WST 631—2018日本血吸虫毛蚴检测尼龙绢袋集卵孵化法.pdf
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1、ICS 11.020 C 61WS中 华 人 民 共 和 国 卫 生 行 业 标 准WS/T 6312018日本血吸虫毛蚴检测 尼龙绢袋集卵孵化法Detection of Schistosoma japonicum miracidiumEgg hatching method after nylon mesh bag concentration2018 - 09 - 26 发布2019 - 04 - 01 实施中华人民共和国国家卫生健康委员会发 布WS/T 6312018I前 言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。 本标准起草
2、单位: 浙江省医学科学院寄生虫病研究所、 中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、 安徽省血吸虫病防治研究所、江西省寄生虫病防治研究所、浙江省开化县疾病预防控制中心。 本标准主要起草人:严晓岚、闻礼永、郑彬、汪天平、熊彦红、张剑锋、林丹丹、卢美、周晓农。WS/T 63120181日本血吸虫毛蚴检测尼龙绢袋集卵孵化法1范围本标准规定了检测人体粪便中日本血吸虫毛蚴的尼龙绢袋集卵孵化法。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对日本血吸虫毛蚴的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件, 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(
3、包括所有的修改单)适用于本文件。WS 233 病原微生物实验室生物安全通用准则3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1日本血吸虫虫卵Schistosoma japonicumegg呈椭圆形,淡黄色,大小为(74106)m(5580)m,卵壳薄而均匀,无卵盖,侧面有一小 棘,成熟虫卵内可见毛蚴。3.2日本血吸虫毛蚴Schistosoma japonicummiracidium日本血吸虫幼虫发育中的最早阶段,呈梨形或长椭圆形,左右对称,银灰色,大小为(78120) m(3040)m,前端有锥形突起,体表具有纤毛。3.3 毛蚴孵化 miracidium hatching毛蚴在日本血吸虫虫卵内
4、完成胚胎发育后破壳而出的现象。4 仪器设备4.1 光照培养箱WS/T 63120182光照强度:1 Lx5000 Lx4.2 显微镜光学显微镜:40 400 4.3 放大镜放大倍数:105 试剂材料5.1 孵化用水采用无原生动物、水中余氯低于 0.3 mg/L、pH 6.87.2 的清洁水,参见附录 A。5.2 尼龙绢袋57 m/25.4 mm(260目)尼龙绢袋,参见附录B。5.3 筛子孔径为 250 m/25.4 mm(60 目)。5.4 烧瓶250 mL或500 mL三角或长颈烧瓶。5.5 其他压舌板或竹签、夹子、毛细吸管、载玻片、2%碘酒等。6 检测步骤6.1 样本准备采集受检者新鲜粪
5、便,重量不少于30 g,存放于广口带盖且防渗漏洁净的密闭容器中,将受检者基 本信息(姓名、编号、送检日期)标记于容器外部。采集后的样本应及时送检,如未能及时检测,应在 4 条件下冷藏保存,时间不超过24 h。6.2 样本检测6.2.1 验收登记验看粪便重量、质量及标签,核对无误后统一编号,登记。6.2.2 淋水冲洗6.2.2.1 将筛子叠放于尼龙绢袋上,尼龙绢袋下口用夹子夹住。6.2.2.2 取受检者粪便30 g置于筛子中,用水冲淋,压舌板或竹签调浆,使粪液滤入尼龙绢袋中。6.2.2.3 移去筛子,继续用水冲洗袋内粪渣,用压舌板或竹签轻轻振荡尼龙绢袋使过滤加速,直至滤出液变清为止。WS/T 6
6、31201836.2.2.4 将尼龙绢袋下口移入烧瓶口内,取下夹子,将袋内的滤渣用孵化用水淋洗入烧瓶,继续加孵化用水满至离瓶口1 cm处。6.2.3 毛蚴孵化将盛有滤渣的烧瓶置于光照培养箱(20 30 )或相同室温下孵化,在3 600 Lx3 800 Lx光照 强度下,孵化4 h12 h(范围为0.5 h24 h),需观察23次,参见附录C。 每批实验均需设置血吸虫虫卵阳性粪便作为对照。6.2.4 毛蚴观察取出烧瓶,瓶口向着光源,背衬以黑色背景,平视观察水面下04 cm范围内浮游生物,每瓶每次 观察时间不少于3 min。必要时可用放大镜观察。发现毛蚴后,用毛细吸管吸出,均匀分滴于载玻片上, 观
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