生殖克隆技术和干细胞工程.ppt
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1、人胚胎干细胞研究进展,南京医科大学组织胚胎教研室江苏省生殖医学重点实验室周作民,干细胞的基本概念胚胎干细胞系的建立过程胚胎干细胞研究的进展情况胚胎干细胞的研究意义胚胎干细胞研究的困难及解决办法,人体发生过程: 受精 卵裂 受精后72h 受精后5-7天精子+卵子 合子 卵裂球 桑椹胚 囊胚 滋养层胎盘及胎儿附属结构囊胚 内胚层消化道、呼吸道上皮和腺体;肝;胆;胰。 内细胞群 中胚层结缔组织;血液;肌肉;骨骼;泌尿生殖系统 外胚层体表结构;神经系统,干细胞的基本概念,1、定义:具有自我复制的能力,在一定条件下能够分化成各种功能细胞。2、分类:(1)全能干细胞,包括:胚胎干细胞(embryonic
2、stem cells, ES细胞) 生殖干细胞(embryonic germ cells, EG细胞) 具有全能性,能够分化成全身200多种细胞类型, 进一步形成机体的任何组织和器官。(2)多能干细胞:具有分化成多种细胞和组织的潜能,但却失去了发 育成完整个体的能力。(3)专能干细胞:只能向一种或密切相关的两种类型的细胞分化。,横向分化:部分干细胞在特定条件下可以转化为其它细胞,如肌肉干细胞在特定条件下可以分化为各种血细胞系。,衍生自囊胚的内细胞团或原始外胚层的细胞;永生化(immortal);能维持稳定的正常的二倍体染色体结构;有稳定的发育潜能,能被诱导增殖或分化;能参与胎儿所有组织的发育过
3、程;,胚胎干细胞的性质,胚胎干细胞系的建立过程,1、干细胞来源:(1) 发育良好的囊胚,从中分离内细胞群细胞ES细胞(2) 从5-9周的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞(embryonic germinate cells)(3)恶性胚胎肿瘤或畸胎瘤细胞 (embryonal carcinoma, EC)(4) 生殖克隆(治疗性克隆):体细胞核转移(SCNT)去核卵细胞 + 体细胞核 克隆 囊胚 分离内细胞群 ES细胞,2、胚胎干细胞的分离酶消化后培养免疫方法去处滋养层细胞流式细胞仪分离法,3、培养条件:(1) 特殊的培养液:用DMEM培养液,其中胎牛血清的浓度和质量很重要,还要加非必须氨基酸;-
4、巯基乙醇。(2) 以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞。(3) 必须加入LIF,抑制细胞分化。,4、胚胎干细胞的鉴别胚胎干细胞具有以下特点:(1) 细胞内碱性磷酸酶活性高(2)端粒酶活性高(3) 不被Hoechst33342 和Rhodamine123染色(4) 细胞膜表面有特殊的标记:SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81(5) 能分化成三个胚层的细胞,将胚胎干细胞植 入免疫缺陷小鼠皮下可产生畸胎瘤(6) 可诱导分化为各种成体干细胞,干细胞特性,干细胞诱导分化的常用方法(1)加入诱导细胞分化的因子或化学物质, 如VGEF、bFGF 、DMSO和RA等(2)将ES细胞
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- 生殖 克隆技术 以及 干细胞 工程
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