血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定.doc
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1、血清碱性磷酸酶血清碱性磷酸酶 ALPALP 磷酸对硝基苯酚法测定磷酸对硝基苯酚法测定1 1. . 实实验验原原理理碱性磷酸酶的活性由在pH 值为 10.4,2-氨基 -2 甲基-1-丙醇( AMP)存在的情况下测量p-硝基 -磷酸苯酯(pNPP)的转换速率决定。ALPpNPP + AMP -pNP+AMP-PO4在 410/480nm 测定 pNP 的生成速率,它与标本中ALP 的活性成正比。2 2. . 标标本本采采集集与与处处理理:2.1 病人准备:无特殊要求。2.2 标本类型:标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。2.3 血清分离:应在收集后两小时内分离出来。避免使用含 EDTA 或草酸
2、盐的血浆。3 3. . 标标本本存存放放 :23 天内的活性损失: 1525保存:10%;标本稳定性: 48保存稳定 7 天; -20保存至少可稳定 2 个月 标本。如果分析延迟8 小时以上,最好把血清冷藏。冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。4 4. . 标标本本运运输输: 常温条件下运输5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准: 细菌污染的不能做测定。6 6. . 实实验验材材料料 :6.1 上海奥林巴斯 ALP 测定试剂盒 试剂 1 试剂 2 6.1.1 试剂准备:试剂为即用式。6.1.2 试剂稳定性与贮存:原试剂避光保存于28,若无污染,可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6.1.3
3、变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。6.1.4 注意事项:碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜。反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性,切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。若反应液与皮肤或粘膜接触,请速用水冲洗。6.2 校准品:使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。6.3 质控品:参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。7 7. . 仪仪器器 :奥林巴斯 AU2700 生化分析仪8 8. . 操操作作步步骤骤8.1 项目基本参数:参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件8.2 仪器操作
4、步骤:参见生化检验奥林巴斯AU2700 生化分析仪操作规程 .SOP 文件9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析1 10 0. . 质质量量控控制制: 在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与 II 质控做为未知标本进行分析,以2S 为质控警告限,3S 为失控限,绘制质控图,判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。1 11 1. . 计计算算方方法法: 以 TruCal U 复合校准品 ALP 校准值校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行ALP 活力检测,可以直接使用A/min 均值乘以计算因子得到结果,但是这样
5、所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALP 活力的计算因子见下:A A/ /m mi in n因因子子 = = A AL LP P 活活力力 U U/ /L L 底物起始的反应( 37) 样品起始的反应(37)05 nm 3433 27571 12 2. . 参参考考值值范范围围成年人4男性 2050 岁 53128U/L男性 60 岁以上 56119U/L女性 2050 岁 42 98U/L女性 60 岁以上 53141U/L儿童5男性 女性130 天 75319U/L 48406U/L1 个月 1 岁 82383U/L 124341U/L1 岁 3 岁 104345U/L 108317U/
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