应用分子生物学技术对环境中军团菌的调查研究.doc
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1、【精品文档】如有侵权,请联系网站删除,仅供学习与交流应用分子生物学技术对环境中军团菌的调查研究.精品文档.应用分子生物学技术对环境中军团菌的调查研究 沈莉 谢晓红 韩华忠 陶力新 袁建华 王仁刚 上海市奉贤区疾病预防控制中心 201400摘要目的: 应用分子生物学技术对奉贤地区部分公共场所空调冷却塔水及其它环境(淋浴设施等)进行军团菌污染状况调查。方法:在五月和十月,分别采集中央空调冷却塔水样品及环境样品用聚合酶链(PCR)对其进行军团菌检测,同时用常规法进行分型鉴定。结果:采集的125份样品中,PCR法检出军团菌45份,阳性检出率为36%,且水样检出率远高于环境。在检出的59株军团菌中共鉴定
2、出6种不同菌型,其中LP1为重点菌型,占50.85%。且在同一样品中检出不同菌型有2株以上的占35.29%。结论:奉贤地区中央空调冷却塔及环境中存在军团菌污染,需引起重视,以防止军团菌的爆发流行。关键词:军团菌 冷却塔 PCRApplication of molecular biology technology on the environment in the investigation of Legionella Shen li,Xie Xiaohong,Han Huazhong,et al .Fengxian district Center for Disease Prevention
3、and Control,shanghai201400,china.AbstractObjective:Making a survey by techniques of Applied Molecular Biology, which is about the condition of Legionella contamination in air-conditioning cooling tower water and other environments (shower facilities, etc) in some public places in Fengxian District.M
4、ethods:In May and October, inspecting the samples of central air-conditioning cooling tower water and other environments respectively on Legionella by polymerase chain (PCR), while making a classification identification by routine techniques. Results:Among the 125 samples collected, Legionella was f
5、ound in 45 samples by PRC, relevance ratio of masculine gender was 36%, which was higher in water than in other environments. There were 6 different bacteria types identified in the detection of 59 pieces of Legionella. LP1 was the important bacteria type among the 6, accounting for 50.85%. The fact
6、 that more than 2 types in one sample accounts for 35.29%.Conclusions:Legionella contamination exists in air-conditioning cooling tower water and other environments in Fengxian District, which should be paid attention to in order to prevent the outbreak of Legionella.KeywordLegionella ;Cooling tower
7、 ;PCR 军团菌是一种革兰氏阴性杆菌,能引起急性呼吸道传染病1,因在1976年美国费城召开的退伍军人大会时爆发流行而得名。自70年代被发现以来,全世界已有广泛报道,全球每年都有数起军团菌爆发流行,WHO也已正式把它列入疾病传报范围。迄今为止,军团菌已被发现存在40个种,60多个血清型。经流行病学调查研究,这种细菌存在于各种自然界水源以及空调水管道,供水系统等人工水源中,在引进空调冷却塔做冷却水时,随空调器把细菌散布于室内空气中,被人吸入而引发肺炎。 我国自1982年南京首次证实军团菌病例以来已有多起军团菌爆发流行2,上海在近几年内也从病人和环境中分离到军团菌3。而上海地区健康人血清抗体水平调
8、查也证明军团菌早已存在我们周围并对人群构成潜在威胁4。近年来从军团菌的流行可以看出军团菌对人类健康的威胁已达到不容忽视的程度。随着人们生活水平的提高,其发病率有上升趋势,因此对该病的研究也越来越受到人们的重视。 目前用于军团菌检测的常规培养费时约7-10天,不仅花费大量时间和精力,还具有敏感性,特异性差的缺点,且操作复杂,易造成漏检和误检。分子生物学技术的发展为军团菌检测提供了新的契机。利用聚合酶链(PCR)技术能够更加快速和有效的对军团菌进行检测。 本课题应用聚合酶链(PCR)技术,检测流行环境中的军团菌,了解分析奉贤地区军团菌的污染状况。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 实验菌株 大肠
9、埃希菌(ATCC25922),肠炎沙门菌(ATCC13076),宋内氏志贺菌(ATCC25931),副溶血性弧菌(ATCC17802)均购为美国典型微生物菌种中心保藏中心提供标准菌株。 1.1.2 样品来源 2010年5月-10月以单纯随机抽样方式选取奉贤地区具有集中式中央空调设备的各大型超市,酒店共10家。以无菌方式采集空调冷却塔水于无菌广口瓶中,每件450 ml,共采集64件。以沾湿生理盐水的棉签反复涂抹空调出风口以及酒店浴室莲蓬头出水口表面,剪去棉签接触手部位,将棉签置5ml生理盐水中,共采集61件,采样后即送实验室检验。 1.1.3 培养基 GVPC平板由柯玛嘉公司提供,血琼脂平板,各
10、反应试剂由上海市疾病预防控制中心提供,均在有效期内使用。1.1.4 诊断血清 军团菌诊断血清由上海市疾病预防控制中心提供,均在有效期内使用。1.1.5 PCR扩增仪 Techne Flexigene;全自动数码凝胶成像系统Tanon GIS-20101.1.6 PCR试剂盒 嗜肺军团菌(LP)PCR检测试剂由上海健益生物科技有限公司提供。1.2 方法1.2.1 细菌的增菌分离培养鉴定 样品经负压过滤后,剪碎放入蒸馏水中,混合振荡后吸取1毫升进行酸处理,静置5分钟后同时接种GVPC平板和血平板.36,5%CO2培养72小时后进行鉴定5。1.2.2 PCR检测方法 取增菌液500ul,12000r
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- 关 键 词:
- 应用 分子生物学 技术 环境 军团 调查研究
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