血清乳酸脱氢酶LDH速率法测定作业指导书.doc
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1、血血清清乳乳酸酸脱脱氢氢酶酶 L LD DH H 速速率率法法 测测定定作作业业指指导导书书 1 1. . 实实验验原原理理 VITROS LDH 试剂是一种干燥,多涂层的,在聚合 物支撑基片上涂有分析成份的化学干片。本法测LDH 采用丙酮酸和 NADH 作底物以产生乳酸和NAD+。 将一滴 10ul 的患者样品滴于干片上,样品就被分 布层均匀地分布并渗透到下面的试剂层。乳酸脱氢酶催 化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+。用反射强度变化 测出 NADH 的氧化率,再将其转化成乳酸脱氢酶的活力。 测定方式:速率法 波长: 340nm 测试时间和温度: 37约 5 分钟 反应过程: LDH
2、丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸 + NAD 2 2. . 标标本本: 2.1 病人准备:无特殊。 2.2 样品类型:血清;肝素锂 /钠抗凝血浆。 2.3 标本采集与处理: Vitros 测试血清和血浆的结果是一致的。而其它一 些方法由于在低速离心时血浆中血小板造成的污染,会 使血清和血浆的测试结果有明显差异。由于Vitros LDH 干片对完整血小板内的LDH 不敏感,因此对比方 法的 LDH 结果会与 Vitros 肝素抗凝血浆的测试结果不 一致。 样品采集后 1 小时内离心,然后吸出血清。处 理样品时要将其当成生物污染品。 3 3. . 标标本本的的存存放放 :血清、血浆室温下最多2
3、 天;不可 冷冻保存。 4 4. . 标标本本的的运运输输 :样品要放在带盖的容器内以防污染和 蒸发。 5 5. . 标标本本拒拒收收的的标标准准 :污染、溶血标本不能使用。 6 6. . 试试验验材材料料: 6.1 测试 AST 所需的物品包括: Vitros 化学定标物 Kit3;Vitros 特制质控液; Vitros 7%BSA 稀释液。 强生厂家提供原装进口,试剂盒外包装上标明了测 试项目名称,试剂标签代码,有效期限和储藏温度。 6.1.1 试剂组成:干片成分: 反应成份是 NADH 和丙 酮酸钠。其它成份有聚合物颗粒,粘合剂,缓冲剂,表 面活性剂,聚合物交叉连接剂和稳定剂。干片标记
4、:试 剂盒外包装上标明了测试项目名称,试剂标签代码,有 效期限和储藏温度。 6.1.2 试剂准备 从冰箱中取出干片盒,在将干片盒 打开封装并装入仪器内的干片储藏器之前必须使其达到 室温状态 1828。因此从冰箱中取出的试剂盒至少 要在室温下要放置60 分钟,而冷藏的试剂盒至少要在 室温下放置 30 分钟。去除内包装后立即将干片盒放入 仪器的储藏器中。说明:在试剂盒达到室温后的24 小时之内必须将其装入仪器中。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 未开封的干片盒:存储在 -18或低于该范围。说 明:为了缩短预温时间或者当冷冻空间有限时,未开封 的试剂盒在 28(3646oF)下最多可以保存4 周。 在
5、机内干片储藏器中的干片盒:在仪器上放置时间 不能超过 2 周,否则要更换新试剂。当仪器关闭时间不 超过 2 个小时时,可将干片盒留在储藏器中。出现以下 情形要做质控检测:仪器关闭时间超过2 小时;再次 装载从仪器储藏器中取出的干片盒。如果储藏正确, Vitros LDH 干片可保质到包装盒上标明的有效期限。 参见 VITROS 250 干化学分析仪试剂稳定性及贮存. SOP 文件。 6.1.4 变质指示:超过有效期的试剂干片不能使用。 6.1.5 注意事项:为避免干片盒打开以前其内包装受损, 不能摔打干片盒;不要让尖利物刺入内包装。 6.2 校准品:用 Vitros 化学定标物 Kit 3。血
6、清、血 浆都用相同的定标液,不过各自的SAVs 值不同。有 关标准液的配制,使用及保存的配制,保存和稳定的详 情,可参阅 VITROS250 干化学分析仪校准品和质控品. SOP 文件。 6.3 质控品:使用 Vitros 特制的质控物品;若使用 其它的一些质控物品,当与别的AST 测试方法比较时 就会出现差异,如:用人血清/血浆混合物分离制成的 质控物品;含有高浓度防腐剂,稳定剂和其它化学添加 剂的质控物品;猪或牛血清质控品的淀粉酶值会偏低, 还会因测试方法不同而变化;酶的活性可能会由于酶源, 稀释温度和复溶活化时间的不同而发生变化;乙烯乙二 醇作稳定剂的质控物品不能使用。 有关质控液的配制
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