ELISA步骤、试剂及注意事项(共2页).doc
《ELISA步骤、试剂及注意事项(共2页).doc》由会员分享,可在线阅读,更多相关《ELISA步骤、试剂及注意事项(共2页).doc(2页珍藏版)》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、精选优质文档-倾情为你奉上ELISA步骤、试剂及注意事项操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为110gml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。3.加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37孵育0.51小时,洗涤。4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的
2、TMB底物溶液0.1ml,371030分钟。5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6.结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。方法二用于检测未知抗体的间接法:用包被缓冲液将已知抗原稀释至110gml,每孔加0.1ml,4过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37孵育
3、1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。试剂器材1.试剂(1)包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):NaCO3?1.59克NaHCO3 2.93克加蒸馏水至1000ml (2)洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15MKH2PO4 0.2克Na2HPO412H2O2.9克NaCl 8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05 0.5ml 加蒸馏水至1000ml(3)稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克加洗涤缓冲液
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- ELISA 步骤 试剂 注意事项
限制150内