分子生物学在检验医学中的应用.ppt
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1、分子生物学在检验医学中的应用,一、分子生物学在检验医学中的常用技术,1、 PCR技术2、 RT-PCR技术3、 RFLP4、 SSCP5、 MSP6、 测序,二、外源性疾病的检验与诊断:,1、 细菌、支原体、衣原体、寄生虫、 病毒等2、 SARS冠状病毒的分子生物学检测,BNIoutS/BNoutAs: sense ATGAAT TAC CAA GTC AAT GGT TAC antisense CAT AAC CAG TCG GTA CAG CTA C FraGment lenGth 195 bp BNIinS/BNIAs: sense GAA GCT ATT CGT CAC GTT CG
2、antisense CTGTAGAAA ATC CTA GCT GGA G Fragment length 110 bpSAR1s/SAR1as: sense CCT CTC TTG TTC TTG CTC GCA antisense TAT AGT GAG CCG CCA CAC ATG Fragment length 150 bp,二、内源性疾病的检验与诊断:,1、 临床基因变异酶的分子性质研究 1) 用PCR-SSCP技术发现我国第一例 LDH遗传变异病例,病 例 21岁男性: LDH:75 U/L (参考范围:110-240 U/L)其余指标均正常在三年的调查期间,LDH活力始终处于较
3、低水平,在 48-85 U/L之间,经排除其它原因,如血中的抑制剂的存在、药物的影响等可能因素外,我们怀疑可能有遗传性的LDH变异。根据计算红细胞中H、M亚基的比值,初步断定为H亚基变异,采用合成的7对引物,分别扩增LDH基因中的7个外显子,然后用SSCP电泳法与正常人对照,发现变异发生在外显子4上,由此证明该病人的长期低酶活力是有基因变异引起的。,2n 2 3n 3 4n 4 5n 5 6n 6,2)LDH-A和LDH-B亚基遗传变异及 对检验结果的影响,基因变异可导致酶分子组成结构发生变化,对酶活力和酶的物理化学性质造成影响,可给临床医生造成诊断陷阱(pitfall),因为在不同疾病状态下
4、,从相关联的组织器官中释放出的酶与预期的不同,病人血清酶活力不能完全反映各种疾病的状态,容易造成误诊。,LDH-A基因变异类型_变异位置 DNA 氨基酸置换 影 响A-171 CGA-TGA Arg-Ter 无义突变A-328 GAG-TAG Glu-Ter 无义突变A-81 GAC-AAC Asp-Asn 外显子2丢失A-220 AAA-GAA Lys-Glu 电荷变化A-314 CGT-TGT Arg-Cys 电荷变化A-20 插入C 移码突变A-128 TGTTGT-TGT ValVal-Val 辅酶结合A-213 丢失2 bp (CT) 移码突变A-251 丢失20 bp 移码突变,L
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