营养琼 脂平板上,分别贴上各种药敏纸片, 37 t培养 1224h后观察,测量抑菌环的直径。参照药敏 纸片附带的抑菌圈直径判断标准,分别记作 S (敏感)、1(中度敏感)、和 R (耐药)。结果该分 离菌株均对头孢噻肟较为敏感,对头孢噻肟、氟 苯尼考、卡那霉素、庆大霉素中度敏感,对氨苄 青霉素、链霉素、卡那霉素、四环素、氟脈酸具有 耐药
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