硫酸阿米卡星的药代动力学.docx
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1、硫酸阿米卡星的药代动力学(畜牧与兽医杂志)2014年第六期1材料与方法1.1试剂及溶液硫酸阿米卡星注射液来自于上海恒丰强动物药业有限公司,批号为20121101;甲醇、乙腈(CNW公司)为色谱纯;有机相针式滤器(0.45m,CNW公司);WhatmanNo.4滤纸、GF/C玻璃纤维滤纸(上海利根商贸有限公司);进样瓶(CNW公司)。四硼酸二钠缓冲剂:3.8g四硼酸二钠溶于80mL蒸馏水中,用NaOH调pH至10.38后定容至100mL棕色容量瓶中,使用前用0.45m的有机相针式滤器过滤。衍生化试剂:精细称取OPA120mg,溶解于3mL甲醇中,参加15mL0.1molL1的四硼酸二钠溶液,参加
2、150L2巯基乙醇,混匀,试剂室温、暗处过夜处理,使用前过滤。阿米卡星标准储备液:精细称取阿米卡星标准品1mg,参加1mL的水溶解混匀、过滤,配制为1mgmL1的阿米卡星标准储备液。磷酸二氢钠流动相的配制:精细称取磷酸二氢钠7.80g,溶于800mL水中,用硼酸调pH至3.67后定容至1000mL的容量瓶中。使用前用真空抽滤机将溶液过滤,超声脱气备用。1.2色谱条件色谱柱:inertsilODS3V(5m,4.6150mm);保护柱;流动相:甲醇:0.05molL1磷酸二氢钠(pH=3.67)(体积7030);荧光检测波长:激发波长342nm,发射波长440nm;流速1.0mLmin1;柱温:
3、40。1.3衍生反响阿米卡星在0.550gmL1的浓度范围内,通过测定不同OPA衍生剂的量、衍生时间对阿米卡星的影响,确定阿米卡星衍生的最佳条件。取阿米卡星标准储备液稀释后的溶液200L于进样瓶中,参加OPA衍生剂200L,具塞震荡混匀1min后取20L进样。1.4标准曲线的绘制取阿米卡星标准储备液依次稀释为0.5、1、2、5、8及20gmL1这一系列浓度的溶液,取各个浓度的溶液200L,按1.4的条件衍生后,取20L进样检测,并且重复3次取平均值。以阿米卡星的浓度为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,并作回归分析,得出回归方程和相关系数。1.5检测限与定量限检测限是反映分析方法整体的灵敏度的
4、指标,是从样品背景信号中检测出待测物质存在时所需的最低浓度;定量限是样品中待测物质能够被定量测定的最低量,结果具有准确度和准确性。配制不同浓度阿米卡星标准品溶液,添加到空白血浆中,按血浆样品净化的方法提取净化,HPLC分析。以信噪比31作为检测限,以信噪比101作为定量限。1.6精细度与回收率精细量取适量空白血浆样品,根据阿米卡星标准曲线的制备方法,分别配制含阿米卡星低、中、高(1、5及10gmL1)三个浓度的血浆样品,每个浓度按血浆样品预处理方法处理后,重复进样5次,取平均值计算提取回收率、相对标准偏差(SD)和日内变异系数,同时每份样品1周内连续测定5d,计算日间变异系数。1.7血液样品的
5、净化取保存于20冰箱内的血浆样品,溶解回温后精细量取血浆样品200L于离心管内,参加pH10.38的四硼酸二钠缓冲液200L,漩涡混合后,参加乙腈400L,漩涡震荡1min,1200rmin1离心10min,取上清液200L待用。1.8给药和采样选择健康成年混血犬8只,体重约为10kg,并在试验前,所有犬只至少饲养7d,且在试验前没有使用过任何会影响阿米卡星代谢的药物,整个试验期间,严密观察各犬的精神状态和临床反响,包括食欲、饮欲、大小便情况以及可能出现的胃肠道等方面的不良反响。试验时,称重后,皮下注射硫酸阿米卡星,给药剂量为10mgkg1,于给药前0.5h,给药后5、10、15及30min和
6、1、2、4、8、12、24、48、72及96h颈静脉采血,所有样品采血后离心,取血浆,进行药代动力学测定。1.9血药浓度数据的处理根据血浆药物浓度时间数据,做药时曲线图,药时曲线和标准曲线图均采用Excel软件绘制。运用SPSS18.0软件中进行统计分析和中国药理学会编制的3P97软件计算药代动力学参数,并给出最可能的房室模型,统计值以平均数标准差(MeanSD)表示。2结果2.1阿米卡星的色谱根据1.3的色谱条件,所得空白血浆、阿米卡星血浆样品、阿米卡星血浆样品加标色谱见图1图3。结果表明:高效液相色谱法基线走势平稳,阿米卡星出峰时间大约为10.046min,其中血液样品经过净化后,杂峰较少
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- 硫酸 阿米卡星 动力学
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