粪大肠菌群指标的监测规程多管发酵法.wps
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1、粪粪大肠菌群指标的监测大肠菌群指标的监测规程多管发酵法规程多管发酵法1目的目的为了规范化验人员在污水处理厂中的监测方法和操作程序,提高水质监测数据的准确性,特制定本规程。2适用范围适用范围本监测规程适用于1水务有限公司。3定义、原理及注意事项定义、原理及注意事项3.1 定义:粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分,主要来自粪便。在 44.5温度下能生长并发酵乳糖产酸气的大肠菌称为粪大便菌群。3.2 方法原理:用提高培养温度的方法,造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件,使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群,从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。3.3 注意事项:3.3.1 对化验室内部的质
2、量控制3.3.1.1 对化验室的要求细菌监测化验室要求通风良好,又能避免尘埃、过堂风和温度骤变,并保持室内空气高度清洁和化验室用具的整洁。化验室空间要合理利用,有专供培养基制备和灭菌以及玻璃器皿和其他器具消毒灭菌用的准备室和供应室,还要有供分装和制备无菌培养基、转移微生物培养的灭菌接种室。化验室内墙壁要刷漆覆盖,地板要使光滑和防透水材料,以便刷洗和消毒。化验室工作台应足够宽敞、高度适宜,台面应使用光滑、 防透水、 慵性的、 抗腐蚀的、 具有最少接缝的表面材料,室内照明要求均匀宜人。3.3.1.2 化验室业务负责人的要求应定期和不定期地对化验人员进行化验室基本操作和各项专业技术训练,应掌握样品的
3、采集和存放、培养基和玻璃皿的准备、 灭菌过程、 实验步骤、 细菌技术、 数据处理、 质量控制等方面,及时排除各类问题提高化验室工作成效。3.3.1.3 化验室器材、设备的校验温度计或温度记录仪器:每年至少校准一次,对培养箱、冰箱、恒温水浴所使用的温度计,应按国家标准校验,并将温度监测数据登记造册。天平:需使用最大载荷 100g、感量为 0.1g 的药物天平和最大载荷10g、 感量为 0.1mg 的分析天平。 需保持天平和载物盘的清洁,砝码应参照标准砝码定期校核。 PH 计:测定培养液的 pH 时,至少应精确到 0.1pH单位,使用时至少用两种标准缓冲液进行校准,并标注第一次起用标准缓冲液日期,
4、必要时应作温度校准。PH 标准溶液的制备见表一。表一 PH 标准溶液的制备 标准溶液( mol/L )25 的 PH 每 1000mL25 水溶液所需药品质量 基本标准:酒石酸氢钾(25饱和)3.557 6.4gKHC4H4O8柠檬酸二氢钾(0.05)3.776 11.41gKH3C8H5O7邻苯二甲酸氢钾(0.05)4.008 10.12gKHC8H4O7磷 酸 二 氢 钾 ( 0.025 ) + 磷 酸 氢 二 钠 ( 0.025 )6.865 3.388gKH2PO4+3.533gNa2HPO4磷 酸 二 氢 钾 ( 0.008695 ) + 磷 酸 氢 二 钠 ( 0.03043 )7
5、.413 1.179Gkh2PO4+4.302gNA2HPO4水硼酸钠(硼砂)(0.01)9.180 3.80gNa2B4O7+4.302gHNaCO3+2.640gNa2CO3碳酸氢钠(0.025)+碳酸钠(0.025) 10.0122.092gNaHCO3+2.640gNa2CO3辅助标准:二水草酸三氢钾(0.05) 1.67912.61gKH3C4O8.2H2O氢氧化钙 ( 25 饱和)12.454 1.5gCa ( OH )2注:用新煮沸冷却后蒸馏水配制(无二氧化碳)。电热干燥箱:应有足够的空间,能提供均匀适当的17010的灭菌温度,应配备 160180范围内能准确显示的温度计或温度记
6、录装置,每日必须进行温度的稳定性校验。高压蒸气灭菌器:每次使用时候,要在压力上升之前,必须先用蒸气将器内的冷空气完全驱尽,要记录温度、气压和灭菌的时间。应能提供均匀的高达 121的高压灭菌温度,每月可用芽孢试条和芽孢悬浮液或特制的热变色滤纸条检查灭菌效果。冰箱:箱内存放物品须标明名称、日期,每天检查和记录冰箱温度,每月清洁和消毒冰箱一次,至少每季清除一次存放过久无用物品。紫外灯灭菌:每月用浸有乙醇的湿布擦拭一次,每季用紫外光度计测量紫外灯光 2min,99%的菌数被杀死,否则,即应更换新灯。强度不少于初始值的 70%或用生长有200250 个细菌菌落的琼脂平皿暴露于紫外灯下恒温培养箱:须每天检
7、查二次,记录培养架上使用区的温度是否准确和稳定,温度变化不可超过0.5。恒温水浴箱:须每天检查和记录箱内温度,箱内存水应至少两周更换一次,并注意洗刷箱内沉积物。显微镜:应按操作方法使用,使用后用擦镜纸清洁光学玻璃部分和载物台,并罩好套子。3.3.1.4 化验室供应品的质量控制玻璃器皿:包括培养皿、 吸管、 量筒、 稀释瓶、 试管、 发酵管等均应是硼硅玻璃制品,必须洁净不附着任何残渍,应剔除已破损、有划痕或有气泡的器皿。用于标准平皿计数的培养皿直径为 90100mm;用于滤膜技术的应使用60mm15mm 的培养皿,底部要求平整光滑。所有吸管的上端要用少量普通棉花填塞,注意松紧适度,使其快速、准确
8、流出所需体积,试液每批校准误差不可超过 2.5%,发酵试管 应 视 水 样 量 确 定 , 一 般 取 10mL 水 样 时 , 试 管 为200mm25mm;水样量为 1mL 时,试管为 150mm15mm,在用于监测产酸产气情况时,要在试管内装 35mm6mm 的小套管,封闭端水不得漏气。纯水质量:细菌监测化验室用水的原料水应当是蒸馏水或纯水。试剂:必须使用纯度合格的试剂,以免试剂中不纯物质抑制或促进细菌的生长。购入或启用试剂要标明日期,配制好的试液要标明名称、浓度、配制人及配制日期,对任何系列培养试验或生化试验,要同时做阳性和阴性的对照培养。染料和着色剂:用于细菌监测的染料或着色剂,要求
9、具有适当的强度和稳定性,常用的商品染料,往往因货品批号不同,其含量、组分及所含的不溶物和惰性材料均有所不同,因此在染色前,宜先对至少一种阴性和阳性的对照培养试行染色,并记录结果。培养基:a.每批培养基在使用前,需经无菌监测。可将培养基置37 温箱内培养 24h 后,证明无菌,同时再用已知菌种检查在此培养基上生长繁殖情况,符合要求后方可使用。标准菌株的观察指标见表二。表二 标准菌株的观察指标培养基 细菌类别 发育观察指标 乳糖蛋白胨培养液 大肠杆菌 +产酸产气产碱杆菌 b.对每批培养基,要做阳性和阴性的对照培养检查试验,对照培养实例见表三表三 微生物监测的对照培养细菌类别 对照培养阳性粪 大 肠
10、 菌 类 大 肠 埃 希 氏 菌产气肠杆菌粪链球菌 c.配制每批培养基均要作好笔录,登记配制日期,批次培养基名称、成分、PH、灭菌条件、配制方法及配制人等。配制好的培养基,不宜存放过久,以少量配制为宜,可参照表5-2-5 所列的存放时间内能用完的量来制备培养基。表四 配制好的培养基的保存时间培 养 基保存时间 在 螺 盖 瓶 中 的 膜 滤 液 态 培 养 基 , 存 放 与 496h在 紧 皿 盖 的 平 皿 内 的 膜 滤 琼 脂 培 养 基 , 存 放 于 42 星期在 松 帽 试 管 内 的 琼 脂 或 液 态 培 养 基 , 存 放 于 41 星期在 紧 帽 试 管 内 的 琼 脂
11、或 液 态 培 养 基 , 存 放 于 43 个月倒入松皿盖的平皿内的琼脂培养基,放入塑料袋中,封好。存放于4 2星期在盖紧螺盖的大瓶中的大量琼脂培养基,存放于 43 个月 3.3.2 玻璃皿的洗涤和灭菌3.3.2.1 玻璃皿的洗涤新购置的玻璃器皿,因含游离碱,应先在 2%盐酸中浸泡数小时,用自来水冲洗干净,再用蒸馏水冲洗 12次并沥干。培养细菌的玻璃器皿,应先经高压蒸气灭菌,趁热倒出培养基,用热肥皂水或洗涤剂刷洗残渍,再用清水冲洗干净,最后用蒸馏水冲洗12 次,沥干。洗涤吸管时,可先置 3%来苏液内浸泡 30min 或高压蒸气灭菌,再用洗涤剂洗涤,用清水及蒸馏水冲洗干净。洗涤染色瓶时,可在
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- 大肠菌 指标 监测 规程 发酵
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